マウス肺挿管の簡単な方法

要約

本論文では、マウスが回復することを可能にし、それ以降の回で学んだことが肺機能測定や肺点滴用のマウスを挿管のstriaghforwardかつ効率的な方法を説明します。手続きは、直接気管を照らす安価な光ファイバ光源を必要とする。

要約

肺機能測定のためのマウスを挿管するための簡単​​な手順では、限られた数字や高価な動物との縦断的研究では、いくつかの利点を持っているでしょう。これは、より日常的に行われていないことを理由の一つは、それを達成するための方法を説明するいくつか発表された研究があるにもかかわらず、相対的に難しいということです。本稿では、挿管の全体の時間の間に気管を可視化することが、この挿管​​に関連する主要なハードルの一つを排除する手順を示しています。アプローチは、マウスの気管内に挿管カニューレを指示するイントロデューサとして機能0.5ミリメートルファイバーオプティックライトソースを使用します。我々は、それが少なくとも数週間の時間経過とともに、個々のマウスの肺メカニクスを測定するためにこのプロシージャを使用することが可能であることを示している。技術は、比較的少ない費用と専門知識を使用して設定することができ、それが日常的に比較的少しのトレーニングで達成することができる。これは、MAKべき日常的にこの挿管を行うために、任意の実験室のための可能な電子ば、それによって個々のマウスにおける縦断的研究、それによって必要とされるマウスの数を最小限にし、独自のコントロールとして、それぞれのマウスを使用して統計的検出力を増加させることを可能にする。

概要

1999年には、ブラウンらは、マウス肺¹の挿管のための方法を説明する論文を発表した。このような技術は、縦断的研究²における個々のマウスにおける反復肺機能や気管支肺胞洗浄を行う際に、かなりのユーティリティを持っています。そのオリジナルの紙なので、マウス挿管^3月9日に異なるアプローチを説明してきた他のいくつかの論文があった。これらの方法のすべてが正常に使用できますが、彼らは通常、かなりのトレーニングやコストを必要とします。そのような挿管の主な問題の一つは、挿管カニューレが近づくにつれて気管保留中の挿入に近づく、カニューレ自体が故に光、それが行く必要がどこの可視化を阻止することである。したがって、挿入が最も重要な時期にあるブラインドになります。本稿では、それによって、比較的少ないトレーニングで成功した挿管を確保するか、または、簡単かつ安価この可視化の問題を解消する方法を示し経験。

プロトコル

1。手順の準備

一つは、最初に以下のアイテムを入手し、準備する必要があります。

1. カニューレ。20〜35グラムのマウスの気管内挿管については、我々は長い1または1.5インチ、20ゲージの静脈カテーテル（BD Insylte、スパークス、MDまたはJelco Optiva、Carlsbad、CA）を使用しています。新しい滅菌カテーテルを各マウスに使用することができますが、カテーテルはまた一晩70％エタノールに浸漬することにより、滅菌後に再使用することができます。マウスの咽頭気管もどちらも滅菌手袋や楽器の使用を含め、適切な無菌の清浄度の手続きであるが、従わなければならない。
2. 光ファイバーケーブルは、我 々は、エドモンド·オプティクスから0.5mmの≈70センチメートル光ケーブルを使用していますが、長さは重要ではありません。これは、カミソリで長さにケーブルを切断した後、エッジは比較的鋭い残されているので繊維は、その縁平滑化を持っていることを確認することが重要であり、それは気管壁を貫通するくらいの努力を取ることはありません。しかし、私はの端から約2cmファイバを保持してから、千グリットのエメリー紙（の映像と図1のデモンストレーションをご覧に触れるなど先端の縁に数秒間小さな円を作ることで、この縁を滑らかにするのは非常に簡単マクドナルドら ^10）。もう一方の端はゴム栓に挿通されている。これは、最も簡単にまず針を引っ込める、ストッパーを介して、18ゲージの針を押し込み、針穴を通して光ファイバを挿入することによって達成される。ゴム栓は、150ワットのハロゲン光源（ 例えば 、NCL-150、ボルピ米国、またはその他の、光源、偶数未満150ワット）に接続されている。暑い光源に近いので位置する場合は通常のゴムやコルクが燃えるかもしれないので、シリコーンゴム（または他の耐熱性材料）で作られたストッパーを使用することを確認することが重要です。

