وحظي هذا العمل بدعم من "الجمعية الفرنسية للمخدرات والإنعاش" (باريس، فرنسا)، و"مؤسسة المشاريع في جينافي" (نانت، فرنسا)، و"الاتحاد الفرنسي لأمراض القلب" (فرنسا)، و"الوكالة الوطنية للبحوث" (20-ASTC-0032-01-hErOiSmE) (باريس، فرنسا)، و"المديرية العامة للسلاح" (باريس، فرنسا). حصل توماس دوباس على دعم من منح من الإدارة العامة للأسلحة (DGA) ، فرنسا و Région des Pays de la Loire خلال درجة الدكتوراه. تم دعم أنطوان بيرسيلو بمنح من InFlectis BioScience ، فرنسا خلال درجة الدكتوراه. نشكر "الوكالة الوطنية للبحوث" (باريس، فرنسا)، و"المديرية العامة للتسليح" (باريس، فرنسا)، وجمعية "Sauve ton coeur" (فرنسا) على دعم هذا العمل. نشكر المرفق الأساسي UTE IRS-UN (SFR BONAMY ، جامعة نانت ، نانت ، فرنسا) ومرفق IBISA الأساسي Therassay (نانت ، فرنسا) على مساعدتهم ودعمهم الفني.

تمت الموافقة على جميع الإجراءات وتنفيذها وفقا للجنة الأخلاقيات الإقليمية (البروتوكول (# 17858 و # 32499 ، CEEA-Pays de la Loire ، فرنسا) وفقا للتوجيه 2010/63 / EU للاتحاد الأوروبي. يتوافق الإبلاغ مع إرشادات REACH الحالية ودليل المعاهد الوطنية للصحة (NIH) لرعاية واستخدام المختبر (NIH Pub. No. 85-23 ، المنقح 2011).
1. الوضع الأخلاقي والمعلومات العامة عن الفئران
<ol><li>تم تسليم ذكور فئران Wistar Han (نهر تشارلز ، سان جيرمان نويل ، فرنسا) إلى Unité Thérapeutique Expérimentale في عمر 10 أسابيع. إيواء الفئران لمدة أسبوع واحد على الأقل تحت درجة الحرارة القياسية (21-24 درجة مئوية) ، والرطوبة (40٪ -60٪) ، ودورة الضوء / الظلام لمدة 12 ساعة مع فترة إضاءة تبدأ في الساعة 07:30 صباحا.</li>
	<li>توفير الغذاء والماء حسب الطلب. استخدم الفئران البالغة من العمر 11-13 أسبوعا والتي تزن 300-400 جم للبروتوكول.</li>
</ol>2. خطوات إعداد الغرفة وإعدادها
<ol><li>قم بتشغيل محطة التخدير ، واضبط حصيرة التدفئة على 37.5 درجة مئوية ، وقم بتغطيتها بستارة غير معقمة.</li>
	<li>تعقيم الأدوات الجراحية المطلوبة للبروتوكول: ملقط DeBakey غير الرضحي (1) ، مقص أو مشرط ناعم وحاد (1) ، ملقط نمط قياسي (2) ، حاملات إبرة (1) ، مقص تشريح صغير Vannas (1) ، مشبك (1).</li>
	<li>تحضير القسطرة للوريد الوداجي والشريان الفخذي.<ol><li>بالنسبة لقسطرة الوريد الوداجي ، قم بتركيب أنبوب البولي إيثيلين (PE) (PE50) على إبرة 23 G مع قطع الطرف في النهاية.</li>
		<li>بالنسبة لقسطرة الشريان الفخذي، قم بإعداد القسطرة الموضحة في الخطوة 2.3.1 وقم بتوصيل أنبوب PE10 بنهاية أنبوب PE50.</li>
	</ol></li>
	<li>قم بإعداد محول الضغط والقسطرة للشريان الفخذي والوريد الوداجي عن طريق ملئه بمحلول رينغر المرضع الهيبارين عند 100 وحدة دراسية / مل. ضع حقنة سعة 2 مل تحتوي على محلول رينغر المرضع عند 100 وحدة دراسية / مل في نهاية القسطرة ومحول الضغط. احرص على عدم الحصول على أي فقاعات ، لأنها تسبب عيوبا في الإشارة.</li>
	<li>قم بتشغيل البرنامج المرتبط بمحول الضغط وقم بمعايرته وفقا لتعليمات المورد.</li>
</ol>3. إعداد الفئران للجراحة
<ol><li>تخدير الفئران بصندوق تحريض (المعلمات: سيفوفلوران 8٪ ، معدل تدفق الهواء: 1 لتر / دقيقة). بعد التحقق من عمق التخدير عن طريق منعكس الدواسة ، حافظ على التخدير عند سيفوفلوران 4٪ ، بمعدل تدفق هواء 0.6 لتر / دقيقة. تم تجنب استخدام المسكنات قبل الجراحة بسبب التأثيرات الديناميكية الدموية لهذه الجزيئات. ملاحظة: من هذه الخطوة ، يتم تقييم عمق التخدير كل 20 دقيقة عبر منعكس الدواسة.</li>
	<li>وزن الفئران ، ووضعها في وضع الاستلقاء الظهري على حصيرة التدفئة ، وإزالة الشعر في المناطق الأربية والرقبة.</li>
	<li>تطهير المناطق التي تم إزالة الشعر منها بالتناوب 10 ٪ و 4 ٪ من محاليل البوفيدون اليود (3 مرات لكل منهما) باستخدام منصات الشاش غير المعقمة.</li>
	<li>ضع قطرة من مرهم العيون على عيون لمنع الجفاف.</li>
	<li>ضع الجرذ على حصيرة التدفئة على طاولة الجراحة (الاستلقاء الظهري). ضع مسبار المستقيم المشحم للتحكم في درجة حرارة الفئران. الحفاظ على التخدير عند سيفوفلوران 4٪ ، بمعدل تدفق هواء 0.6 لتر / دقيقة.</li>
	<li>قم بتغيير القفازات للقفازات المعقمة ، ضع الستارة المعقمة على الفئران ، وقم بقصها في المناطق الأربية والرقبة.</li>
</ol>4. قنية الوريد الوداجي
<ol><li>حدد موقع المنطقة الوداجية في منطقة الرقبة اليمنى السفلية ، فوق الترقوة ، عن طريق النبض المرئي. باستخدام ملقط DeBakey غير الرضحي ، أمسك الجلد برفق ، ثم قم بعمل شق دقيق باستخدام مقص دقيق وحاد أو مشرط.</li>
	<li>ضع قطرة من المخدر الموضعي (يدوكائين 2٪) على المنطقة المحززة. قطع الأنسجة برفق باستخدام ملقط نمط قياسي.</li>
	<li>حدد موقع الوريد الوداجي وحرره برفق من حجرته العضلية باستخدام ملقط نمط قياسي. ضع خيط خياطة حريري 4/0 واربط الجانب البعيد بإحكام (باتجاه الرأس). استخدم الخيط مع حاملات الإبرة لشد الوريد الوداجي.</li>
	<li>ضع خياطة 4/0 على الجانب القريب (باتجاه القلب) وقم بإعداد عقدة الجراح دون شدها. قم بعمل شق صغير في الوريد الوداجي باستخدام مقص تشريح Vannas الصغير.</li>
	<li>بعد إمساك جدار الوريد بعناية باستخدام ملقط صغير ، أدخل قسطرة PE50 في الوريد الوداجي باليد أو باستخدام ملقط نمط قياسي. في هذه المرحلة ، استخدم وسادة شاش معقمة لمسح قطرات الدم النهائية ، والتي قد تتسرب من الوريد.</li>
	<li>تقدم القسطرة قليلا (0.5 سم) وتحقق من وضعها الصحيح في الوريد عن طريق سحب كمية صغيرة من الدم ثم إعادة حقنها (يشير الدم في القنية إلى أنها في الوريد). شد العقدة المعدة مسبقا لتأمين القسطرة.</li>
	<li>اترك القسطرة في مكانها ، متصلة بحقنة مملوءة مسبقا بمحلول رينغر المرضع ، وقم بتغطية المنطقة المحفورة بقطعة شاش معقمة مبللة.</li>
</ol>5. قنية الشريان الفخذي
<ol><li>استخدم ملقط DeBakey غير الرضحي للإمساك بجلد مثلث Scarpa في الساق اليسرى وإجراء شق بمقص دقيق وحاد أو مشرط. ضع قطرة من المخدر الموضعي (يدوكائين 2٪) على المنطقة المحززة. قم بتوسيع الأنسجة بلطف باستخدام ملقط النمط القياسي.</li>
	<li>حدد موقع ثالوث الفخذ (الشريان والوريد والعصب). مرر ملقط واحد تحت الثالوث ، وباستخدام ملقط النمط القياسي الثاني ، افصل الشريان بلطف شديد عن العصب والوريد الفخذي. ملاحظة: الشريان أصغر ، وردي ، ونابض. وهذه خطوة حاسمة. الوريد والشريان هشان ويمكن أن يتمزقا بسهولة.</li>
	<li>ضع خياطة 4/0 واربط الشريان الفخذي بعيدا (جانب الساق). خذ الخيط مع حاملات الإبرة لوضع الشريان الفخذي في التوتر. ضع خياطة 4/0 على الجانب القريب (جانب القلب) وقم بإعداد عقدة دون إغلاقها. قم بتثبيت الشريان (ضع المشبك في اتجاه المنبع من الخيط الجانبي القريب).</li>
