Eine einfache Methode der Maus Lung Intubation

Zusammenfassung

Dieses Papier beschreibt eine striaghforward und effiziente Methode zur Intubation Mäusen Lungenfunktion Messungen oder pulmonale Instillation, dass die Mäuse sich zu erholen und zu späteren Zeitpunkten untersucht werden können. Das Verfahren beinhaltet eine kostengünstige LWL-Lichtquelle, die direkt beleuchtet die Luftröhre.

Zusammenfassung

Ein einfaches Verfahren, um Mäuse für Lungenfunktion Messungen intubieren hätte mehrere Vorteile in Längsschnittstudien mit einer begrenzten oder teure Tier. Einer der Gründe, dass dies nicht geschieht routinemäßig mehr ist, dass es relativ schwierig ist, obwohl es mehrere veröffentlichte Studien, die Wege dies zu erreichen beschreiben. In diesem Papier zeigen wir ein Verfahren, das eine der größten Hürden mit dieser Intubation assoziiert, dass der Visualisierung die Luftröhre während der gesamten Zeit der Intubation beseitigt. Der Ansatz nutzt eine 0,5 mm LWL-Lichtquelle, die als Einführer die Intubation Kanüle in die Luftröhre Maus lenken dient. Wir zeigen, dass es möglich ist, dieses Verfahren zu verwenden, um Lungenmechanik in einzelnen Mäusen über einen Zeitverlauf von mindestens mehreren Wochen zu messen. Die Technik kann mit relativ geringem Aufwand und Erfahrung eingestellt werden, und es kann routinemäßig mit relativ wenig Ausbildung erreicht werden. Dies sollte makê es jedem Labor routinemäßig Durchführung dieses Intubation, wodurch Längsschnittstudien in einzelnen Mäusen, wodurch eine Minimierung der Anzahl von Mäusen benötigt und Erhöhen der statistische unter Verwendung jeder Maus als seine eigene Kontrolle.

Einleitung

In 1999 veröffentlichte Brown et al. Ein Papier beschreibt eine Methode zur Intubation der Mauslunge ^1. Eine solche Technik hat erhebliche Utility dabei wiederholen Lungenfunktion oder Bronchalveolarlavages in einzelnen Mäusen in Längsschnittstudien ^2. Seit diesem ursprünglichen Papier, gab es mehrere andere Papiere, die verschiedene Ansätze beschrieben haben, um mit der Maus Intubation ^3-9. Während all dieser Verfahren erfolgreich verwendet werden kann, sie in der Regel nur mit erheblichem Ausbildung oder einsehbar. Eines der Hauptprobleme bei solchen Intubation ist, dass die Intubationskanüle Ansätze nähert sich die Luftröhre anstehenden Insertion, sperrt die Kanüle selbst das Licht und damit die Visualisierung von wo es gehen muss. Somit wird das Einführen blinden am meisten kritischen Zeitpunkt. In diesem Papier zeigen wir, wie einfach und kostengünstig zu beseitigen diese Visualisierung Problem, wodurch eine erfolgreiche Intubation mit relativ wenig Training oderErfahrung.

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Protokoll

Ein. Vorbereitung für die Vorgehensweise

Man muss zuerst erhalten und bereiten die folgenden Elemente:

1. Die Kanüle. Für Intubation von 20-35 g Mäusen, verwenden wir eine 1 oder 1,5 Zoll lang, 20 Gauge IV-Katheter (BD Insylte, Sparks, MD oder Jelco Optiva, Carlsbad, CA). Ein neuer steriler Katheter kann für jede Maus verwendet werden, aber Kathetern können auch nach der Sterilisation durch Einweichen in 70% Ethanol über Nacht wiederverwendet werden. Obwohl weder der Rachen noch Trachea der Maus ist steril richtigen Sauberkeit Verfahren, einschließlich der Verwendung von sterilen Handschuhen und Instrumente angewendet werden sollten.
2. Die faseroptische Kabel. Wir verwenden ≈ 70 cm von 0,5 mm optische Kabel von Edmund Optics, aber die Länge ist nicht kritisch. Es ist wichtig, sicherzustellen, dass die Faser ihrem Rand geglättet, da nach dem Schneiden des Kabels zu Länge mit einer Rasierklinge, die Kante nach links relativ scharfe, und es nimmt nicht viel Aufwand zu durchstechen die Trachealwand. Allerdings ist es is sehr leicht, diese Kante, indem die Faser etwa 2 cm vom Ende und dann machen kleine Kreise für ein paar Sekunden mit den Kanten der Spitze berühren ein Stück 1.000 Schmirgelpapier (siehe Demonstration in der Video-und der Abbildung 1 zu glätten MacDonald, et al. ^10). Das andere Ende ist durch einen Gummistopfen gesteckt. Dies geschieht am einfachsten, indem erste Schiebeglied eine 18-Gauge-Nadel durch den Stopfen, Einführen des Lichtwellenleiters durch die Nadelbohrung, dann Zurückziehen der Nadel erfolgt. Der Gummistopfen mit einer 150 Watt Halogen-Lichtquelle angeschlossen ist (zB NCL-150, Volpi USA, oder jede andere Lichtquelle oder sogar weniger als 150 Watt). Es ist darauf zu achten, um einen Stopfen aus Silikongummi (oder anderen hitzebeständigen Material) zu verwenden, da gewöhnlichen Gummi oder Kork kann verbrennen, wenn sich so nahe an der heißen Lichtquelle.

