视网膜缺血再灌注损伤的小鼠模型通过眼压升高

摘要

本文介绍了在小鼠高眼压诱导视网膜缺血再灌注损伤的过程。视网膜缺血再灌注损伤的高眼压用于人类疾病视网膜特点是妥协的氧气和营养物质的交付模式，使研究人员能够检查视网膜神经血管单元的人类疾病的潜在细胞机制和治疗。

摘要

视网膜缺血再灌注（I / R）是有助于在多个眼部病症，包括青光眼，糖尿病性视网膜病和视网膜血管阻塞的细胞损伤病理生理过程。 I / R损伤的啮齿动物模型中提供显著见解为人类I / R损伤的机制和治疗策略，特别是关于在视网膜神经血管单元神经变性损伤。这里介绍的是通过眼内压（IOP）升高诱导小鼠视网膜I / R损伤的协议。在这个协议中，眼部前房插管用针，通过该流动升高​​盐水储层的滴注。使用该滴提高眼压上述收缩动脉血压，从业者暂时停止内视网膜血流（缺血）。当循环被除去套管的恢复（再灌注），严重的细胞损伤随之而来，在视网膜的神经变性，最终导致。最近螺柱IES表明炎症，血管通透性和毛细管变性作为该模型的另外的元件。相比于替代视网膜I / R方法，如视网膜动脉结扎术，视网膜我/ R损伤的高眼压有优势在其解剖的特殊性，实验可追踪性和技术辅助，呈现自己作为一个有价值的工具，用于检查神经元病机及治疗视网膜神经血管单元。

引言

视网膜缺血再灌注（I / R）表征许多人视网膜病变，包括青光眼，糖尿病性视网膜病和视网膜血管闭塞^1。在视网膜我/ R，血流量减少（缺血）在视网膜血管造成视网膜过敏的氧气和其他营养物质，沉淀严重的氧化和炎症损伤的状态时，循环后来又恢复（再灌注^）2。视网膜神经似乎特别容易受到这些变化，患有视网膜神经变性的也许就是我/ R引起的损伤最鲜明的特点。这里介绍的是在小鼠模型视网膜I / R损伤的协议。这项技术使研究人员能够检查视网膜神经血管单元的人类疾病的潜在机制和治疗策略。

通过寻求理解手术贫血³的神经退行性后果外科医生于1952年首创，罗登ŧ视网膜的I /高眼压（IOP）R于1991年重新建立缺血损伤后⁴标准化神经退行性端点的目的。用盐水贮存提高眼压以上收缩压的滴，这些研究表明，加压眼部插管足以中止视网膜循环，并由此引发的神经元变性。使用视网膜我/ R高眼压最近的努力已开始拟订底层I / R引起的视网膜神经性变性^5-12机制。多组报道额外的病理改变包括炎症^13,14，血管通透性^15,16，和毛细血管变性^14,17。总之，这些研究已经更加普遍建立高眼压视网膜I / R损伤视网膜神经血管疾病的模型。

表征I / R损伤的机制是对VA的研究必不可少scular疾....

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研究方案

伦理学声明:所有程序均按照由约翰霍普金斯大学机构动物护理和使用委员会规定的准则进行。

注意:在拍摄过程中使用的小鼠是从杰克逊C57BL / 6小鼠，虽然也可以使用其他啮齿动物品系或物种。当使用其他菌株或物种，应注意麻醉剂量和伤害时间表可能会有所不同。它适应I / R的条件，以适应应变，物种和实验的变化是重要的。

1.准备麻醉鸡尾酒

1. 结合1.25毫升氯胺酮，0.625毫升赛拉嗪，0.375毫升乙酰丙嗪，和22.75毫升磷酸盐缓冲盐水在50毫升离心管中。
   注意:对于手稿的其余部分，该解决方案将被称为鸡尾酒。
2. 过滤到鸡尾酒用60毫升注射器和0.20微米的过滤器的新的无菌50ml离心管中。标签和日期这个新涂是。
3. 完全包住鸡尾酒管在铝箔以防止麻醉剂的光诱导降解。
   注:鸡尾酒可在室温下保存和再使用直至其最早的过期的成分的到期日。