	<li>شق الشريان الفخذي بشكل عرضي باستخدام مقص تشريح Vannas الصغير (يجب أن تتدفق كمية صغيرة من الدم من الشريان). باستخدام ملقط النمط القياسي ، أمسك جدار الشريان برفق وقم بقنية الشريان الفخذي بالقسطرة (انتهى PE10) ، وأمسكه بالملقط.</li>
	<li>قم بفك المشبك برفق للتحقق من وجود تسرب ثم تحقق من إشارة الضغط (للتحقق من وجود القسطرة في الشريان الفخذي) ، وتأكد من أن الدم لا يتدفق مرة أخرى إلى القسطرة (علامة التسرب من الصمامات / محول الضغط).</li>
	<li>إذا كانت الإشارة جيدة (القيم المتوقعة: ضغط الدم الانقباضي: 120 مم زئبق ، ضغط الدم الانبساطي: 80 مم زئبق) ولا توجد علامات تسرب ، فقم بدفع القسطرة قليلا (0.5 سم) وشد عقدة الجراح المعدة مسبقا.</li>
	<li>قم بتهوية عند 100 وحدة دولية / كجم وضع وسادة شاش معقمة مبللة على المنطقة المحززة. بعد الجراحة ، يجب الحفاظ على التخدير عند سيفوفلوران 3٪ بمعدل تدفق هواء 0.6 لتر / دقيقة.</li>
</ol>6. بروتوكول الصدمة النزفية (الشكل 1)
<ol><li>المرحلة 1: الاستقرار (5 دقائق).<ol><li>بعد الهيفارين ، انتظر 10 دقائق حتى تستقر قيم الضغط. قم بعمل تسجيل لمدة 5 دقائق لقيم الدورة الدموية القاعدية.</li>
	</ol></li>
	<li>المرحلة 2: الاستنزاف (5 دقائق): ملاحظة: تتوافق هذه المرحلة مع مرحلة الحجم الثابت للنموذج.<ol><li>سحب 5 مل من الدم من الشريان الفخذي على مدى 5 دقائق (500 ميكرولتر / 30 ثانية) باستخدام حقنة 1 مل (القيم المتوقعة: ضغط الدم الانقباضي: 45 مم زئبق ، ضغط الدم الانبساطي: 30 مم زئبق).</li>
		<li>تحضير مزيج من محلول رينغر المرضع 50 ٪ مع 50 ٪ من الدم الذي تم جمعه في درجة حرارة الغرفة. ضع الخليط في حقنة سعة 2 مل وضعه في نهاية قنية الوريد الوداجي.</li>
	</ol></li>
	<li>المرحلة 3: صدمة نزفية (75 دقيقة) ملاحظة: هذه المرحلة هي مرحلة الضغط الثابت للنموذج.<ol><li>الحفاظ على متوسط الضغط الشرياني بمعدل 35 مم زئبق. عندما يكون متوسط الضغط الشرياني أكثر أو يساوي 38 مم زئبق ، اسحب 200 ميكرولتر من الدم عبر الشريان الفخذي (يعني على n = 12 فأرا: 10.2 مل).</li>
		<li>إذا انخفض متوسط الضغط الشرياني إلى أقل من 32 مم زئبق ، فقم بحقن 200 ميكرولتر من خليط محلول رينغر المرضع بنسبة 50٪ من الدم و 50٪ عبر الوريد الوداجي (المتوسط على n = 12 فئران: 0.90 مل).</li>
		<li>قياس لاكتات الدم المحيطية على قطرة دم من نهاية الذيل باستخدام طرف إبرة (26 جم) بعد التحضير المعقم للذيل مع وسادة شاش في نهاية مرحلة الصدمة النزفية.</li>
	</ol></li>
	<li>المرحلة 4: إنعاش السوائل عن طريق الوريد (20 دقيقة)<ol><li>الإنعاش بمحلول رينغر المرضع في درجة حرارة الغرفة (RT) عند 10 مل/كغ خلال 20 دقيقة (معدل تدفق 10.5 مل/ساعة لفأر 350 جم) باستخدام حقنة سعة 20 مل من خلال القسطرة الوداجية بمضخة حقنة.</li>
	</ol></li>
</ol>7. نهاية الجراحة والتعافي والمتابعة بعد الجراحة
<ol><li>قم بتثبيت الوريد الوداجي والشريان الفخذي وإزالة القسطرة. سفن الليجيت. تحقق بعناية من عدم تسرب الدم.</li>
	<li>أضف قطرة من المخدر الموضعي إلى المناطق المحززة. خياطة المناطق المحفورة مع غرز تحت الجلد والجلد باستخدام خياطة معقمة 5-0. تطهير مع 10 ٪ محلول البوفيدون اليود.</li>
	<li>حقن البوبرينورفين تحت الجلد (0.05 ملغ/كغ، 0.3 مل/كغ) باستخدام حقنة سعة 1 مل بإبرة 26 جم.</li>
	<li>انتظر حتى يفطم الجرذ عن التخدير أثناء مراقبة درجة الحرارة. عندما تظهر علامات الاستيقاظ (حركة الاهتزازات ، حركات المخلب) ، قم بإزالة مسبار المستقيم ووضع الجرذ في قفصه على حصيرة التدفئة. بعد 10 دقائق ، أعد الجرذ إلى غرفة إقامته.</li>
	<li>تطبيق البوبرينورفين تحت الجلد (0.05 ملغ/ كغ، 0.3 ملليلتر/ كغ) كل 8 ساعات.</li>
	<li>قيم معدل التنفس والسلوك ودرجة الحرارة ولاكتات الدم بعد 16 ساعة من تحريض الصدمة النزفية، كما هو موضح في الخطوة 6.3.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66523/66523fig01.jpg"> الشكل 1: نموذج لصدمة نزفية مختلطة للفئران. تم إنشاؤها باستخدام BioRender.com <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66523/66523fig01large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
8. 24 ساعة بعد تحريض الصدمة النزفية
<ol><li>تخدير كما هو موضح في الخطوة 3.1. ضع على طاولة الجراحة وأدخل مسبار المستقيم كما هو موضح في الخطوة 3.5. تحضير القسطرة لقنية الشريان السباتي كما هو موضح للوريد الوداجي في الخطوتين 2.3 و 2.4.</li>
	<li>استخدم ملقط DeBakey الرضحي للإمساك بالجلد وإجراء شق في منتصف الرقبة بمقص دقيق وحاد أو مشرط. ضع قطرة من مخدر موضعي (يدوكائين 2٪).</li>
	<li>قم بتوسيع الأنسجة بلطف باستخدام ملقط النمط القياسي. افصل الغدد اللعابية ، ثم افتح عضلة القصبة الهوائية للكشف عن حلقات القصبة الهوائية.</li>
	<li>خذ الشريان السباتي الأيسر وافصله عن العصب باستخدام ملقط نمط قياسي (من المحتمل جدا أن يتسارع تنفس). اربط الشريان السباتي بعيدا (جانب الرأس) بخيط حرير 4/0.</li>
	<li>ضع خيط خياطة على الجانب القريب (جانب القلب) وقم بإعداد عقدة الجراح دون إغلاقها. قم بتثبيت الشريان (ضع المشبك في اتجاه المنبع من الخيط الجانبي القريب).</li>
	<li>شق الشريان السباتي بمقص تشريح صغير Vannas (يجب أن يتدفق حجم صغير من الدم من الشريان). باستخدام ملقط النمط القياسي ، أمسك جدار الشريان برفق لتوسيع الفتحة وقنية الشريان السباتي باستخدام القسطرة المقدمة ، مع إمساكه بالملقط.</li>
	<li>قم بفك وفحص إشارة الضغط للتأكد من وضع القسطرة ، وتحقق من أن الدم لا يتدفق مرة أخرى إلى القسطرة (علامة على تسرب من الصمامات / محول الضغط).</li>
	<li>إذا كانت الإشارة جيدة ولم يكن هناك تسرب ، فقم بدفع القسطرة قليلا (0.5 سم) وشد وتأمين عقدة الجراح المعدة مسبقا.</li>
	<li>هيبارين عند 100 وحدة / كجم وتطبيق ضغط معقم مبلل على الشق.</li>
	<li>بعد الجراحة ، يجب الحفاظ على التخدير باستخدام سيفوفلوران 3٪ بمعدل تدفق هواء 0.6 لتر / دقيقة.</li>
	<li>انتظر 10 دقائق لتسجيل قيم الدورة الدموية لمدة 24 ساعة (القيم المتوقعة: ضغط الدم الانقباضي: 120 مم زئبق ، ضغط الدم الانبساطي: 60 مم زئبق).</li>
	<li>لتقييم العلامات البلازمية لتلف الأعضاء ، اسحب 1 مل من الدم من الشريان السباتي وأجهزة الطرد المركزي عند 1600 × جم لمدة 10 دقائق. القسمة وحفظ البلازما لمزيد من التحليل.</li>
	<li>التضحية بالفئران مباشرة بعد قياس قيم الدورة الدموية في 24 ساعة وجمع الدم. ملاحظة: يجب تكييف طريقة القتل الرحيم مع المعلمات أو العينات المحددة التي سيتم جمعها بعد ذلك. تخضع المجموعة الوهمية لعملية جراحية فقط (الأقسام 1-5 و 7 و 8) دون إجراء الصدمة النزفية (القسم 6). تم تعيين بشكل عشوائي من قبل المجرب بين مجموعات الصدمة الوهمية والنزفية. كان المجرب فقط على علم بتخصيص المجموعة في المراحل المختلفة من التجربة.</li>
</ol>

