Gözyaşlarının Biyodökülme Çalışmalarında Adeno-İlişkili Viral Vektörlerin Tespiti için Doğrulanabilir Bir Damlacık Dijital Polimeraz Zincir Reaksiyonu Testi

Protokolümüz, karmaşık matrislerdeki adeno ilişkili viral vektörleri nicelleştirir. Doğru tespit ve niceliklendirme, klinik çalışmalardaki performanslarını değerlendirmek için esastır. Bu protokol özellikle iyi laboratuvar uygulamalarının uyumlu moleküler çalışmalarının tasarımındaki mevcut düzenleyici boşlukları doldurmayı amaçlamaktadır.

Viral vektör gelişiminin bir parçası olarak, düzenleyici kurumlar vektör biyo-dökülmesinin değerlendirilmesini gerektirir. ddPCR, standart bir eğri kullanmadan doğru nicelemeye ve qPCR'ye kıyasla gelişmiş hassasiyete izin verdiği için bu değerlendirme için umut verici bir teknolojidir. Gözyaşları gibi klinik ortamlarda karşılaşılan karmaşık matrislerde doğru nicelleştirme, PCR girişimi ve inhibisyonu nedeniyle doğrulanması zor olabilir.

Sınırlı klinik numune miktarları, tahlil yeterince hassas değilse, nadir olayları tespit etme yeteneğini de sınırlayabilir. Yaklaşımımız, düzenlenmiş çalışmalarda kullanılmak üzere tahlilleri doğrulamak için tekrarlanabilir ve uyarlanabilir ddPCR tabanlı bir çerçeve geliştirir. Bu yöntem, belirli bir DNA ekstraksiyon adımından kaçınarak daha akıcı doğrulamaya izin verir ve sağlamlık ve tekrarlanabilirliği sağlamak için tahlil performansını değerlendirmek için net kriterler sağlar.

Bu protokol, burada sunulduğu gibi, sadece gözyaşlarında AAV'nin tespitine değil, herhangi bir viral vektör dökülme çalışmasına uygulanma potansiyeline sahiptir. Birden fazla amaca uygun, düzenlenmiş programın geliştirilebileceği sağlam ve tekrarlanabilir bir çerçeve oluşturur.