برز تقييد توقيت تناول الطعام كتدخل واعد لتخفيف الأمراض الأيضية التي يسببها النظام الغذائي. يفصل هذا البروتوكول بناء واستخدام نظام فعال ، تم بناؤه داخليا ، لقياس ومعالجة تناول الطعام الإيقاعي في الفئران. الميزة الرئيسية للنظام هي أنه نظام منخفض التكلفة وفعال يمكن بناؤه باستخدام مواد ميسورة التكلفة ، مع كونه سهل الاستخدام في نفس الوقت.
يمكن استخدام هذا النظام لإطعام الفئران على أنظمة تغذية مختلفة ، مثل الجداول الزمنية أو المقيدة بالوقت أو عدم انتظام ضربات القلب ، ويمكن أن يتضمن نظاما غذائيا عالي الدهون لدراسة آثارها على علم وظائف الأعضاء. للبدء ، قم بشراء أربع قطع من صفائح PVC مقاس 0.25 بوصة. قطع والغراء أربع قطع من PVC للحصول على القاعدة.
بعد ذلك ، افتح المؤقت لإزالة القابس ، وقم بإجراء اتصال باستخدام امتداد قياسي أو سلك كهربائي. ضع المؤقت على قاعدة PVC لمواءمته مع الثقوب المحفورة فيه ، وقم بإصلاحه باستخدام مسامير مقاس 1.5 بوصة. قم بحفر أربعة ثقوب أعلى المؤقت ، وقم بتثبيت مسامير مقاس 0.75 بوصة لتثبيت حاوية الطعام المكونة من ثماني حجرات.
استخدم قفص فأر بعرض أكبر من 4.5 بوصة ، وقم بقطع فتحة 4.5 بوصة في أسفل القفص ، باستخدام منشار ثقب. ثم اصنع موزع طعام باستخدام منظم مجوهرات مقاس أربع بوصات وثماني حجرات. قطع حافة الحاوية ، بحيث تناسبها بشكل جيد في الأنبوب.
استخدم غطاء أنبوب PVC مقاس أربع بوصات وقم بقطع فتحة تتوافق مع حجم حجرة موزع واحدة لإنشاء فتحة تكشف واحدة فقط من المقصورات الثمانية في المرة الواحدة. بمجرد ضبط جميع الأقفاص ، يكون الإعداد النهائي جاهزا. لتسهيل النقل ، خذ ثلاث قطع من الأنابيب البلاستيكية مقاس 0.25 بوصة ، وحفر حفرة مقاس 0.625 بوصة في وسط قطعتين وألصقها معا.
ثم قم بتمرير أنبوب PVC مقاس 0.625 بوصة من خلالها. يمكن بعد ذلك تكديس أكواب الطعام على هذه المجموعة. قم بتقييم المؤقتات قبل إدخال الفئران عن طريق توصيل الإعداد بمنافذ الطاقة.
ضع قطعة من نستله في حجرة واحدة في وقت مسجل ، وراقب موضع نستله بعد ست ساعات للتأكد من أن المؤقت يدور على الفور. انقل الماوس إلى الغرفة التجريبية وتأقلم مع مجموعة دورة الضوء والظلام ، كما هو موضح في المخطوطة. سجل وزن الماوس قبل وضعه بشكل فردي في أقفاص التغذية ، وتأكد من أن الماوس لديه إمكانية الوصول إلى الماء والفراش والأعشاش.
أضف 1.5 جرام من الطعام إلى جميع المقصورات الثمانية لكوب التغذية وضع كوب التغذية على المؤقت. ثم ضع الغطاء على كوب التغذية ، بحيث يتم الكشف عن حجرة واحدة فقط. تمثل أربع مقصورات نقاط النهار ، والأربعة الأخرى تمثل نقاطا ليلية.