قنية الأوعية الدموية مع تحريض الصدمة النزفية في الفئران

<ol>
	<li>Cannon, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemorrhagic+Shock.">Hemorrhagic Shock.</a> New Eng J Med. 378 (4), 370-379 (2018).</li><li>Fox, E. E., Holcomb, J. B., Wade, C. E., Bulger, E. M., Tilley, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Earlier+endpoints+are+required+for+hemorrhagic+shock+trials+among+severely+injured+patients.">Earlier endpoints are required for hemorrhagic shock trials among severely injured patients.</a> Shock. 47 (5), 567-573 (2017).</li><li>Frink, M., Andruszkow, H., Zeckey, C., Krettek, C., Hildebrand, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+trauma+models:+an+update.">Experimental trauma models: an update.</a> J Biomed Biotechnol. 2011, 797383 (2011).</li><li>Hauser, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+models+of+traumatic,+hemorrhagic+shock.">Preclinical models of traumatic, hemorrhagic shock.</a> Shock. 24, 24-32 (2005).</li><li>Kemming, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+we+continue+research+in+splenectomized+dogs?+Mycoplasma+haemocanis:+Old+problem+-+new+insight.">Can we continue research in splenectomized dogs? Mycoplasma haemocanis: Old problem - new insight.</a> Eur Sur Res. 36 (4), 198-205 (2004).</li><li>Carroll, R. G., Iamsa, S. G., Pryor, W. H., Allison, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+hemorrhage:+A+clinically+relevant+canine+model+of+hemorrhagic+shock.">Single hemorrhage: A clinically relevant canine model of hemorrhagic shock.</a> Resuscitation. 16 (2), 119-126 (1988).</li><li>Cheung, A. T., Duong, P. L., Driessen, B., Chen, P. C., Jahr, J. S., Gunther, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+function,+oxygenation+and+microvascular+correlation+during+treatment+of+hemorrhagic+shock+with+blood+substitutes.">Systemic function, oxygenation and microvascular correlation during treatment of hemorrhagic shock with blood substitutes.</a> Clin Hemorheol Microcirc. 34 (1-2), 325-334 (2006).</li><li>. Hemorrhage and hemorrhagic shock in swine: A review Available from: <a target="_blank" href="https://apps.dtic.mil/sti/citations/ADA221297">https://apps.dtic.mil/sti/citations/ADA221297</a> (1990)</li><li>Lomas-Niera, J. L., Perl, M., Chung, C. -. S., Ayala, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shock+and+hemorrhage:+an+overview+of+animal+models.">Shock and hemorrhage: an overview of animal models.</a> Shock. 24, 33-39 (2005).</li><li>Redl, H., Bahrami, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large+animal+models:+baboons+for+trauma,+shock,+and+sepsis+studies.">Large animal models: baboons for trauma, shock, and sepsis studies.</a> Shock. 24, 88-93 (2005).</li><li>Marques-Bonet, T., Cheng, Z., She, X., Eichler, E. E., Navarro, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genomic+distribution+of+intraspecific+and+interspecific+sequence+divergence+of+human+segmental+duplications+relative+to+human/chimpanzee+chromosomal+rearrangements.">The genomic distribution of intraspecific and interspecific sequence divergence of human segmental duplications relative to human/chimpanzee chromosomal rearrangements.</a> BMC Genom. 9, 384 (2008).</li><li>Schlag, G., Redl, H. R., Till, G. O., Davies, J., Martin, U., Dumont, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-L-selectin+antibody+treatment+of+hemorrhagic-traumatic+shock+in+baboons.">Anti-L-selectin antibody treatment of hemorrhagic-traumatic shock in baboons.</a> Crit Care Med. 27 (9), 1900 (1999).</li><li>F&#252;l&#246;p, A., Tur&#243;czi, Z., Garbaisz, D., Hars&#225;nyi, L., Szij&#225;rt&#243;, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+models+of+hemorrhagic+shock:+A+review.">Experimental models of hemorrhagic shock: A review.</a> Eur Surg Res. 50 (2), 57-70 (2013).</li><li>Zingarelli, B., Ischiropoulos, H., Salzman, A. L., Szab&#243;, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amelioration+by+mercaptoethylguanidine+of+the+vascular+and+energetic+failure+in+haemorrhagic+shock+in+the+anesthetised+rat.">Amelioration by mercaptoethylguanidine of the vascular and energetic failure in haemorrhagic shock in the anesthetised rat.</a> Eur J Pharmacol. 338 (1), 55-65 (1997).</li><li>Gonzalez, R. J., Moore, E. E., Ciesla, D. J., Nieto, J. R., Johnson, J. L., Silliman, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Post-hemorrhagic+shock+mesenteric+lymph+activates+human+pulmonary+microvascular+endothelium+for+in+vitro+neutrophil-mediated+injury:+the+role+of+intercellular+adhesion+molecule-1.">Post-hemorrhagic shock mesenteric lymph activates human pulmonary microvascular endothelium for in vitro neutrophil-mediated injury: the role of intercellular adhesion molecule-1.</a> J Trauma. 54 (2), 219-223 (2003).</li><li>Hoppen, R. A., Corso, C. O., Grezzana, T. J. M., Severino, A., Dal-Pizzol, F., Ritter, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertonic+saline+and+hemorrhagic+shock:+hepatocellular+function+and+integrity+after+six+hours+of+treatment.">Hypertonic saline and hemorrhagic shock: hepatocellular function and integrity after six hours of treatment.</a> Acta Cir Bras. 20 (6), 414-417 (2005).</li><li>Rupani, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+disruption+of+the+unstirred+mucus+layer+and+intestinal+restitution+in+loss+of+gut+barrier+function+after+trauma+hemorrhagic+shock.">Relationship between disruption of the unstirred mucus layer and intestinal restitution in loss of gut barrier function after trauma hemorrhagic shock.</a> Surgery. 141 (4), 481-489 (2007).</li><li>Cai, B., Dong, W., Sharpe, S., Deitch, E. A., Ulloa, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+and+inflammatory+responses+in+experimental+models+of+hemorrhage.">Survival and inflammatory responses in experimental models of hemorrhage.</a> J Surg Res. 169 (2), 257-266 (2011).</li><li>Esiobu, P., Childs, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rat+model+of+hemorrhagic+shock+for+studying+vascular+hyperpermeability.">A rat model of hemorrhagic shock for studying vascular hyperpermeability.</a> Methods Mol Biol. 1717, 53-60 (2018).</li><li>Sordi, R., Chiazza, F., Patel, N. S. A., Doyle, R. A., Collino, M., Thiemermann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preconditioning'+with+low+dose+lipopolysaccharide+aggravates+the+organ+injury+/+dysfunction+caused+by+hemorrhagic+shock+in+rats.">Preconditioning' with low dose lipopolysaccharide aggravates the organ injury / dysfunction caused by hemorrhagic shock in rats.</a> PLoS One. 10 (4), 0122096 (2015).</li><li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modified+shock+index+and+mortality+rate+of+emergency+patients.">Modified shock index and mortality rate of emergency patients.</a> World J Emerg Med. 3 (2), 114-117 (2012).</li><li>Sahu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shock+index+as+a+marker+for+mortality+rates+in+those+admitted+to+the+medical+intensive+care+unit+from+the+emergency+department.">Shock index as a marker for mortality rates in those admitted to the medical intensive care unit from the emergency department.</a> Cureus. 12 (4), e7903 (2020).</li><li>Zou, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucosamine+improves+cardiac+function+following+trauma-hemorrhage+by+increased+protein+O-GlcNAcylation+and+attenuation+of+NF-&#954;B+signaling.">Glucosamine improves cardiac function following trauma-hemorrhage by increased protein O-GlcNAcylation and attenuation of NF-&#954;B signaling.</a> Am J Physiol Heart Circ Phy. 296 (2), H515-H523 (2009).</li><li>N&#246;t, L. G., Marchase, R. B., F&#252;l&#246;p, N., Brocks, C. A., Chatham, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucosamine+administration+improves+survival+rate+after+severe+hemorrhagic+shock+combined+with+trauma+in+rats.">Glucosamine administration improves survival rate after severe hemorrhagic shock combined with trauma in rats.</a> Shock. 28 (3), 345 (2007).</li><li>N&#246;t, L. G., Brocks, C. A., V&#225;mhidy, L., Marchase, R. B., Chatham, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+O-linked+&#946;-N-acetylglucosamine+levels+on+proteins+improves+survival,+reduces+inflammation+and+organ+damage+24+hours+after+trauma-hemorrhage+in+rats.">Increased O-linked &#946;-N-acetylglucosamine levels on proteins improves survival, reduces inflammation and organ damage 24 hours after trauma-hemorrhage in rats.</a> Crit Care Med. 38 (2), 562-571 (2010).</li><li>Patel, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+macrophage+migration+inhibitory+factor+activity+attenuates+haemorrhagic+shock-induced+multiple+organ+dysfunction+in+rats.">Inhibition of macrophage migration inhibitory factor activity attenuates haemorrhagic shock-induced multiple organ dysfunction in rats.</a> Front Immunol. 13, 886421 (2022).</li><li>Patel, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+Bruton's+tyrosine+kinase+activity+attenuates+hemorrhagic+shock-induced+multiple+organ+dysfunction+in+rats.">Inhibition of Bruton's tyrosine kinase activity attenuates hemorrhagic shock-induced multiple organ dysfunction in rats.</a> Ann Surg. 277 (3), e624-e633 (2023).</li><li>Curcio, L., D'Orsi, L., De Gaetano, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seven+mathematical+models+of+hemorrhagic+shock.">Seven mathematical models of hemorrhagic shock.</a> Comput Math Methods Med. 2021, e6640638 (2021).</li><li>R&#246;nn, T., Lendemans, S., de Groot, H., Petrat, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+model+of+severe+hemorrhagic+shock+in+rats.">A new model of severe hemorrhagic shock in rats.</a> Comp Med. 61 (5), 419-426 (2011).</li><li>Hussmann, B., Lendemans, S., de Groot, H., Rohrig, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Volume+replacement+with+Ringer-lactate+is+detrimental+in+severe+hemorrhagic+shock+but+protective+in+moderate+hemorrhagic+shock:+studies+in+a+rat+model.">Volume replacement with Ringer-lactate is detrimental in severe hemorrhagic shock but protective in moderate hemorrhagic shock: studies in a rat model.</a> Crit Care. 18 (1), 5 (2014).</li><li>Mihara, R., Takasu, A., Maemura, K., Minami, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prolonged+severe+hemorrhagic+shock+at+a+mean+arterial+pressure+of+40+mmHg+does+not+lead+to+brain+damage+in+rats.">Prolonged severe hemorrhagic shock at a mean arterial pressure of 40 mmHg does not lead to brain damage in rats.</a> Acute Med Surg. 5 (4), 350-357 (2018).</li><li>Vincent, J. -. L., De Backer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulatory+shock.">Circulatory shock.</a> N Engl J Med. 369 (18), 1726-1734 (2013).</li><li>Halbgebauer, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemorrhagic+shock+drives+glycocalyx,+barrier+and+organ+dysfunction+early+after+polytrauma.">Hemorrhagic shock drives glycocalyx, barrier and organ dysfunction early after polytrauma.</a> J Crit Care. 44, 229-237 (2018).</li><li>Chipman, A. M., Jenne, C., Wu, F., Kozar, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contemporary+resuscitation+of+hemorrhagic+shock:+What+will+the+future+hold.">Contemporary resuscitation of hemorrhagic shock: What will the future hold.</a> Am J Surg. 220, 580-588 (2020).</li></ol>

يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة معروفة أو علاقات شخصية يمكن أن تؤثر على العمل المذكور في هذه الورقة. البيانات التي تدعم نتائج هذه الدراسة متاحة من المؤلفين المراسلين بناء على طلب معقول.

في هذه الورقة ، وصفنا لأول مرة نموذجا تمثيليا للفئران للصدمة النزفية بناء على مزيج بين نماذج الضغط الثابت والحجم الثابت. لقد أثبتنا أنه بعد 24 ساعة من تحريض الصدمة ، يرتبط نموذجنا بتغيير المعلمات الديناميكية الدموية والتمثيل الغذائي.
بسبب الفيزيولوجيا المرضية المعقدة ، تتطلب دراسة الصدمة النزفية استخدام نماذج حيوانية متكاملة. في الواقع ، لا يمكن للنهج في المختبر تقليد جميع المسارات التي ينطوي عليها هذا المرض. إيقاظ بعد بروتوكول الصدمة النزفية هو خطوة تضمن تكرارا أفضل للحالة السريرية. بسبب الصعوبة التي ينطوي عليها إيقاظ ، لم تتضمن سوى دراسات قليلة جدا هذه المرحلة. الدراسات النادرة التي توقظ تضحي بها في أوقات قصيرة (2 ساعة أو 6 ساعات) ، والتي لا تعكس تماما ما يحدث للمرضى16،18،23،24. على الرغم من تطور نماذج الصدمة النزفية ، إلا أن عددا قليلا فقط من الدراسات قد قيمت المعلمات (الالتهاب ، موت الخلايا المبرمج ، خلل الأعضاء) بعد 24 ساعة من تحريض الصدمة ، مما يسلط الضوء على صعوبة هذا النوع من البروتوكول25،26،27. أحدث تطوير النماذج الحاسوبية والرياضية ثورة في البحث. تم تطوير العديد من النماذج الرياضية للصدمة النزفية ، ولكن معظم هذه النماذج لا تأخذ في الاعتبار النطاق الكامل لتبادل سوائل الجسم أثناء الصدمة النزفية وتتطلب تحسينا قبل التطبيق السريري المحتمل28. حتى الآن ، يتمثل أحد التحديات الرئيسية في تطوير نموذج حيواني يحاكي علم الأمراض لدى البشر قدر الإمكان.
يتم وصف عدد كبير من نماذج الصدمة النزفية في الأدبيات وتختلف عبر نهج الأوعية الدموية أو أحجام الدم المسحوبة أو الضغط المستهدف13. بشكل عام ، يمكن تصنيف نماذج الصدمة النزفية إلى 3 مجموعات: نزيف ثابت الحجم ، نزيف ضغط ثابت ، ونزيف غير منضبط. التوحيد والتكاثر مع النزف ذي الحجم الثابت صعبان ويفسرهما حجم الدم / نسبة وزن الجسم ، والتي تتناقص خطيا مع وزن الفئران. يستخدم نزيف الضغط الثابت على نطاق واسع ، مما يفسر أن الإعدادات (الضغط المستهدف ، مدة الصدمة) متغيرة للغاية من دراسة إلى أخرى ، مما يجعل من الصعب نقل النتائج من نموذج إلى آخر. من المهم أيضا الإشارة إلى أن ضعف الدورة الدموية ، الذي يلعب دورا محوريا في الفيزيولوجيا المرضية للصدمة النزفية ، لا يتم تقييمه بشكل منهجي ، مما قد يزيد من التناقض في النتائج بين الدراسات. أخيرا ، يثير نموذج النزف غير المنضبط ، على الرغم من أهميته السريرية ، أسئلة حول التكاثر والأخلاق. من أجل التوفيق بين الأهمية السريرية والتوحيد القياسي والتكرار قدر الإمكان ، قمنا بتطوير نموذج مختلط مع كل من مراحل الحجم الثابت والضغط الثابت.
في النموذج الموصوف هنا ، لا يتم تعديل درجة الحرارة ومعدل التنفس بعد 24 ساعة من الجراحة. يمكن تفسير ذلك من خلال حقيقة أن الجراحة تتم في ظل ظروف معقمة ، مما يحد من الاستجابة المؤيدة للالتهابات. تعرف الصدمة النزفية بأنها فشل حاد في الدورة الدموية بسبب فقدان الدم المرتبط بانخفاض ضغط الدم. كما هو الحال في البشر ، يتسبب هذا النموذج من الصدمة النزفية في انخفاض متوسط الضغط الشرياني ، لا سيما بسبب انخفاض ضغط الدم الانبساطي. ومن المثير للاهتمام ، وكما هو موضح سابقا ، أن معدل ضربات القلب لم يتغير بعد مرحلة الإنعاش في هذا النموذج من الصدمة النزفية29،30،31. من المحتمل أن يرتبط الانخفاض في متوسط الضغط الشرياني بانخفاض نضح الأعضاء ، مما يؤدي إلى خلل وظيفي متعدد الأحشاء ، والذي يمكن توضيحه من خلال الزيادة في علامات البلازما المختلفة في نموذجنا (الكرياتينين في الدم ، تروبونين القلب T ، ASAT ، و ALAT). يؤدي انقطاع إمدادات الأكسجين إلى التمثيل الغذائي اللاهوائي ، مما يؤدي إلى زيادة في اللاكتاتفي الدم 32. كما هو موضح سابقا ، يؤدي هذا النموذج من الصدمة النزفية إلى زيادة مستويات اللاكتات في الدم30. يمكن أن تترافق هذه الزيادة مع نقص التروية الناجم على مستوى الشريان الفخذي. ومع ذلك ، بالنظر إلى أن في المجموعة الوهمية لديها لاكتاتيميا فسيولوجية وخضعت لنفس الإجراء الجراحي مثل مجموعة الصدمة النزفية ، يبدو أن هذه الزيادة مرتبطة ببروتوكول الصدمة النزفية. مجتمعة ، تؤكد كل هذه البيانات أن البروتوكول الموصوف في هذه الدراسة يسمح بتطوير نموذج جديد ذي صلة من الصدمة النزفية في الفئران.
الحد من هذا النموذج هو استخدام الهيبارين ، وهو أمر ضروري للحد من التخثر الطبيعي للدم عندما يتعلق الأمر بالتلامس مع المواد البلاستيكية مثل القنية. ومع ذلك ، يمكن أن يؤثر استخدام الهيبارين على اعتلال التخثر المرتبط بالصدمة النزفيةالرضحية 33. تشمل هذه الدراسة ذكور السليمة التي تتراوح أعمارها بين 11 و 13 أسبوعا. بالنظر إلى أن الجنس والعمر والأمراض المصاحبة (ارتفاع ضغط الدم والسكري وما إلى ذلك) يمكن أن تؤثر على النتائج ، سيكون من المناسب تقييم تأثيرها في نموذجنا. في البروتوكول ، يتم تنفيذ خطوة الإنعاش عن طريق حقن رينغر لاكتات ، وهو بلوري يمكن أن يعزز اعتلال التخثر وذمة الأنسجة34. على الرغم من أن استخدام منتجات الدم هو الأمثل ، إلا أنها نادرة وقابلة للتلف ، وقد يكون من الصعب الحصول على مخزون كاف من دم الفئران للبروتوكول بأكمله. منتجات الدم ونماذج الصدمة النزفية القائمة على الكريستالات / الغرويات هما نهجان متكاملان.
نقاط القوة في هذا النموذج هي 1) قابليته العالية للتكاثر (يتضح من التباين المنخفض في النتائج) ، 2) سهولة تطبيقه (معظم الأدوات هي مناهج كلاسيكية والأوعية الدموية معروفة) و 3) أهميته السريرية ، لا سيما بسبب صحوة والخلل الوظيفي متعدد الحشوية. بناء على النتيجة السلوكية الموضحة في الملف التكميلي 1 ، تم إعداد نقاط الحد. سيتم مناقشة التضحية إذا تم الوصول إلى درجة أعلى من 9 ، وفقا للجدول المرفق. إذا تم الوصول إلى درجة 11 ، القتل الرحيم للحيوان بشكل منهجي. في هذه الدراسة ، لم يصل أي من إلى درجة أعلى من 8 ، وبالتالي ، لم يتم استبعاد أي منها من الدراسة. قد يفسر هذا سبب ارتباط النموذج الموصوف هنا بمعدل وفيات أقل 3 مرات من معدل الدراسة الأخرى التي استمرت 24 ساعة (16٪ مقابل 47٪)25.
الخطوة الحاسمة للنموذج هي مرحلة الصدمة النزفية. من المهم احترام نطاق الضغط من 32-38 مم زئبق. في الواقع ، لاحظنا أن الحفاظ على متوسط الضغط الشرياني أقل من 32 مم زئبق أدى إلى انخفاض سريع ومفاجئ في الضغط. على العكس من ذلك ، فإن الحفاظ على ضغط أعلى من 38 مم زئبق لا يوفر نموذجا قريبا بما فيه الكفاية من الواقع السريري. تتوافق هذه الملاحظات مع الفاصل الزمني لمتوسط الضغط الشرياني المستهدف في نماذج أخرى13.
في الختام ، أثبتنا أن نموذج الصدمة النزفية للفئران المفصل في هذه الدراسة مناسب سريريا ويمكن أن يكون مفيدا في فهم الآليات الفيزيولوجية المرضية من خلال تحديد الجهات الفاعلة / المسارات البيولوجية الجديدة وفي تحديد استراتيجيات علاجية جديدة عن طريق اختبار جزيئات مرشحة مختلفة.

الصدمة النزفية (HS) هي حالة صدمة تتميز بفقدان كبير في حجم الدم ، مما يؤدي إلى خلل التنسجة. HS هو علم الأمراض المعقد الذي يربط التغيرات الدورة الدموية والتمثيل الغذائي جنبا إلى جنب مع الاستجابات المؤيدة والمضادة للالتهابات. يعزى ما يقرب من 1.9 مليون حالة وفاة في جميع أنحاء العالم إلى النزيف وعواقبه كل عام1. تتضمن الإرشادات الحالية للرعاية في المقام الأول إعطاء السوائل عن طريق الوريد (مكملة أو غير مكملة بالجزيئات النشطة في الأوعية) والعلاج بالأكسجين. ومع ذلك ، فإن هذه العلاجات هي أعراض ويمكن أن تكون غير فعالة ، وهو ما يفسر سبب بقاء معدل الوفيات المرتبط بالنظام المنسق مرتفعا2. وهذا يبرر أهمية تحديد آليات جزيئية وخلوية جديدة ، وبالتالي علاجات للحد من الوفيات.
