一个简单的方法小鼠肺插管

摘要

本文介绍了一种striaghforward和有效的方法，插管小鼠肺功能测量或肺灌注，使小鼠恢复，并在以后的时间进行研究。该过程涉及一种廉价的光纤光源直接照射的气管。

摘要

插管小鼠肺功能测量一个简单的程序有几个优势，在纵向研究数量有限，昂贵的动物。没有这样做，这是更常规的原因之一是，它是比较困难的，尽管有几个已发表的研究描述的方法来实现它。在本文中，我们展示了一个过程，消除插管与此相关联的主要障碍之一，就是在整个可视化的气管插管时。该方法使用一个0.5毫米的光纤光源，作为介绍人直接的小鼠气管插管插入气管插管。我们表明，它是可以使用此过程测量在个别小鼠的肺力学过程中，至少几个星期的时间。这项技术可以被设置以相对较少的费用和专门知识，它可以常规完成以相对较少的培训。这应该麦E - 这是任何实验室定期进行气管插管，从而使小鼠个体的纵向研究中，通过使用每个鼠标作为自己的控制，从而最大限度地减少所需的老鼠的数量和提高统计能力。

引言

布朗等人在1999年发表了一篇论文，描述小鼠肺¹气管插管的方法。这种技术具有相当的实用，在做重复肺功能或支气管肺泡灌洗在纵向研究中的单个小鼠^2。从那时起，原来的文件，已经有好几篇文章，描述了不同的方法对小鼠气管插管^3-9。虽然所有这些方法，可以成功地使用，它们通常需要大量的训练或成本。如气管插管的主要问题之一是，接近气管待插入气管插管插管方法，插管本身阻止光的可视化，因此，它需要去的地方。因此，在最关键的时候插入变得盲目。在本文中，我们将展示如何简单，廉价消除这种可视化的问题，从而确保以相对较少的培训或气管插管成功经验。

研究方案

1。准备程序

必须先取得并准备以下物品：

1. 插管，气管插管20-35克小鼠，我们使用了1或1.5英寸长，20号静脉导管（BD Insylte，火花，MD或Jelco OPTIVA，卡尔斯巴德，加利福尼亚州）。一个新的无菌导管可以用于各小鼠，但也可以重复使用导管的灭菌后，通过在70％乙醇中浸泡过夜。虽然无论是咽也不是无菌的气管鼠标适当的清洁程序，包括使用无菌手套和工具，应该得到遵守。
2. 光纤电缆，我们使用0.5毫米光缆从爱特蒙特光学≈70厘米，但长度并不重要。重要的是要确保该纤维具有其边缘平滑的，由于切割后的电缆长度用剃刀，该边缘被留下相对尖锐的，它并不需要很多的努力，刺穿气管壁。但是，我这方面的优势，从去年底约2厘米的纤维，然后几秒钟的小圈的边缘的尖端碰到了一块1000砂砾砂纸（在视频和图1的示范很容易顺利麦克唐纳等人^，10）。的另一端被插入通过一个橡胶止动件。这是最容易完成的通过第一按压止动件通过18号针头，通过针孔插入光纤，然后吸针。的橡胶止动件被连接到一个150瓦的卤素灯光源（ 例如 NCL-150，沃尔皮美国，或任何其他的或光源，什至小于150瓦特）。重要的是要确保使用塞，因为普通橡胶或软木制成的硅橡胶（或其它耐热材料），可能会烧坏时，如此接近的热光源。

2。执行气管插管

1. 请参阅图1和图2。将光纤电缆Through一小段硅橡胶管（≈0.8毫米内径x 4 mm外径，科尔 - 帕尔默，EW-96410-13）。该橡胶管的相当紧密的配合，同时仍然允许光纤电缆进行调整。插入硅胶管紧贴的Luer端的套管内的套管的光纤电缆的固定位置。调整光纤电缆的位置，以便它延伸穿过插管尖端前套管≈4毫米。
2. 放置悬浮由其上切牙（ 图3）上的垂直支承，被麻醉的小鼠。大多数研究人员找到最好的可视化的腹侧面临着自己的鼠标。非常轻轻地拉出舌头，并用拇指和食指举行。中指放置之间的颈部和塑料支撑。在舌头上，用食指和拇指牵引开这个口，并伸直插管路径，调整头的角度脖子后面用中指如图3中所示。
3. 作为光源和导引器使用光纤电缆，将其推通过声带的可视化。如果电源线是不可见的，轻轻一拉更难在舌头上，用中指的支持。当插入，进一步推进套管≈5毫米。然后非常小心地不要移动套管，退出光纤电缆。的Lie鼠标向下和固定套管用一条胶带上的一块支持套管集线器橡皮（造型粘土），如在图4中示出。
4. 在步骤3中的程序不能被很容易教导甚至表明，因为它是一个单独的操作。然而，通过细微的调整的牵引头的舌头和背后支持几乎所有的试试这个很快找到合适的方式来定位的鼠标，以可视化的声带。

结果

作为评价的方法，我们使用了4个20周龄雄性BALB / c小鼠的平均体重（±SEM）27.7±0.40克的。他们连续五周进行了研究，其中的肺阻力的测定是使用如前面所述的一个系统^11。每只小鼠用氯胺酮（100微克/克体重）和甲苯噻嗪（15微克/克体重）在盐水中通过IP注射麻醉。然后，他们被插管如上所述。如果有任何疑问，是否是在气管和食道插管，这可以使用一个小的牙科镜验证。保持镜像冷冻箱中?...

讨论

这里介绍的方法具有几个优点。首先，该装置是简单的和相对便宜的..制造该装置不需要任何特殊工具或昂贵的设备。用导管引入的光源也意味着，一个不能忽视的气管开口，介绍人靠近气管的开口。使用0.5毫米导引也供应，以尽量减少创伤，可能会出现的一个更大的套管的初始插入。这里我们注意到，类似的光学探针是从商业供应商（布伦特里科学，旅游Braintree，MA）。他们的移动设备使用一个...

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
材料	公司	产品编号	评论
气管插管套管	BD Insylte，火花，MD或Jelco OPTIVA，卡尔斯巴德，加利福尼亚州		1英寸长，20号静脉注射（IV）导管
光纤电缆	爱特蒙特光学，巴林顿，新泽西州	NT02-542	大约2英尺长，0.5毫米的光纤（通信级塑料光纤）。应圆润的边缘的纤维端插入气管的纤维≈2厘米的结束，然后让小圆圈拖动笔尖上的1000砂砾埃默里纸的几秒钟。
光源	沃尔皮	NCL-150	虽然我们使用了150-W卤素光源，任何同等光源，甚至以低得多的功率都可以使用。
硅橡胶塞			A＃1硅橡胶塞适合本演示中使用的光源。不同的光源，可能需要不同的大小。
小硅橡胶管	科尔 - 帕默	EW-96410-13	A≈1.5厘米的硅橡胶管（内径0.8，4毫米外径）
直角支架			我们的有机玻璃，但constucted线或金属丝，以近乎垂直的角度，可以贴在按住鼠标可用于任何材料。