تسليط الضوء على المؤلف: تعزيز تحضير عينة CryoEM باستخدام طبقة الجرافين أحادية الطبقة على شبكات الفحص المجهري

يتمثل التحدي الشائع في تحضير عينة المجهر الإلكتروني بالتبريد في توطين الجسيمات عند واجهة الهواء والماء ، مما يتسبب في تبني الجسيمات للاتجاهات المفضلة وتشويهها. بدلا من ذلك ، من الأفضل أن تستقر الجسيمات على سطح الشبكة ، والتي يدعمها الغشاء الرقيق ، مثل تعزيز الجرافين. وثمة تحد آخر يتمثل في اشتراط تركيزات عالية نسبيا من العينات، وهو ما يمكن معالجته أيضا بالغرافين.

توفر الشبكات المطلية بالجرافين العديد من المزايا لتحديد هيكل cryoEM ، ولكن كان من الصعب تاريخيا تصنيعها داخليا بشكل متكرر ، فضلا عن التكلفة الباهظة للشراء تجاريا. يسمح هذا البروتوكول بالترسب القوي للجرافين أحادي الطبقة ، وبالتالي تقليل الحاجز أمام المستخدمين الذين يستخدمون هذه الشبكات في أبحاثهم. الجرافين فريد من نوعه بسبب خصائصه المادية.

إنها طبقة أحادية من الكربون وبالتالي تظهر الحد الأدنى من ضوضاء الخلفية. لا يمكن تطبيق دعامات شبكة cryoEM الأخرى مثل طبقة رقيقة من الكربون غير المتبلور أو رقائق أكسيد الجرافين كطبقة أحادية واحدة وتساهم في المزيد من إشارة الخلفية. الآن بعد أن أنشأنا بروتوكولا قويا لتطبيق الجرافين على شبكات cryoEM ، نود متابعة تشغيل الشبكات المطلية بالجرافين بمقابض تقارب للالتقاط على الشبكة مباشرة من محللات الخلايا.

هذا يمكن أن يخفف من عنق الزجاجة آخر في إعداد عينة cryoEM.