تسمح النماذج الحيوانية بفك رموز الآليات الفيزيولوجية المرضية المشاركة في الأمراض واختبار استراتيجيات علاجية جديدة. توجد العديد من النماذج الحيوانية للصدمة النزفية في الأدب. تختلف هذه النماذج ليس فقط في الأنواع المستخدمة ولكن أيضا في وسائل تحفيز النظام المنسق (على سبيل المثال ، الضغط الثابت مقابل الحجم الثابت) (الجدول 1 ، الجدول 2) 3،4،5،6،7،8،9،10،11،12،13. أيضا ، تختلف البروتوكولات داخل نفس النوع من النماذج (على سبيل المثال ، وقت النزف ، متوسط الضغط الشرياني المستهدف) (الجدول 3) 14،15،16،17،18،19،20. بالنظر إلى مجموعة واسعة من نماذج الصدمة النزفية الحالية وتعقيد تكرار الوضع السريري ، لا تزال الدراسة قبل السريرية لهذا المرض محدودة. إن تطوير نموذج صدمة نزفية قابل للتكرار وقابل للتوحيد وسهل التنفيذ يصب في مصلحة الجميع. هذا من شأنه أن يسهل المقارنة بين الدراسات المختلفة وبالتالي كشف الفيزيولوجيا المرضية المعقدة للصدمة النزفية. كان الهدف من هذا البروتوكول هو تطوير نموذج جديد ذي صلة سريريا للصدمة النزفية في الفئران باستخدام مرحلتين متتاليتين من النزف بحجم ثابت تليها مرحلة انخفاض ضغط الدم الثابتة.
الجدول 1: الأنواع المستخدمة كنموذج للصدمة النزفية3،4،5،6،7،8،9،10،11،12،13. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66523/Table%201.xlsx" target="_blank">الرجاء الضغط هنا لتنزيل هذا الجدول.</a>
الجدول 2: الأنواع المختلفة للصدمة النزفية13. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66523/Table%202.xlsx" target="_blank">الرجاء الضغط هنا لتنزيل هذا الجدول.</a>
الجدول 3: مثال على تنوع النماذج التجريبية للصدمة النزفية في الفئران التي يسببها بروتوكول الضغط الثابت. ملخص المعلمات للنماذج التجريبية المختلفة للصدمة النزفية. الأوعية الموضحة باللون الأحمر هي الشرايين، والأوعية الموضحة باللون الأزرق هي الأوردة. بالنسبة للإنعاش ، يتم استخدام حجم عينة الدم كمرجع (الدم: الإنعاش بحجم مماثل لحجم عينة الدم أثناء الصدمة ؛ x2: الإنعاش بحجم ضعف حجم عينة الدم أثناء الصدمة ؛ x4: الإنعاش بحجم أربعة أضعاف حجم عينة الدم أثناء الصدمة). MAP: متوسط الضغط الشرياني. RL: رينغر لاكتات14،15،16،17،18،19،20. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66523/Table%203.xlsx" target="_blank">الرجاء الضغط هنا لتنزيل هذا الجدول.</a>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL syringe</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>MDSS01SE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.5 mL syringe</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>SS*02SE1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 mL syringe</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>MDSS20ESE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia induction chamber</td>
			<td>TEMSEGA</td>
			<td>HUBBIV4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Microlance 3 23 G needle</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>300800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Microlance 3 26 G needle</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>304300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood pressure transducer</td>
			<td>emka TECHNOLOGIES</td>
			<td>BP_T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprecare</td>
			<td>Axience</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1 mL vial, buprenorphine 0.3 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DE BAKEY, Atraumatic Vascular Forceps</td>
			<td>ALLGAIER instrumente medical</td>
			<td>09-543-150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dermal Betadine 10%</td>
			<td>Mylan</td>
			<td>N/A</td>
			<td>125 mL bottle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Forceps - Curved / Serrated</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11065-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad Prism 8</td>
			<td>GraphPad by Dotmatics</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating mats</td>
			<td>TEMSEGA</td>
			<td>OPT/THERM_MATELASSTEREORATS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin sodium</td>
			<td>PANPHARMA&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>5 mL bottle, 5,000 UI/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IOX2 software</td>
			<td>emka TECHNOLOGIES</td>
			<td>IOX_BASE_4c + IOX_FULLCARDIO_4a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Scissors - ToughCut</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14058-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine</td>
			<td>Fresenius</td>
			<td>N/A</td>
			<td>10 mL bootle, 8.11 mg, lidocaine hydrochloride</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MiniHub-V3.2</td>
			<td>TEMSEGA</td>
			<td>PF006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moria 201/A Vessel Clamp - Straight</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18320-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non sterile compresses</td>
			<td>Raffin</td>
			<td>70189</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non sterile drape</td>
			<td>Dutscher&#160;</td>
			<td>30786</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olsen-Hegar Needle Holder with Scissors&#160;</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12002-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethylene tubing PE10</td>
			<td>PHYMEP</td>
			<td>BTPE-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethylene tubing PE50</td>
			<td>PHYMEP</td>
			<td>BTPE-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rats</td>
			<td>Charles Rivers</td>
			<td>-</td>
			<td>Male WISTAR HAN (10 weeks)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rectal probe</td>
			<td>TEMSEGA</td>
			<td>SONDE_TEMP_RATS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ringer Lactates</td>
			<td>Fresenius Kabi</td>
			<td>964175</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scrub Betadine 4%</td>
			<td>Mylan</td>
			<td>N/A</td>
			<td>125 mL bottle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sevoflurane</td>
			<td>Abbott</td>
			<td>N/A</td>
			<td>250 mL bottle, gas 100%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sevoflurane Vaporizer</td>
			<td>TEMSEGA</td>
			<td>SEVOTEC3NSELEC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StatStrip lactate test strips</td>
			<td>Nova Biomedical</td>
			<td>47486</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StatStrip Xpress lactate Meter</td>
			<td>Nova Biomedical</td>
			<td>47486</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile compresses</td>
			<td>Laboratoire SYLAMED</td>
			<td>211S05-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile drape</td>
			<td>M&#246;lnlycke</td>
			<td>800330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steriles gloves</td>
			<td>MEDLINE</td>
			<td>MSG7275</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture</td>
			<td>Optilene</td>
			<td>3097141</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture for vessels</td>
			<td>SMI</td>
			<td>8150046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe pump</td>
			<td>Vial m&#233;dical</td>
			<td>16010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>usbAMP</td>
			<td>emka TECHNOLOGIES</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vaseline</td>
			<td>Cooper</td>
			<td>N/A</td>
			<td>10 mL vial</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitamin A Dulcis (ALLERGAN)</td>
			<td>Allergan</td>
			<td>N/A</td>
			<td>10 g tube, Retinol</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

