作者聚焦：通过定量复杂基质中的病毒载体来解决分子研究中的监管差距

我们的实验方案量化了复杂基质中腺相关病毒载体。准确的检测和定量对于评估其在临床试验中的表现至关重要。该协议专门寻求填补当前在设计良好实验室规范的符合分子研究方面的监管空白。

作为病毒载体开发的一部分，监管机构要求评估载体生物脱落。ddPCR是这种评估的一种很有前途的技术，因为它可以在不使用标准曲线的情况下进行准确的定量，并且与qPCR相比提高了灵敏度。由于PCR干扰和抑制，在临床环境中遇到的复杂基质（如撕裂）中准确定量可能难以验证。

如果检测不够灵敏，有限的临床样本量也会限制检测罕见事件的能力。我们的方法开发了一种可重复且适应性强的基于ddPCR的框架，以验证用于监管研究的测定。该方法避免了特定的DNA提取步骤，允许更简化的验证，并提供明确的标准来评估分析性能，以确保稳定性和可重复性。

该协议有可能应用于任何病毒载体脱落研究，而不仅仅是检测眼泪中的AAV，如此处所述。它创建了一个强大且可重复的框架，在此框架上可以开发多个适合目的的受监管计划。