Разработка метода обнаружения 15 пирролизидиновых алкалоидов в сорняках, почве, свежих чайных листьях и сухом образце чая может обеспечить техническую поддержку для изучения источника загрязнения пирролизидиновыми алкалоидами чая. По сравнению с твердофазной экстракцией, метод адсорбента для образца почвы может сэкономить время, снизить затраты и улучшить извлечение для анализа алкалоидов пирролизидина. Чтобы начать экстракцию на предварительно нагретых сушеных чайных продуктах, свежих чайных листьях или сорняках, взвесьте один грамм образца в 50-миллилитровой центрифужной пробирке и добавьте в пробирку 10 миллилитров 0,1 моль на литр раствора серной кислоты.
Затем встряхните образец в течение двух минут, если он должен быть проанализирован с использованием твердофазной экстракции, и в течение одной минуты, если то же самое должно быть проанализировано с помощью очистки адсорбентом. Затем образец подвергают ультразвуковой экстракции в течение 15 минут с последующим центрифугированием при 9, 390 G в течение 10 минут при комнатной температуре. Затем с помощью капельницы с пластиковым наконечником перенесите надосадочный раствор в 50-миллилитровую центрифужную пробирку.
Выполнив экстракцию дважды, соедините надосадочные жидкости в пробирке. Чтобы начать экстракцию на подготовленной почве, взвесьте один грамм образца в центрифужной пробирке объемом 50 миллилитров. Добавьте 0,1 миллилитра 0,1 моль на литр раствора тринатрийцитрата, чтобы отрегулировать рН почвы до 6,0, и дайте образцу постоять в течение двух минут.
Затем добавьте в пробирку 10 миллилитров 0,1 моль на литр раствора метанола серной кислоты и перемешивайте образец в течение двух минут, а затем встряхивайте в течение 30 минут. Затем выполните ультразвуковую экстракцию в течение 30 минут, как показано ранее. Затем центрифугируют пробу при 9,390 G в течение 10 минут.
И с помощью капельницы с пластиковым наконечником переведите надосадочную жидкость в 50-миллилитровую центрифужную пробирку. Выполнив экстракцию дважды, смешайте надосадочные жидкости. Активируйте твердофазную экстракцию или картридж SPE пятью миллилитрами метанола, а затем пятью миллилитрами деионизированной воды.
После активации добавьте 10 миллилитров надосадочной жидкости из образца экстракции в предварительно активированный картридж. После того, как уровень раствора образца достигнет верхнего слоя картриджей, разбавьте матрицу образца пятью миллилитрами 1% раствора муравьиной кислоты, а затем пятью миллилитрами метанола и выбросьте элюенты. Затем разбавьте аналиты пятью миллилитрами метанола, содержащего 0,5% аммиачной воды.
Отфильтруйте элюент через мембранный фильтр 0,22 микрона для анализа с помощью UPLC-MS / MS. Для очистки образца с помощью адсорбента подготовьте центрифужную пробирку объемом 10 миллилитров с адсорбентом, компрометирующим GCB, PSA и C18, в соотношении 10-20-15 миллиграммов. Затем добавьте два миллилитра надосадочной жидкости, полученной после обработки образца.
Затем перемешивают смесь образца и адсорбента в течение одной минуты и центрифугу при 9, 390 G в течение восьми минут при комнатной температуре. Отфильтруйте один миллилитр полученной надосадочной жидкости через мембранный фильтр 0,22 микрона во флакон с образцом перед анализом с помощью UPLC-MS/MS. В исследовании был получен более высокий процент извлечения 15 пирролизидиновых алкалоидов из свежих чайных листьев, высушенных образцов чая и сорняков с использованием метода очистки адсорбента по сравнению с картриджным методом SPE.
Извлечение алкалоидов в почве с использованием адсорбентной очистки составило от 79 до 111%В свежих чайных листьях, собранных на пяти участках отбора проб, было обнаружено более высокое содержание интермедина N-оксида, чем сенеционина. Сенесионин не был обнаружен в зрелых листьях с первого и второго участков отбора проб. Среди 11 пирролизидиновых алкалоидов в почве был обнаружен только интермединский N-оксид, в то время как сенесионин и интермедин N-оксид были обнаружены в разных частях чайных растений.
Кроме того, было обнаружено, что содержание N-оксида Intermedine в одной почке с двумя листьями является самым высоким. Пытаясь сделать это в первую очередь, самое главное - добавить 0,1 миллилитра 0,1 моль на литр раствора тринатрийцитрата, чтобы отрегулировать pH почвы до 6,0. Этот метод может быть применен к анализу алкалоидов в других съедобных растениях, а также обеспечивает естественную технику для изучения источника алкалоидов в них.