developing a clinically relevant hemorrhagic shock model in rats

على مدى العقود الأخيرة ، سمح لنا تطوير النماذج الحيوانية بفهم الأمراض المختلفة بشكل أفضل وتحديد العلاجات الجديدة. ترتبط الصدمة النزفية ، أي فشل الأعضاء بسبب الفقدان السريع لكمية كبيرة من الدم ، بفيزيولوجيا مرضية معقدة للغاية تتضمن عدة مسارات. تسعى العديد من النماذج الحيوانية الموجودة للصدمة النزفية إلى تكرار ما يحدث في البشر ، لكن هذه النماذج لها حدود من حيث الأهمية السريرية أو قابلية التكاثر أو التوحيد القياسي. كان الهدف من هذه الدراسة هو تحسين هذه النماذج لتطوير نموذج جديد للصدمة النزفية. لفترة وجيزة ، تم إحداث صدمة نزفية في ذكور فئران Wistar Han (11-13 أسبوعا) عن طريق الاستنزاف الخاضع للرقابة المسؤول عن انخفاض متوسط الضغط الشرياني. كانت المرحلة التالية من 75 دقيقة هي الحفاظ على انخفاض متوسط ضغط الدم الشرياني ، بين 32 مم زئبق و 38 مم زئبق ، لتحفيز المسارات الفيزيولوجية المرضية للصدمة النزفية. تحاكي المرحلة الأخيرة من البروتوكول رعاية المرضى بإعطاء السوائل الوريدية ، محلول رينغر لاكتات ، لرفع ضغط الدم. تم تقييم درجات اللاكتات والسلوك بعد 16 ساعة من بدء البروتوكول ، بينما تم تقييم معلمات ديناميكا الدم وعلامات البلازما بعد 24 ساعة من الإصابة. بعد أربع وعشرين ساعة من تحريض الصدمة النزفية ، انخفض متوسط ضغط الدم الشرياني والانبساطي في مجموعة الصدمة النزفية (p < 0.05). بقي معدل ضربات القلب وضغط الدم الانقباضي دون تغيير. تمت زيادة جميع علامات تلف الأعضاء مع الصدمة النزفية (ص < 0.05). تم زيادة اللاكتات في الدم والدرجات السلوكية مقارنة بالمجموعة الوهمية (p < 0.05). في الختام ، أثبتنا أن البروتوكول الموصوف هنا هو نموذج مناسب للصدمة النزفية التي يمكن استخدامها في الدراسات اللاحقة ، خاصة لتقييم الإمكانات العلاجية للجزيئات الجديدة.

Hemorrhagic shock (HS) is a state of shock characterized by significant blood volume loss, resulting in tissue dysoxia. HS is a complex pathology that associates hemodynamic and metabolic changes along with pro- and anti-inflammatory responses. Approximately 1.9 million deaths worldwide are attributed to the hemorrhage and its consequences each year1. Current guidelines for care primarily involve intravenous fluid administration (supplemented or not with vasoactive molecules) and oxygen therapy. However, these treatments are symptomatic and can be ineffective, which explains why the HS-associated mortality remains high2. This justifies the importance of identifying new molecular and cellular mechanisms and, thus, treatments to reduce mortality.
Animal models allow for deciphering the pathophysiological mechanisms involved in diseases and testing new therapeutic strategies. Numerous animal models of hemorrhagic shock exist in the literature. These models differ not only in the species used but also in the means of inducing HS (e.g., fixed pressure vs. fixed volume) (Table 1, Table 2)3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13. Also, protocols vary within the same type of model (e.g., time of hemorrhage, targeted mean arterial pressure) (Table 3)14,15,16,17,18,19,20. Considering the wide variety of existing hemorrhagic shock models and the complexity of replicating the clinical situation, the preclinical study of this pathology remains limited. The development of a reproducible, standardizable, and easy-to-implement hemorrhagic shock model is in everyone&#39;s interest. This would facilitate comparison between the various studies and thus unravel the complex pathophysiology of the hemorrhagic shock. The aim of this protocol was to develop a new clinically relevant model of hemorrhagic shock in rats using two successive phases of hemorrhage with fixed volume followed by a fixed low blood pressure phase.
Table 1: Species used as a model for hemorrhagic shock3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66523/Table 1.xlsx" target="_blank">Please click here to download this Table.</a>
Table 2: The different types of hemorrhagic shock13. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66523/Table 2.xlsx" target="_blank">Please click here to download this Table.</a>
Table 3: Example of the diversity of experimental models of hemorrhagic shock in rats induced by a fixed pressure protocol. Summary of parameters for different experimental models of hemorrhagic shock. Vessels shown in red are arteries, and those shown in blue are veins. For resuscitation, the volume of blood sampled is used as a reference (blood: resuscitation with a volume identical to that of blood sampled during shock; x2: resuscitation with a volume twice that of blood sampled during shock; x4: resuscitation with a volume four times that of blood sampled during shock). MAP: Mean Arterial Pressure; RL: Ringer Lactate14,15,16,17,18,19,20. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66523/Table 3.xlsx" target="_blank">Please click here to download this Table.</a>

تسليط الضوء على المؤلف: تطوير استراتيجيات علاجية مبتكرة لأبحاث الصدمة النزفية

تطوير نموذج صدمة نزفية ذات صلة سريريا في الفئران

Hemorrhagic shock is responsible for two million deaths worldwide every year. We are studying the pathological mechanism of hemorrhagic shock, with the aim of identifying new targets, and thus proposing innovative therapeutic strategies. Hemorrhagic shock is a difficult condition in its own right, combining hemodynamic alteration with metabolic damage and organ dysfunctions.The variety of experimental protocols makes its study even more complex. In this study, we propose to develop a reproductive, standardized, and clinically relevant rat model of hemorrhagic shock. We hope that this model of hemorrhagic shock can become one of the standard models for future study.The use of a standard model would facilitate advances in the field, not least because it would make it possible to compare results between different teams working on hemorrhagic shock.