2。挿管を行う

1. 図1と図2を参照してください。光ファイバケーブルtを挿入hroughシリコーンゴムチューブの短い曲（≈0.8ミリメートル内径x外径4ミリメートル、コール - パーマー、EW-96410から13）。まだ光ファイバケーブルを調整することを可能にしながら、かなりタイトなこのゴムチューブを接続します。カニューレのルアー終わりにぴったりのシリコンチューブを挿入するカニューレ内部の光ファイバ·ケーブルの位置を修正しています。それがカニューレ先端の前にカニューレ≈4ミリメートルを通って延びるように、ファイバーオプティックケーブルの位置を調整します。
2. その上顎（ 図3）によって中断され、垂直支持に麻酔マウスを置きます。ほとんどの研究者は、自分自身が直面しているマウスの腹側で最高の可視化を見つける。非常に優しく舌を引き出し、親指と人差し指で押したままにします。中指は首とプラスチック支持体との間に配置されます。人差し指と親指で舌の上でトラクションが口を開こうと、挿管経路をまっすぐにするために使用され、ヘッドの角度は、首の後ろに中指で調整されている図3に示す。
3. 光源および導入として光ファイバケーブルを使用して、可視化声帯を通してそれをプッシュする。コー​​ドが表示されていない場合は、そっとサポートとして中指を使って舌の上で懸命に引っ張る。挿入されると、さらにカニューレ≈5ミリメートルを進める。その後、 カニューレを移動しないように非常に注意して、光ファイバケーブルを引き出す。マウスを横になってテープでカニューレを固定すると、 図4に示すようにプラスチシン（モデリングクレイ）の作品にカニューレハブをサポートしています。
4. それはソロの操作ですので、ステップ3の手順を簡単に教えたりさえ、例証することはできません。しかし、舌と頭の後ろのサポートのトラクションの微妙な調整によりほぼこれを試した全ての人はすぐに声帯を視覚化するためにマウスを置くための正しい方法を見つける。

結果

方法の評価として、我々は27.7の平均重量（±SEM）±0.40 gで4つの20週齢の雄BALB / cマウスを使用していました。彼らは肺抵抗が以前^11に記載され^ているよう^に 、システムを用いて測定した5週連続、について調査を行った。各マウスは、IP注射を介して生理食塩水にケタミン（100μg/ gでBW）およびキシラジン（15μg/ gで、BW）で麻酔しました。上記のように彼らはその後挿管...

ディスカッション

ここで説明する手順では、いくつかの利点があります。最初の装置はシンプルで比較的安価である..装置の製作は、特別なツールや高価な設備を必要としません。カテーテルの使用はまた、光源が一つは紹介者が気管開口部に近​​づくにつれて、気管開口部の視力を失うことがないことを意味していることを紹介しています。 0.5ミリメートル導入器の使用はまた、大規模なカニューレの最?...

資料

Name	Company	Catalog Number	Comments
材料	会社	カタログ＃	コメント
挿管カニューレ	BD Insylte、スパークス、MDまたはJelco Optiva、カールスバッド、カリフォルニア州		1インチの長さの、20ゲージの静脈内（IV）カテーテル
光ファイバー·ケーブル	エドモンド·オプティクス、バーリントン、ニュージャージー州	＃NT02-542	0.5mmの光ファイバー（通信グレードのプラスチック繊維）の約2フィートの長さ。気管内に挿入されたファイバ端の縁がやさしく≈2 CMエンドからファイバを保持した後、1000グリットエモリー紙に数秒間先端をドラッグしながら小さな円を作って丸めなければならない。
光源	ボルピ	NCL-150	私たちも、はるかに低いワット数150 Wのハロゲン光源は任意の同等な光源を使用していますが使用することができます。
シリコーンゴム栓			第1位シリコーンゴム栓はこのデモで使用される光源に適合します。異なる光源は異なるサイズを必要とするかもしれません。
小さいシリコーンゴムチューブ	コー​​ル - パーマー	EW-96410から13	シリコーンゴムチューブの≈1.5センチメートルピース（0.8内径4ミリメートル外径）
アングルド支持スタンド			我々は、プレキシガラスからconstuctedされていますが、スレッドまたはワイヤーがほぼ垂直の角度でマウスを保持するために貼り付けることができるため、任意の材料を用いることができる。