قم بتغيير الطعام كل يوم في نفس الوقت ، واحسب عدد الكريات المتبقية في كل حجرة لحساب كمية الطعام المستهلكة. راقب ملف التغذية لمدة أسبوع للحصول على ملف تعريف التغذية الأساسي للفئران التي تتغذى على libitum وللنظام الغذائي المقيد ليلا. بعد ثلاثة إلى سبعة أيام من النظام الغذائي الإعلاني ، ضع الماوس على نظام غذائي انتقالي عن طريق تقليل عدد الكريات تدريجيا في مقصورات اليوم.
راقب تناول الطعام لمدة أسبوعين بعد تكيف الفأر مع النظام المقيد ليلا. خلال هذه الفترة ، اضبط كمية الطعام المعطاة لكل فأر لتناسب بشكل أفضل إجمالي استهلاكه الغذائي. وزن الفأر في نهاية الأسبوعين لمراقبة أي تغير في الوزن بسبب نظام التغذية.
بعد أسبوع من النظام الغذائي الإعلاني ، احسب متوسط الاستهلاك اليومي للطعام وكمية الطعام التي سيتم توفيرها في كل حجرة ، كما هو موضح في المخطوطة. تحقيق التغذية غير النظامية من خلال ضمان حصول الفئران على كمية متساوية من الطعام في جميع المقصورات الثمانية على مدار اليوم. ثم ضع الفئران على نظام غذائي انتقالي عن طريق التقليل التدريجي لكمية الطعام المقدمة لكل حجرة ، على مدى ثلاثة إلى خمسة أيام ، لإلغاء أي إيقاع لتناول الطعام.
أثناء اتباع نظام غذائي غير منتظم ، اضبط الطعام يوميا للتأكد من أن الفئران لا تترك سوى عدد قليل من الكريات وراءها وتحصل على الكمية المناسبة من الطعام. قم بإجراء التعديلات كما هو موضح في المخطوطة. لمراقبة أي تغيير في الوزن بسبب نظام التغذية ، قم بوزن الماوس في نهاية الأسبوعين.
يشير ملف تعريف التغذية إلى أن الفئران البرية التي تتغذى على الطعام العادي تأكل حوالي 75٪ من طعامها أثناء الليل. تناولت الفئران التي تغذت على نظام غذائي عالي الدهون المزيد من الطعام في اليومين الأولين من التعرض ، على الأرجح بسبب حداثة النظام الغذائي عالي الدهون. متوسط تناول الطعام اليومي كل ثلاث ساعات.
كان متوسط ونسبة تناول الطعام خلال النهار والليل للفئران التي تتغذى على نظام غذائي عادي أو نظام غذائي عالي الدهون قابلا للمقارنة. أظهرت الفئران الذكور زيادة كبيرة في الوزن بعد أسبوع واحد من الطعام العادي والنظام الغذائي عالي الدهون. الفئران التي انتقلت إلى نظام غذائي مقيد ليلا تناولت إجمالي السعرات الحرارية اليومية فقط في الليل ، دون تقليل السعرات الحرارية بشكل كبير خلال الأسابيع الثلاثة إلى الخمسة الأولى.
استهلكت الفئران التي انتقلت إلى نظام غذائي غير منتظم إجمالي السعرات الحرارية اليومية بكميات متساوية على مدار اليوم ، مما أدى إلى تثبيط إيقاع تناول الطعام اليومي بشكل كبير. أظهرت الفئران زيادة في الوزن بعد نظام التغذية المقيد ليلا وعدم انتظام ضربات القلب. أهم شيء يجب تذكره عند استخدام نظام التغذية هذا هو التأكد من أن المؤقتات تعمل بشكل مناسب طوال التجربة.
باستخدام نظام التغذية هذا ، يمكن للباحثين تخصيص توصيل الطعام وفقا لمتطلباتهم ، مما قد يساعدهم في النهاية في الإجابة على أسئلة حول آثار أوقات الوجبات المتنوعة على الصحة والمرض.