باتباع البروتوكول الموضح أعلاه ، قمنا بتقييم العديد من معلمات ديناميكا الدم بعد 24 ساعة من تحريض الصدمة النزفية. يتشابه الضغط الشرياني القاعدي (قبل بدء بروتوكول الصدمة النزفية) بين مجموعات الصدمة الوهمية والنزفية (الشكل 2 أ). كما هو متوقع ، ينخفض متوسط الضغط الشرياني بشكل كبير مع بروتوكول الصدمة النزفية ، والذي يمكن تفسيره بانخفاض ضغط الدم الانبساطي (متوسط الضغط الشرياني: الشام: 92 مم زئبق ± 3 مم زئبق ؛ النظام المنسق: 82 مم زئبق ± 2 مم زئبق ؛ ضغط الدم الانبساطي: 73 مم زئبق ± 3 مم زئبق ؛ HS: 61 مم زئبق ± 2 مم زئبق) (الشكل 2 ب ، ج). لا تؤثر الصدمة النزفية على ضغط الدم الانقباضي وضغط النبض ومعدل ضربات القلب (الشكل 2D-F). مؤشر الصدمة (معدل ضربات القلب / نسبة ضغط الدم الانقباضي) ومؤشر الصدمة المعدل (MSI) (معدل ضربات القلب / متوسط نسبة ضغط الدم) هما متنبئان للوفيات في المرضى الشديدين14,15. كلما ارتفعت القيم ، زاد خطر الوفاة. في هذا النموذج، يكون مؤشر الصدمة غير معدل بين المجموعتين، في حين يميل مؤشر الصدمة المعدل إلى الزيادة في الصدمة النزفية (MSI: Sham: 4.24 ± 0.11; HS: 4.70 ± 0.15) (الشكل 2G ، H).
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66523/66523fig02.jpg"> الشكل 2: تأثير الصدمة النزفية على معلمات ديناميكا الدم. (أ) متوسط الضغط الشرياني القاعدي، (ب) متوسط الضغط الشرياني، (ج) ضغط الدم الانبساطي، (د) ضغط الدم الانقباضي، (ه) ضغط النبض، (و) معدل ضربات القلب، (ز) مؤشر الصدمة، ( ح) مؤشر الصدمة المعدل بين الشام الصدمة النزفية. يتم تمثيل النتائج كمتوسط ± SEM. تم تقييم الدلالة الإحصائية من خلال اختبار t غير المزاوج. *: ص < 0.05; ص < 0.001.: ن = 6-12. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66523/66523fig02large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
يمكن تقييم ضعف التمثيل الغذائي العالمي أثناء الصدمة النزفية عن طريق اللاكتاتية. كما هو متوقع ، زاد اللاكتات في الدم بعد بروتوكول الصدمة النزفية و 16 ساعة بعد (نهاية البروتوكول: الشام: 1.13 مليمول / لتر ± 0.14 مليمول / لتر ؛ النظام المنسق: 5.98 ملليمول/لتر ± 0.39 ملليمول/لتر; H + 16: الشام: 1.95 مليمول / لتر ± 0.23 مليمول / لتر ؛ HS: 2.95 مليمول / لتر ± 0.19 مليمول / لتر) (الشكل 3 أ ، ب). درجة الحرارة ومعدل التنفس هما مكونان لمتلازمة الاستجابة الالتهابية الجهازية (SIRS) ، وهي استجابة مؤيدة للالتهابات مميزة لحالة الصدمة. لا يتم تعديل درجة الحرارة ولا معدل التنفس بين المجموعتين بعد 16 ساعة من تحريض الصدمة النزفية (الشكل 3C ، D). قمنا بتقييم تأثير الصدمة النزفية على بعض معايير السلوك مثل الموقف والنشاط وما إلى ذلك (الملف التكميلي 1). تزداد الدرجة السلوكية في مجموعة الصدمة النزفية بعد 16 ساعة من البروتوكول (الشام: 0.33 ± 0.21; النظام المنسق: 2.27 ± 0.69) (الشكل 3E).
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66523/66523fig03.jpg"> الشكل 3: تأثير الصدمة النزفية على اللاكتاتميا، ودرجة الحرارة، ومعدل التنفس، والدرجة السلوكية. أ: اللاكتات في نهاية بروتوكول الصدمة النزفية، ب: اللاكتات، ج: درجة الحرارة، د: معدل التنفس، ه: الدرجة السلوكية 16 ساعة بعد تحريض الصدمة النزفية بين الشام الصدمة النزفية. يتم تمثيل النتائج كمتوسط ± SEM. تم تقييم الدلالة الإحصائية من خلال اختبار t غير المزاوج. *: ص < 0.05; **: ص < 0.01 ؛ ص < 0.001.: ن = 6-12. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66523/66523fig03large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
ترتبط الصدمة النزفية بخلل وظيفي في الأعضاء. من أجل تقييم ما إذا كان النموذج يمكن أن يكون ذا صلة سريريا ، قمنا بتقييم العلامات البلازمية لإصابة الأعضاء بعد 24 ساعة من البروتوكول. الكرياتينينميا (الشام: 19.13 ميكرومول / لتر ± 0.33 ميكرومول / لتر ؛ HS: 28.88 ميكرومول / لتر ± 2.69 ميكرومول / لتر) ، تروبونين القلب T (الشام: 9.38 نانوغرام / لتر ± 1.87 نانوغرام / لتر ؛ HS: 35.62 نانوغرام/لتر ± 2.28 نانوغرام/لتر)، والأسبارتات والألانين أمينو ترانسفيراز (ASAT: الشام: 221 وحدة دولية/لتر ± 48 وحدة دولية/لتر؛ النظام المنسق: 963 وحدة دراسية / لتر ± 144 وحدة دراسية / لتر ؛ ALAT: الشام: 36 وحدة دراسية / لتر ± 4 وحدة دراسية / لتر ؛ HS: 323 UI / L ± 13 UI / L) التي تعكس الأضرار التي لحقت الكلى والقلب والكبد على التوالي كلها تزداد بشكل كبير مع الصدمة النزفية (الشكل 4).
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66523/66523fig04.jpg"> الشكل 4: يرتبط نموذج الصدمة النزفية بخلل وظيفي في الأعضاء. أ: الكرياتينين في الدم، ب: تروبونين القلب T، ج: الأسبارتات أمينوترانسفيراز، (د) مستويات إنزيم أمينوترانسفيراز الألانين 24 ساعة بعد تحريض الصدمة النزفية بين الشام الصدمة النزفية. يتم تمثيل النتائج كمتوسط ± SEM. تم تقييم الدلالة الإحصائية من خلال اختبار t غير المزاوج. *: ص < 0.05; **: ص < 0.01 ؛ ص < 0.001.: ن = 4 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66523/66523fig04large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
الملف التكميلي 1: تفاصيل النتيجة السلوكية <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66523/Supplementary%20File%201.zip" target="_blank">الرجاء الضغط هنا لتنزيل هذا الملف.</a>

Read this Scientific Article Protocol about Author Spotlight: Developing Innovative Therapeutic Strategies for Hemorrhagic Shock Research at JoVE.com

تقتل الصدمة النزفية 1.9 مليون شخص في جميع أنحاء العالم كل عام. كثيرا ما تستخدم الصغيرة كنماذج صدمة نزفية ولكنها ترتبط بقضايا التوحيد القياسي والتكاثر والأهمية السريرية ، مما يحد من أهميتها. توضح هذه المقالة تطوير نموذج صدمة نزفية جديد ذي صلة سريريا في الفئران.

Over the recent decades, the development of animal models allowed us to better understand various pathologies and identify new treatments. Hemorrhagic ...

