多分析物生物芯片（MAB），基于全固态离子选择性电极（ASSISE）的生理研究

摘要

全固态离子选择性电极（ASSISEs）的建造由导电聚合物（CP）传感器提供几个月的功能寿命在液体介质中。在这里，我们描述了在实验室上的一个芯片格式ASSISEs的制造和校准过程。证明ASSISE长时间储存​​后，在复杂的生物媒体一直保持着近能斯特斜率曲线。

摘要

一个芯片上实验室（LOC）应用在环保，生物医药，农业，生物，航天科研需要的离子选择性电极（ISE），可以承受长时间储存在复杂的生物介质^1-4。一种全固态离子选择性电极（ASSISE）是上述的应用特别有吸引力的。电极应具有以下良好的特性：施工方便，维护成本低，和（潜在的）的小型化，可以进行批量处理。甲微加工ASSISE的用于量化的Ca ^{2 +，H +，CO} ₃ ^{2 -}离子的构建。它由一个贵金属电极层（ 例如铂），转导层和一个离子选择膜（ISM）的层。的转导层的功能的转导的浓度依赖型的离子选择性膜的化学势成可测量的电信号。

Ť他一生的ASSISE被发现依赖于保持电位的导电性层/膜界面^5-7。要延长工作寿命ASSISE，在界面层，从而保持稳定的潜力，我们利用银/氯化银（Ag / AgCl电极的导电聚合物（CP），聚（3,4 -亚乙基二氧噻吩^{）（PEDOT）7-9）}作为振子层。我们构建了ASSISE在一个芯片上的实验室的格式，我们称之为多分析物的生物芯片（MAB）（ 图1）。

校准测试解决方案表明，人与生物圈计划可监测pH值（业务范围pH值4-9），CO ₃ ^{2 - （}测量范围0.01毫米- 1毫米），和Ca ^{2 +（}对数线性范围为0.01毫米至1毫米）。人与生物圈计划海藻介质，存储在近一个月后，pH值，提供了近能斯特斜率响应。的碳酸酯的生物芯片显示类似于常规的离子选择性电极的电位的配置文件。生理学一例出现的测量值来监视系统的模型，生物活性小球藻 。

人与生物圈计划传达尺寸，多功能的优势，复分析物的感应能力，使得它适用于许多密闭监控的情况下，地球上或空间。

生物芯片的设计与实验方法

生物芯片是10 x 11毫米的尺寸和有9 ASSISEs指定为工作电极（WES）和Ag / AgCl参考电极（RES）。每个工作电极（WE）的直径为240微米，平均间距为1.4毫米从RE的，直径为480微米的。这些电极连接到电接触垫的尺寸为0.5毫米×0.5毫米。的示意图如图2所示。

循环伏安法（CV）和恒电流沉积方法用于electropolymerize使用生物分析的PEDOT膜人系统公司（BASI）C3细胞支架（ 图3）。 PEDOT薄膜的反离子量身定制，以适应待测离子的利益。甲PEDOT与聚（苯乙烯磺酸）抗衡离子（PEDOT / PSS）是利用H ⁺和CO ₃ ^{2 - ，，}而硫酸钠（加入到该溶液中的CaSO _4）的是，利用的Ca ^{2 +。} PEDOT涂层的电化学性能，我们的分析中使用CVS氧化还原活性的解决方案（ 即 2毫米铁氰化钾（K _{3的Fe（CN）6））。}简历简介基于，兰德尔斯Sevcik分析被用来确定的有效表面积^10。旋涂在1,500 rpm〜2微米厚的离子选择性膜（ISMS）的人与生物圈计划工作电极​​（WES）用于铸造。

人与生物圈被包含在一个微流体的流动池室充满了150微升体积的海藻介质接触垫电连接到的BASI系统（ 图如图4）。 小球藻光合活性的监测环境光线和黑暗条件下。

研究方案

1。聚（3,4 -乙撑二氧噻吩）：聚（4 -苯乙烯磺酸钠）（PEDOT：PSS）的电化学解的H ⁺和CO ₃ ^{2 -}离子的制备

1. 加入70毫克聚（4 -苯乙烯磺酸钠）（Na ⁺的PSS ^{- ），}直到完全分散（大约10秒）〜10毫升去离子（DI）水和涡。
2. 10.7微升3,4-ethlyenedioxythiophene二氧噻吩（EDOT）加入到该溶液中，在1.1和旋涡，直到溶液完全混合。

2。制备聚（3,4 -乙撑二氧噻吩）：硫酸钙（PEDOT：的CaSO _4）的Ca ^{2 +}离子的电化学解

1. 添加136毫克的硫酸钙（ _硫酸钙）10毫升去离子水和旋涡;解决方案不会完全散去，并出现乳白色。
2. 10.7微升EDOT 2.1和旋涡的解决方案，直到完全混合。

3。 PEDOT基于电化学导电聚合物

1. 用于生物分析系统公司（BASI）C3细胞支架（ 图3）和EC小量电位/恒电流电化学形成电化学电池。将EDOT：PSS电聚合溶液的电化学电池中，氮气泡20分钟，以除去溶解的氧。
2. 载入夹有铂的纱布在反电极的电化学电池的位置。然后夹在MAB面临的铂 - 纱布与工作电极在电化学电池在工作电极上的位置。调整人与生物圈深度这样只有被淹没的圆形电极PEDOT：PSS电化学的解决方案。避免溶液接触的平方的电接触垫。
3. 放置一个BASI饱和银/氯化银（Ag / AgCl电极）电极与参比电极的电化学电池的位置。确保参比电极是不是在工作和逆流之间R电极。
4. PEDOT：PSS沉积：泡泡电化学电池为20分钟，并使用EC小量电位/恒电流运行单个循环伏安从0V - 1.1V，扫描速率为20毫伏/秒在±100μA规模。
5. 对于PEDOT： _硫酸钙沉积：泡20分钟的电化学电池中，并使用EC小量电位/恒电流运行在814 nA的30分钟计时。

