مقايسة تفاعل البلمرة المتسلسل الرقمي للقطرات القابلة للتحقق من صحتها للكشف عن النواقل الفيروسية المرتبطة بالغدي في دراسات الدموع البيولوجية

يحدد بروتوكولنا النواقل الفيروسية المرتبطة بالغدي في المصفوفات المعقدة. يعد الكشف الدقيق والقياس الكمي ضروريين لتقييم أدائها في التجارب السريرية. يسعى هذا البروتوكول على وجه التحديد إلى سد الثغرات التنظيمية الحالية في تصميم الدراسات الجزيئية المتوافقة مع الممارسات المختبرية الجيدة.

كجزء من تطوير النواقل الفيروسية ، تتطلب الوكالات التنظيمية تقييم التساقط الحيوي للنواقل الحيوية. ddPCR هي تقنية واعدة لهذا التقييم لأنها تسمح بالقياس الكمي الدقيق دون استخدام منحنى قياسي وحساسية محسنة مقارنة ب qPCR. قد يكون من الصعب التحقق من صحة القياس الكمي الدقيق في المصفوفات المعقدة التي تمت مواجهتها في البيئات السريرية ، مثل التمزقات ، بسبب تداخل تفاعل البوليميراز المتسلسل وتثبيطه.

يمكن أن تحد كميات العينات السريرية المحدودة أيضا من القدرة على اكتشاف الأحداث النادرة إذا لم يكن الفحص حساسا بدرجة كافية. يطور نهجنا إطارا قائما على ddPCR قابلا للتكرار وقابل للتكيف للتحقق من صحة المقايسات لاستخدامها في الدراسات المنظمة. تتجنب هذه الطريقة خطوة محددة لاستخراج الحمض النووي ، مما يسمح بالتحقق من الصحة بشكل أكثر بساطة وتوفر معايير واضحة لتقييم أداء الفحص لضمان المتانة والتكرار.

هذا البروتوكول لديه القدرة على تطبيقه على أي دراسة لتساقط النواقل الفيروسية ، وليس فقط اكتشاف AAV في الدموع ، كما هو موضح هنا. إنه يخلق إطارا قويا وقابلا للتكرار يمكن من خلاله تطوير العديد من البرامج المنظمة المناسبة للغرض.