2.准备麻醉助推器

1. 在50ml离心管中，结合4毫升氯胺酮和16毫升磷酸盐缓冲盐水。
   注:该解决方案将作为今后助推器被称为。
2. 过滤成助推器用60毫升注射器和0.20微米的过滤器的新的无菌50ml离心管中。标签和日期这一新管。
   注:助力器可以在室温下保存和再使用直至其最早的过期的成分的到期日。
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结果

由高眼压视网膜的I / R的神经变性的影响通常进行评价使用两个标准的方法。神经核的NeuN免疫标记已经揭示以下I / R损伤（ 图1）显著神经元细胞的损失。简单地说，眼睛剜7天I / R固定后，多聚甲醛，与神经细胞的NeuN标记标记和全装。图像用共焦显微镜拍摄的，并标有的NeuN细胞通过计数¹¹定量。减少在神经节细胞层的神经元计数指示I / R诱导的细胞死?.......

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讨论

视网膜我/ R损伤的高眼压已经证明了其在模拟细胞损伤和功能障碍，神经退行性疾病特别是在啮齿动物的视网膜神经血管单位效用。这个程序提供了一个强大的控制组织在技术成熟度而言很方便。它已经在这方面和其他I / R损伤模型，增加的压力和缺血的持续时间可能会增加损伤程度²⁴被注意到。出于这个原因，一些从业者选择使用缺血性压力和持续时间与此处^4,6-10,12提出不同。?.......

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材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Heparin Sodium Injection, USP	Abraxis Pharmaceutical Products		1,000 USP/ml
BSS Sterile Irrigating Solution	Alcon Laboratories, Inc.	9007754-0212	500 ml
SC-2 kg Digital Pocket Scale	American Weigh Scales, Inc.	SC-2 kg
Tropicamide Ophthalmic Solution USP 1%	Bausch + Lomb		1% (10 mg/ml)
Proparacaine Hydrochloride Ophthalmic Solution USP, 0.5%	Bausch + Lomb		0.5% (5 mg/ml)
INTRAMEDIC Polyethylene Tubing	Becton Dickinson and Company	427400	Inner diameter: 427400
30 G 1/2 PrecisionGlide Needles	Benton Dickinson and Company	305106
BC 1 ml TB Syringe, Slim Tip with Intradermal Bevel Needle, 26 G x 3/8	Benton Dickinson and Company	309625
BD 60 ml Syringe Luer-Lok Tip	Benton Dickinson and Company	309653
Zeiss OPMI Visu 200/S8 Microscope	Carl Zeiss AG	000000-1179-101
Sterile Syringe Filter	Corning Inc.	CLS431224	0.20 µm
Durasorb Underpads	Covidien	1038	23 x 24 inches
Alcohol Prep	Covidien	6818	2 Ply, Medium
Student Dumont #5 Forceps	Fine Science Tools	91150-20
Hartman Hemostats	Fine Science Tools	13002-10
Primary Set, Macrobore, Prepierced Y-Site, 80 Inch	Hospira	12672-28
Phosphate Buffered Saline pH 7.4 (1x)	Invitrogen	10010-049	500 ml
Distilled water	Invitrogen	15230-204	500 ml
C57BL/6J Mice	The Jackson Laboratory	664
AnaSed Injection: Xylazine Sterile Solution	LLOYD, Inc.		20 mg/ml
Lubricating Jelly, Water Soluble Bacteriostatic	MediChoice		3-Gram Packet
NAMIC Angiographic Pressure Monitoring Manifold	Navilyst Medical, Inc.	70039355	5-Valve Manifold with Seven Female Ports
Goniosoft, Hypromellose 2.5% Ophthalmic Demulcent Solution: Hydroxypropyl Methylcellulose	OCuSOFT, Inc.		2.5% (25 mg/ml)
Ketaset CIII: Ketamine Hydrochloride	Pfizer, Inc.		100 mg/ml
Trans-Pal I.V. Stand	Pryor Products	372	Furnished with a home-constructed 60-cm stainless steel extension
Acepromazine: Acepromazine Maleate Injection, USP	Vet One		10 mg/ml
V-Top Surgery Table/Adjustable Hydraulic	VSSI	100-4041-21
Tube Fitting Luer Male to Luer Male	Warner Instruments	64-1579