2. Durchführung der Intubation

1. Siehe Abbildungen 1 und 2. Legen Glasfaserkabel turch ein kurzes Stück aus Silikon-Kautschuk-Schlauch (≈ 0,8 mm ID x 4 mm OD, Cole-Palmer, EW-96410-13). Tie dieses Gummischlauch ziemlich eng, solange noch die Glasfaserkabel angepasst werden. Einsetzen der Silikonschlauch gut in der Luer Ende der Kanüle fixiert das Glasfaserkabel Position in der Kanüle. Passen Sie die Position des Fiberkabels so dass es sich durch die Kanüle ≈ 4 mm vor der Kanülenspitze.
2. Platzieren Sie die anästhesierten Maus auf einem vertikalen Träger, der mit seinem oberen Schneidezähne (Abbildung 3) suspendiert. Die meisten Ermittler finden Sie die besten Visualisierung mit der Bauchseite der Maus vor sich. Sehr vorsichtig die Zunge heraus und halten Sie mit Daumen und Zeigefinger. Der Mittelfinger ist zwischen dem Hals und Kunststoffträger platziert. Traction auf der Zunge mit dem Daumen und Zeigefinger wird verwendet, um den Mund zu öffnen, und die Intubation Weg begradigen, wird der Winkel des Kopfes mit dem Mittelfinger hinter dem Hals eingestelltin 3 gezeigt.
3. Mit dem LWL-Kabel als Lichtquelle und Einführhilfe, schieben Sie es durch die visualisierte Stimmbänder. Wenn die Kabel nicht sichtbar sind, sanft schwerer ziehen auf der Zunge mit dem Mittelfinger als Unterstützung. Nach dem Einlegen voran die Kanüle ≈ 5 mm weiter. Dann sehr vorsichtig nicht zu bewegen die Kanüle zurückziehen Glasfaserkabel. Liegen die Maus nach unten und sichern Sie die Kanüle mit einem Stück Klebeband und unterstützen die Kanülenansatz auf ein Stück Knetmasse (Modelliermasse), wie in Abbildung 4 dargestellt.
4. Das Verfahren in Schritt 3 nicht leicht gelehrt oder sogar nachgewiesen werden, da es ein Solobetrieb ist. Doch durch subtile Anpassungen der Traktion auf der Zunge und der Unterstützung hinter dem Kopf fast alle, die versuchen, diese bald den richtigen Weg finden, um die Maus zu positionieren, um die Stimmbänder zu visualisieren.

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Ergebnisse

Als Bewertung des Verfahrens verwendeten wir vier 20 Wochen alte männliche BALB / c-Mäuse mit einem durchschnittlichen Gewicht (± SEM) von 27,7 ± 0,40 g auf. Sie wurden auf fünf aufeinanderfolgende Wochen untersucht, wobei die Lungenwiderstand wurde unter Verwendung eines Systems, wie zuvor beschrieben ^11. Jede Maus wurde mit Ketamin (100 ug / g BW) und Xylazin (15 ug / g BW) in Kochsalzlösung über IP-Injektion. Sie wurden dann intubiert wie oben beschrieben. Wenn es irgendeinen Zweifel, ob die Kanüle...

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Diskussion

Das hier beschriebene Verfahren hat mehrere Vorteile. Zunächst wird die Vorrichtung ist einfach und relativ kostengünstig .. Die Herstellung des Gerätes erfordert keine speziellen Werkzeuge oder teure Ausrüstung. Die Verwendung eines Katheters führt, daß auch die Lichtquelle bedeutet, daß man nie verliert der Trachealöffnung als die Einführeinrichtung die Trachealöffnung nähert. Die Verwendung eines 0,5 mm Einführungsvorrichtung dient auch dazu, Trauma, das mit einem anfänglichen Einsetzen eines größeren ...

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Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
Material	Firma	Katalog #	Kommentar
Intubationskanüle	BD Insylte, Sparks, MD oder Jelco Optiva, Carlsbad, CA		1-in.-länge, 20-Gauge intravenöse (IV)-Katheter
LWL-	Edmund Optics, Barrington, NJ	# NT02-542	Etwa 2-ft Länge von 0,5-mm-Glasfaser (Communication hochwertigem Kunststoff-Faser). Der Rand des Faserendes, die in die Luftröhre eingeführt wird, sollte vorsichtig, indem die Faser ≈ 2 cm vom Ende und dann machen kleine Kreise, während Sie den Tipp für ein paar Sekunden auf 1.000-grit emory Papier abgerundet werden.
Light Source	Volpi	NCL-150	Obwohl wir einen 150-W-Halogen-Lichtquelle, einer äquivalenten Lichtquelle, selbst mit sehr viel geringeren Wattzahlkönnen verwendet werden.
Silikon Gummistopfen			A # 1 Silikonkautschuk Stopfen passt der Lichtquelle in dieser Demonstration verwendet. Verschiedene Lichtquellen können eine unterschiedliche Größe.
Kleine Silikonkautschuk Rohr	Cole-Palmer	EW-96.410-13	A ≈ 1,5 cm großes Stück aus Silikonkautschuk Rohrleitung (Innendurchmesser 0,8, 4 mm Außendurchmesser)
Angled Ständer			Ours ist aus Plexiglas constucted, sondern jedes Material, an dem ein Faden oder Draht kann angebracht, um die Maus an einer nahezu senkrechten Winkel zu halten werden können verwendet werden.