جمع ديناميكي في الوقت الحقيقي للسائل خارج الخلية الحصين من الفئران الواعية باستخدام نظام غسيل الكلى

يساهم السائل خارج الخلية الحصين والحشد بواسطة تقنية غسيل الكلى في الدماغ في مراقبة المرض الدقيق للأمراض العصبية المركزية. يحقق غسيل الكلى الدقيق في الدماغ الديناميكي والمستمر محاكم التفتيش لسائل الدماغ الخلالي في مناطق معينة من الدماغ من الفئران غير المخدرة. ابدأ بتثبيت الجرذ المخدر على محدد موقع الدماغ التجسيمي وامسح المنطقة الجراحية المحلوقة بمسحة بوفيدون اليود والإيثانول ثلاث مرات قبل العملية.

ثم قم بعمل شق في الوجه القحفي بطول 1.5 سم أسفل المنتصف بمقص جراحي وقم بإزالة السمحاق باستخدام المقص الجراحي وملقط العيون. بالنظر إلى البريجما كموضع قاعدي ، فإن استخدام مثقاب الجمجمة يخترق داخل القحف لحفر فتحة 2 ملليمتر في منطقة الحصين CA1. الآن قم بتثبيت ستيليت القسطرة على قابض محدد موقع الدماغ التجسيمي واضبط موضع غلاف غسيل الكلى الدقيق في المواضع البطنية الأمامية الخلفية والمتوسطة والظهرية.

اضبط الصمام الظهري البطني لمحدد موقع ستيريو الدماغ وزرع غلاف غسيل الكلى الدقيق في منطقة CA1 على عمق 3.5 ملم. قم بحفر ثلاث فتحات أخرى بقطر 2 ملليمتر بحيث تشكل الفتحات الثلاث مثلثا توجد فيه فتحة المسبار في موقع مركزي. زرع مسامير في الفتحات على عمق ملليمتر واحد وإصلاح قسطرة التحقيق مع الاسمنت الأسنان.

ثم استخدم خياطة جراحية 4-O لإغلاق الجلد. قم بتوصيل المحقنة الدقيقة لمضخة غسيل الكلى بجهاز نشاط اليقظة ACSF ومجمع العينات المبردة وفقا لتعليمات الشركة المصنعة. بعد ذلك ، لتفريغ الهواء في خط الأنابيب ، اضبط مضخة غسيل الكلى بمعدل ميكرولتر واحد في الدقيقة.

ثم قم بتوصيل خط الأنابيب ومسبار غسيل الكلى الدقيق للدماغ وقم بتشغيل مضخة غسيل الكلى بمعدل ميكرولتر واحد في الدقيقة لحقن ACSF في المسبار حتى يصبح سطح المسبار رطبا قليلا. اغمر المسبار في محلول حقن الصوديوم الهيبارين للاستخدام اللاحق. لجمع HECF من الفئران المستيقظة ، أدخل مسبار غسيل الكلى المجهري في الدماغ في قسطرة المسبار وضع الجرذ في غرفة مع حشوة لضمان حرية الفئران في الحركة.

قم بتشغيل وحدة التحكم الدوارة متعددة القنوات لتجنب تشابك خطوط أنابيب غسيل الكلى الدقيقة أثناء الحركة الحرة للفئران. ثم قم بتشغيل مضخة الحقن الدقيقة وضخ ACSF بمعدل ميكرولتر واحد في الدقيقة. بعد موازنة 60 دقيقة لنظام جمع HECF لغسيل الكلى ، قم بجمع HECF بشكل دوري.

بعد إنهاء أخذ العينة، أخرج مسبار غسيل الكلى المجهري للدماغ من قسطرة المسبار. اغمر المسبار في ماء منزوع الأيونات واغسله بالماء منزوع الأيونات لمدة 12 ساعة لإزالة ترسبات الملح العالقة من خط الأنابيب والمسبار. قم بإزالة المسبار ووضعه في محلول تريبسين 0.05٪ عند أربع درجات مئوية.

السائل خارج الخلية الحصين المكتسب بتقنية غسيل الكلى في الدماغ يشبه الماء وعديم اللون وشفاف بمعدل أخذ العينات المحدد. أهم الإجراءات هي زرع غسيل الكلى الدقيق بعناية في منطقة CA1 وإدخال المسبار في قسطرة البوب. تتيح تقنية غسيل الكلى الدقيقة ببساطة المساعدة في التغيير الديناميكي لعلامات المرض في مناطق معينة من الدماغ ، وجوهر فعالية الدواء ، وهدم الأنسجة لمكونات الدواء.