눈물의 바이오셰딩 연구에서 아데노 관련 바이러스 벡터의 검출을 위한 검증 가능한 액적 디지털 중합효소 연쇄 반응 분석

우리의 프로토콜은 복잡한 매트릭스에서 아데노 관련 바이러스 벡터를 정량화합니다. 정확한 검출 및 정량화는 임상 시험에서 성능을 평가하는 데 필수적입니다. 이 프로토콜은 특히 우수 실험실 관행 준수 분자 연구 설계에서 현재의 규제 격차를 메우기 위해 노력합니다.

바이러스 벡터 개발의 일환으로, 규제 기관은 벡터 바이오 쉐딩에 대한 평가를 요구합니다. ddPCR은 표준 곡선을 사용하지 않고도 정확한 정량을 가능하게 하고 qPCR에 비해 감도가 향상되기 때문에 이 평가를 위한 유망한 기술입니다. 눈물과 같은 임상 환경에서 발생하는 복잡한 매트릭스의 정확한 정량화는 PCR 간섭 및 억제로 인해 검증하기 어려울 수 있습니다.

제한된 임상 샘플의 양은 분석이 충분히 민감하지 않은 경우 희귀 사건을 검출하는 능력을 제한할 수도 있습니다. 우리의 접근 방식은 규제 연구에 사용하기 위한 분석을 검증하기 위해 반복 가능하고 적응 가능한 ddPCR 기반 프레임워크를 개발합니다. 이 방법은 특정 DNA 추출 단계를 피하여 보다 간소화된 검증을 가능하게 하고 견고성과 반복성을 보장하기 위해 분석 성능을 평가할 수 있는 명확한 기준을 제공합니다.

이 프로토콜은 여기에 제시된 바와 같이 눈물에서 AAV를 검출하는 것뿐만 아니라 모든 바이러스 벡터 흘리기 연구에 적용될 가능성이 있습니다. 목적에 맞는 여러 규제 프로그램을 개발할 수 있는 강력하고 반복 가능한 프레임워크를 만듭니다.