Die Entwicklung einer Nachweismethode für 15 Pyrrolizidinalkaloide in Unkraut, Erde, frischen Teeblättern und trockenen Teeproben kann technische Unterstützung bei der Erforschung der Quelle der Kontamination mit Pyrrolizidinalkaloiden in Tee bieten. Im Vergleich zur Festphasenextraktion kann die Adsorptionsmethode für Bodenproben Zeit, geringere Kosten und bessere Ausbeute für die Analyse von Pyrrolizidinalkaloiden sparen. Um mit der Extraktion der vorgewärmten getrockneten Teeprodukte, frischen Teeblätter oder Unkräuter zu beginnen, wiegen Sie ein Gramm einer Probe in einem 50-Milliliter-Zentrifugenröhrchen und geben Sie 10 Milliliter 0,1 Mol pro Liter Schwefelsäurelösung in das Röhrchen.
Als nächstes wird die Probe zwei Minuten lang vortexiert, wenn sie mit Festphasenextraktion analysiert werden soll, und eine Minute lang, wenn sie mit Adsorptionsmittelreinigung analysiert werden soll. Anschließend wird die Probe 15 Minuten lang einer Ultraschallextraktion unterzogen, gefolgt von einer Zentrifugation bei 9.390 G für 10 Minuten bei Raumtemperatur. Übertragen Sie dann die überstehende Lösung mit einer Pipette mit Kunststoffspitze in ein 50-Milliliter-Zentrifugenröhrchen.
Nachdem Sie die Extraktion zweimal durchgeführt haben, kombinieren Sie die Überstände im Röhrchen. Um die Extraktion auf dem vorbereiteten Boden zu starten, wiegen Sie ein Gramm einer Probe in einem 50-Milliliter-Zentrifugenröhrchen. Fügen Sie 0,1 Milliliter 0,1 Mol pro Liter Trinatriumcitratlösung hinzu, um den pH-Wert des Bodens auf 6,0 einzustellen, und lassen Sie die Probe zwei Minuten lang stehen.
Geben Sie dann 10 Milliliter 0,1 Mol pro Liter Schwefelsäure-Methanollösung in das Röhrchen und wirbeln Sie die Probe zwei Minuten lang, gefolgt von 30 Minuten Schütteln. Führen Sie als Nächstes die Ultraschallextraktion 30 Minuten lang durch, wie zuvor gezeigt. Anschließend zentrifugieren Sie die Probe 10 Minuten lang bei 9.390 G.
Übertragen Sie den Überstand mit einer Pipette mit Kunststoffspitze in ein 50-Milliliter-Zentrifugenröhrchen. Nachdem Sie die Extraktion zweimal durchgeführt haben, kombinieren Sie die Überstände. Aktivieren Sie die Festphasenextraktion oder SPE-Kartusche mit fünf Millilitern Methanol, gefolgt von fünf Millilitern deionisiertem Wasser.
Nach der Aktivierung werden 10 Milliliter des Überstands aus der Probenentnahme in die voraktivierte Kartusche gegeben. Nachdem der Füllstand der Probenlösung die obere Schicht der Kartuschen erreicht hat, eluieren Sie die Probenmatrix mit fünf Millilitern 1%iger Ameisensäurelösung, gefolgt von fünf Millilitern Methanol, und verwerfen Sie die Eluenten. Anschließend werden die Analyten mit fünf Millilitern Methanol eluiert, das 0,5 % Ammoniakwasser enthält.
Filtern Sie den Eluenten durch einen 0,22-Mikron-Membranfilter, um ihn mittels UPLC-MS/MS zu analysieren. Um die Probenaufreinigung mit Adsorptionsmittel durchzuführen, bereiten Sie ein 10-Milliliter-Zentrifugenröhrchen vor, in dem das Adsorptionsmittel GCB, PSA und C18 im Verhältnis von 10 bis 20 bis 15 Milligramm enthält. Geben Sie dann zwei Milliliter des nach der Probenbehandlung gewonnenen Überstands hinzu.
Als nächstes wird die Mischung aus Probe und Adsorptionsmittel eine Minute lang gewirbelt und bei 9.390 G acht Minuten lang bei Raumtemperatur zentrifugiert. Filtrieren Sie einen Milliliter des resultierenden Überstands durch einen 0,22-μm-Membranfilter in ein Probenfläschchen, bevor Sie ihn mittels UPLC-MS/MS analysieren. In der Studie wurde eine höhere prozentuale Rückgewinnung von 15 Pyrrolizidinalkaloiden aus frischen Teeblättern, getrockneten Teeproben und Gras mit der Adsorptionsmittelreinigungstechnik im Vergleich zur SPE-Kartuschenmethode erzielt.
Die Wiederfindungsraten der Alkaloide im Boden mittels Adsorptionsmittelreinigung betrugen 79 bis 111 %.In den frischen Teeblättern, die an den fünf Probenahmestellen gesammelt wurden, wurde ein höherer Gehalt an intermedinem N-Oxid als an Senecionin nachgewiesen. Senecionin wurde in reifen Blättern der Probenahmestellen eins und zwei nicht nachgewiesen. Von den 11 Pyrrolizidinalkaloiden wurde nur intermedines N-oxid im Boden nachgewiesen, während Senecionin und intermedines N-oxid in verschiedenen Teilen der Teepflanzen nachgewiesen wurden.
Darüber hinaus wurde festgestellt, dass der Gehalt an Intermedine N-oxid in einer Knospe mit zwei Blättern am höchsten ist. Wenn Sie dies zuerst versuchen, ist es am wichtigsten, 0,1 Milliliter 0,1 Mol pro Liter Trinatriumcitratlösung hinzuzufügen, um den pH-Wert Ihres Bodens auf 6,0 einzustellen. Diese Methode kann auf die Analyse von Alkaloiden in anderen essbaren Pflanzen angewendet werden und bietet auch eine natürliche Technik zur Erforschung der Quelle von Alkaloiden in ihnen.