4。循环伏安法在K的PEDOT基于高分子偶联₃铁_（CN）6

1. 执行步骤3.1-3.3以上。
2. 使用EC小量的电位/恒电流运行单一的循环伏安曲线与不同的扫描速率毫伏/秒（25，50，75，100，L25，150，175，200），在±10μA规模从-653 mV至853 mV的。

5。表面功能化协议

1. 存款具体在步骤3中的离子导电聚合物共轭。
2. 应用离子选择性膜，在步骤6中。

6。应用离子选择性膜

1. 中心的人与生物圈计划在真空微调夹头。
2. 存款100微升膜到人与生物圈计划和运行的中心。
3. 离子选择性膜旋涂，旋涂机在1,500 rpm的转速下持续30秒，5秒斜坡向上和向下。
4. 旋涂的人与生物圈真空30分钟，并在烘箱中于70℃下进行20分钟的烘烤芯片。

7。 PEDOT-PSS的共轭导电性高分子与pH和碳酸盐（CO ₃ ^{2 - ）}离子选择性膜的校准

1. 条件的人与生物圈计划在10微米小苏打（ _碳酸氢钠 ）和5毫米氯化钾（KCl）的藻类媒体过夜。
2. 将人与生物圈计划到微流细胞芯片持有人。
3. 注射5毫升试验溶液的初始pH值或浓度（ 例如，pH值为4或10μM，CO ₃ ^{2 - ）。}删除小家伙从流动池的芯片座的劳动和就业统计局。
4. 将芯片座到流动池的流动池的电夹具。
5. EC小量软件打开并进入开路电位（OP）模式。将时间设定为300分钟，电压范围为±1V，和截止频率为10 kHz，并记录该值每2秒。
6. 让稳定的人与生物圈计划，（看平线），然后继续与校准过程。
7. 一旦，在MAB是稳定的，与试品溶液冲洗流动池，以进行校准，并注入下一个浓度（pH为5或25μMCO ₃ ^{2 - ）。}确保无气泡被允许进入流通池。重复步骤7.5和7.6，在pH为6，7，8，和9或CO ₃ ^{2 -}浓度为50，75，100，250，500，750，和1000μM。
8. 最后的浓度已运行后，删除的人与生物圈计划和干用氮气空气。
9. 将新鲜的空调解决方案，直到下次使用的人与生物圈计划放回。

8。校准的PEDOT： _硫酸钙_氯化钙导电聚合物共轭

1. 条件的人与生物圈计划在7毫升0.1 M的氯化钙和10μM纳米₃过夜。
2. 遵循类似步骤7.2 - 7.10。在步骤8.3中，将与初始浓度为0.01 mM的CaCl ₂的碳酸试液。重复测试溶液的浓度为0.05，0.1，0.5，1和10毫米。

结果

的循环伏安图（CV）的PEDOT：PSS和其对应的还原峰电流_（I P）与扫描速度（V _1/2）的一个例子示于图5a和5b分别。 PEDOT： _硫酸钙在不同的扫描率和它的还原峰电流将不会显示。使用兰德尔斯-Sevcik分析^如图10所示，有效的表面区域的固体接触的PEDOT：PSS和PEDOT：离子选择性膜的CaSO ₄没有被发现，分别为4.4×10 ^-11?...

讨论

MAB生物芯片由的ASSISEs顶上基于PEDOT-CP的共轭转导层上的Pt电极的组合，其中一个可测量的电信号传导的离子浓度还从ISM构造。甲稳定的电极电位是指由CP层和ISM层。这两个层也决定MAB和质量的测量的电信号（噪声，漂移）的工作寿命。

PEDOT作为传导层由于其离子和电子的属性（在它的氧化形式）是特别有吸引力的。 PEDOT具有高氧化还原电容的能力，以尽量减少导电电极极化效...

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
3,4-Ethylenedioxythiophene	Sigma-Aldrich	483028
Poly(sodium 4-styrenesulfonate)	Sigma-Aldrich	243051
EC epsilon galvanostat/potentiostat	Bioanalytical Systems Inc.	e2P
Saturated Ag/AgCl reference electrode	Bioanalytical Systems Inc.	MF-2052
Pt gauze	Alfa Aesar	10283
Potassium ferricyanide	Sigma-Aldrich	P-8131
Potassium nitrate	J.T. Baker	3190-01
Sodium bicarbonate	Mallinckrodt/ Macron	7412-12
Sodium carbonate	Sigma-Aldrich	S-7127
Calcium chloride	J.T. Baker	1311-01
Potassium chloride	Sigma-Aldrich	P9541
Calcium sulphate	Sigma-Aldrich	237132
C3 cell stand	Bioanalytical Systems Inc.	EF-1085
Flow-cell chip holder			Custom, courtesy of NASA Ames
Flow-cell electrical fixture			Custom, courtesy of NASA Ames
Table 2. Specific reagents and equipment.