الصدمة النزفية مسؤولة عن مليوني حالة وفاة في جميع أنحاء العالم كل عام. نحن ندرس الآلية المرضية للصدمة النزفية ، بهدف تحديد أهداف جديدة ، وبالتالي اقتراح استراتيجيات علاجية مبتكرة. الصدمة النزفية هي حالة صعبة في حد ذاتها ، تجمع بين تغيير الدورة الدموية وتلف التمثيل الغذائي واختلال وظائف الأعضاء.مجموعة متنوعة من البروتوكولات التجريبية تجعل دراستها أكثر تعقيدا. في هذه الدراسة ، نقترح تطوير نموذج فئران تناسلي وموحد وذي صلة سريريا للصدمة النزفية. نأمل أن يصبح هذا النموذج من الصدمة النزفية أحد النماذج القياسية للدراسة المستقبلية.ومن شأن استخدام نموذج موحد أن ييسر التقدم في الميدان، لأسباب ليس أقلها أنه سيمكن من مقارنة النتائج بين مختلف الفرق التي تعمل على الصدمات النزفية.

developing-a-clinically-relevant-hemorrhagic-shock-model-in-rats

Research

JoVE Journal

Medicine

Developing a Clinically Relevant Hemorrhagic Shock Model in Rats

639 Views.  Nantes Université. الصدمة النزفية مسؤولة عن مليوني حالة وفاة في جميع أنحاء العالم كل عام. نحن ندرس الآلية المرضية للصدمة النزفية ، بهدف تحديد أهداف جديدة ، وبالتالي اقتراح استراتيجيات علاجية مبتكرة. الصدمة النزفية هي حالة صعبة في حد ذاتها ، تجمع بين تغيير الدورة الدموية وتلف التمثيل الغذائي ...

Video: تسليط الضوء على المؤلف: تطوير استراتيجيات علاجية مبتكرة لأبحاث الصدمة النزفية

Over the recent decades, the development of animal models allowed us to better understand various pathologies and identify new treatments. Hemorrhagic shock, i.e., organ failure due to rapid loss of a large volume of blood, is associated with a highly complex pathophysiology involving several pathways. Numerous existing animal models of hemorrhagic shock strive to replicate what happens in humans, but these models have limits in terms of clinical relevance, reproducibility, or standardization. The aim of this study was to refine these models to develop a new model of hemorrhagic shock. Briefly, hemorrhagic shock was induced in male Wistar Han rats (11-13 weeks old) by a controlled exsanguination responsible for a drop in the mean arterial pressure. The next phase of 75 min was to maintain a low mean arterial blood pressure, between 32 mmHg and 38 mmHg, to trigger the pathophysiological pathways of hemorrhagic shock. The final phase of the protocol mimicked patient care with an administration of intravenous fluids, Ringer Lactate solution, to elevate the blood pressure. Lactate and behavioral scores were assessed 16 h after the protocol started, while hemodynamics parameters and plasmatic markers were evaluated 24 h after injury. Twenty-four hours post-hemorrhagic shock induction, the mean arterial and diastolic blood pressure were decreased in the hemorrhagic shock group (p&#160;&#60; 0.05). Heart rate and systolic blood pressure remained unchanged. All organ damage markers were increased with the hemorrhagic shock (p &#60; 0.05). The lactatemia and behavioral scores were increased compared to the sham group (p &#60; 0.05). In conclusion, we demonstrated that the protocol described here is a relevant model of hemorrhagic shock that can be used in subsequent studies, particularly to evaluate the therapeutic potential of new molecules.

Hemorrhagic shock kills 1.9 million people worldwide every year. Small animals are frequently used as hemorrhagic shock models but are associated with issues of standardization, reproducibility, and clinical significance, thus limiting their relevance. This article describes developing a new clinically relevant hemorrhagic shock model in rats.

Jugular Vein and Femoral Artery Cannulation with Hemorrhagic Shock Induction and Resuscitation in Rats

To begin, insert a lubricated rectal probe to control the temperature of the anesthetized rat during surgery. After locating the jugular region in the lower right neck region of the anesthetized rat above the clavicle, use DeBakey Atraumatic Forceps to gently grasp the skin and make a precise incision with fine sharp scissors or a scalpel. Gently slash the tissue with standard pattern forceps.Locate and gently liberate the jugular vein from its muscular compartment. Place a 4-0 silk suture thread to securely ligate the distal side of the jugular vein. Use the suture with the needle holders to tension the jugular vein.Place a 4-0 suture on the proximal side of the jugular vein and prepare a surgeon knot without tightening it. Using Vannas micro dissecting scissors, make a small incision in the jugular vein. After carefully grasping the vein wall with small forceps, insert the PE50 catheter in the jugular vein.Slightly advance the catheter, and to confirm its correct placement in the vein, draw a small amount of blood and re-inject it. Tighten the previously prepared knot to secure the catheter. Apply a drop of lidocaine to the incised area.Cover the incision with a moist sterile gauze pad. Use DeBakey Atraumatic Forceps to grasp the skin of the Scarpa triangle on the left leg, and make an incision with fine sharp scissors or a scalpel. Gently dilacerate tissue with standard pattern forceps.Locate the femoral triad and place one forceps under the triad. Then with a second standard pattern forceps, carefully separate the artery from the nerve and femoral vein. Place a 4-0 suture to ligate the femoral artery distally and take the suture with the needle holders to put the femoral artery in tension.Now place a 4-0 suture on the proximal side of the femoral artery and prepare a surgeon knot without closing it. After clamping the artery, use Vannas micro dissecting scissors to make a transverse incision in the femoral artery. Grasp the artery wall with standard pattern forceps and cannulate the femoral artery with the catheter holding it with forceps.Gently unclamp the artery and ensure that the blood is not flowing back into the catheter. If the signal is good, advance the catheter slightly into the artery and tighten the previously prepared surgeon knot. Administer heparin into the rat, and place a moistened sterile gauze pad over the incised area.After 10 minutes of stabilization, record the basal hemodynamic values for five minutes. To induce hemorrhagic shock, use a one milliliter syringe to draw five milliliters of blood from the femoral artery over five minutes. Prepare a mix of 50%lactated Ringer solution and 50%collected blood at room temperature.Place a two milliliter syringe filled with the mix at the end of the jugular vein cannula. For hemorrhagic shock maintenance, when mean arterial pressure exceeds 38 millimeters of mercury, withdraw 200 microliters of blood from the femoral artery. If pressure drops below 32 millimeters of mercury, inject 200 microliters of the 50%blood, 50%lactated Ringer's mixture through the jugular vein.After sterile preparation of the tail with a gauze pad, use the tip of the needle to draw a blood drop from the end of the tail to measure peripheral blood lactate. Finally, resuscitate the rat with a lactated Ringer solution using a 20 milliliter syringe through the jugular catheter with a syringe pump.

قنية الوريد الوداجي والشريان الفخذي مع تحريض الصدمة النزفية والإنعاش في الفئران

Post-Surgical Monitoring and Hemodynamic Evaluation Following Hemorrhagic Shock in Rats

After hemorrhagic shock treatment, clamp the jugular vein of the anesthetized rat. Remove the catheter from the veins. Upon ligation, ensure that there is no blood leakage from the vessels.Now use a 5-0 sterile suture to close incised areas with subcutaneous and cutaneous stitches. Disinfect the surgical area with 10%povidone iodine solution. Using a one milliliter syringe fitted with a 26 gauge needle, subcutaneously inject buprenorphine.Upon awakening, place the rat on the heating mat in its cage. After 16 hours of hemorrhagic shock induction, draw blood drop from the end of the tail to measure blood lactate. Place the anesthetized rat on the surgical table and insert the rectal probe.For carotid artery cannulation, use DeBakey atraumatic forceps to grasp the skin and make an incision in the middle of the neck with fine and sharp scissors or a scalpel. With standard pattern forceps, gently dilacerate tissue. Separate the salivary glands and open the tracheal muscle to reveal the tracheal rings.Isolate the left carotid artery from the nerve with standard pattern forceps and ligate it distally with a 4-0 silk thread. Now place the suture thread on the proximal side of the artery and prepare a surgeon's knot without closing it. After clamping, use Vannas micro dissecting scissors to incise the carotid artery.With standard operating forceps, gently grasp the artery wall to enlarge the opening and cannulate the artery with the catheter provided, holding it using forceps. Gently unclamp the artery and ensure that the blood is not flowing back into the catheter. After confirming the correct blood pressure signal, advance the catheter slightly into the artery and tighten the previously prepared surgeon knot.Basal mean arterial pressure was similar between sham and hemorrhagic shock groups 24 hours post-hemorrhagic shock induction. The mean arterial pressure significantly decreased in the hemorrhagic shock group due to a reduction in diastolic blood pressure. No changes were observed in systolic blood pressure, pulse pressure, and heart rate across groups.While the shock index remained unchanged, the modified shock index exhibited a notable increase in the hemorrhagic shock group. Lactatemia, indicative of global metabolic impairment, showed a significant increase following hemorrhagic shock, further elevating after 16 hours of hemorrhagic shock. Temperature and respiration rate, markers of systemic inflammatory response syndrome remained unchanged between groups 16 hours after hemorrhagic shock induction.Behavioral assessments demonstrated an increased behavioral score in the hemorrhagic shock group, suggesting altered postures and activities.