生物相容的液晶弹性体泡沫的合成中用作细胞支架的三维空间细胞培养

摘要

这项研究提出了一种方法来制备3D，基于生物相容的侧链液晶弹性体（LCES）可生物降解的，泡沫状细胞支架。共聚焦显微镜实验表明，泡沫状LCES允许细胞附着，增殖和C2C12s成肌细胞的自发排列。

摘要

在这里，我们提出了一种一步一步制备3D，可生物降解的，泡沫状细胞的支架。这些支架是由交联的星形嵌段共聚物设有胆固醇单元作为侧链的侧基，从而导致近晶A（SMA）液晶弹性体（LCES）制备。泡沫状的支架，使用金属模板制备，设有相互连接的微通道，这使得它们适合作为三维细胞培养物的支架。金属泡沫的和弹性体的结果中相比于传统的多孔模板膜，但质量传输的还更好的管理（ 即，营养物，气体，废物促进不仅更高的细胞增殖的三维细胞骨架的规则结构的综合性能等 ）。所述金属模板的性质允许泡沫的形状（ 即，轧辊或薄膜）的易操作和用于不同的孔径为不同细胞研究的支架的制备，同时保留互连线模板的泰德多孔性。蚀刻过程中不影响弹性体的化学成分，并保持其生物相容性和生物降解性质。我们发现，这些碟状LCES，培养广泛的时间段时，使临床相关的和复杂的组织结构的研究，同时促进细胞的生长和增殖。

引言

有设计用于细胞研究和用于组织再生瞄准细胞附着和增殖^{1，2，3，4，5}应用生物和生物相容的合成材料的几个例子。已经有生物相容的材料，被称为液晶弹性体（LCES）的几个例子，这可能具有各向异性分子订货^6,7对外部刺激作出响应。 LCES是刺激响应材料，与光学功能性和液晶⁸的分子排列^，9结合弹性体的机械和弹性性能。 LCES可以响应于外部STIM经历形状的改变，机械变形，弹性行为，和光学性能ULI（ 即 ，热，胁迫，光等 ^{）10，11，12，13，14，15，16。}早先的研究已经表明，液晶（LCS）能够感测单元^4，17的生长和取向。这是可能然后假设LCES可以适合于生物学和医学相关的应用程序，包括细胞骨架和对齐。我们以前曾报道近晶生物相容的，可生物降解的，铸塑，和薄LCES膜设有一个"瑞士奶酪型"多孔形态^6，18的制备。我们还制备了球状形态向列生物相容性LCES作为支架用于细胞生长¹⁹ <^SUP>，20。我们的工作的目的是调整材料的机械性能匹配的利息²¹组织的。此外，这些研究集中于理解弹性体 - 细胞相互作用，以及当所述弹性体受到外界刺激的细胞应答。

的主要挑战是在部分以定制LCES以允许通过弹性体基质细胞附着和渗透的孔隙率和更好的质量传输。这些薄膜⁶的孔隙率允许细胞渗透通过本体的基体，但不是所有的毛孔呈完全互连的或具有更规则的（均匀的）孔径。然后，我们就呈球状形态的生物相容性向列LCE弹性体的报道。允许这些向列型弹性体的附着和细胞的增殖，但孔尺寸只有10-30微米，这阻止或不等限于使用这些弹性体与更广泛的各种细胞系^19，20。

通过Kung 等前期工作。与石墨烯泡沫的使用"牺牲"模板金属形成为，所获得的石墨烯泡沫具有由所选择的金属模板²²决定的非常规则的多孔形态。这种方法提供了孔隙率和孔径的完全控制。与此同时，所述金属模板的延展性和柔韧性允许之前泡沫制备不同的模板的形成形状。其它技术，如材料浸出^23，气体模板^24，或电纺纤维^25，26也为多孔材料的制备中的潜力，但它们更耗时的，并且，在一些情况下，孔尺寸被限制为只有几微米。泡沫样的3D LCES使用金属模板允许更高的小区负载制备一种改进的扩散率;共培养;并且，最后但并非最不重要的，更好的质量运输管理（ 即营养物质，气体和废弃物），以确保全组织发展^27。泡沫状3D LCES似乎也改善细胞对准;这是最有可能在相对于LC吊坠感应细胞生长和细胞方向。 LC部分的LCE内的存在似乎增强与LCE支架内相对于单元格位置细胞对齐。细胞中的LCE的支柱内对齐，而没有观察到明显的取向，其中所述支柱接合在一起（结^）27。

总的来说，我们的LCE细胞支架平台作为细胞支持介质提供了机会，以调整弹性体的形态和弹性性质和具体指导（个别）的细胞类型的对齐创建一个有序，空间安排ØF细胞类似于生命系统。除了提供能够维持和引导长期细胞生长和增殖的支架，还LCES允许动态实验，其中细胞定向和相互作用可能在运行中修改。

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研究方案

注意:使用3臂星形嵌段共聚物的三维LCE泡沫状制剂下面的步骤示于图1。用于核磁共振（NMR）表征，光谱在在Bruker DMX 400MHz的仪器室温记录在氘代氯仿（CDCL _3）和内部在7.26引用残余峰。傅里叶变换红外（FT-IR）光谱使用利用衰减全反射模式的Bruker矢量33 FT-IR光谱仪记录。对于以下协议中的每个步骤中，穿适当的个人防护服（PPE）是重要的。

1.α氯ε己内酯的合成（单体）（根据杰罗姆等中的程序^。28）

1. 在开始合成之前，净化27克的3-氯过苯甲酸，如下所示:
   1. 在800毫升的蒸馏水中，添加1.28克钠磷酸盐一水合物和8.24克磷酸氢二钠七水合物。将pH调节到7.4（用氢氧化钠或盐酸）和储备30毫升的该溶液;这是缓冲溶液。
   2. 在35毫升乙醚使用分液漏斗，溶解3-氯过苯甲酸。洗用10mL的缓冲溶液中的有机溶液（在步骤1.1.1制备。）。重复洗三次。
   3. 加入3克硫酸钠直接将有机溶液;这种干燥剂从有机溶液中吸收水。
   4. 过滤该溶液以除去干燥剂。通过在850毫巴和40℃下使用旋转蒸发器在减压下浓缩滤液。
2. 在超声浴中搅拌溶解18.5克在150毫升无水二氯甲烷纯化3-氯过苯甲酸的;这个过程通常需要20分钟。将分液漏斗内的解决方案。
3. 内双颈，圆底烧瓶中，利用在氮气下磁力搅拌溶解13.1克2-氯环在15毫升无水二氯甲烷中。不断搅拌。
4. 适合的含3-氯过苯甲酸溶液（来自步骤1.2）的分液漏斗中的两颈烧瓶中，在步骤1.3。冲洗用氮气系统。调整分液漏斗中的开口中，使得氯过苯甲酸溶液逐滴落入2-氯环溶液（1滴每隔一秒），并继续搅拌下氮气的混合物96小时。
5. 将反应混合物冷却至-20℃1个小时，沉淀出米氯苯甲酸（ 米 -CBA）副产物。
6. 过滤米氯苯甲酸（ 米 -CBA）中，用硫代硫酸钠，碳酸氢钠，和氯化钠的饱和溶液洗涤剩余的溶液。
7. 使用旋转蒸发器在850毫巴和40℃在减压下除去溶剂。净化浅黄色，粘稠液体肥皂剂量下，在2.3乇和减压96℃ID通过蒸馏进行。
8. 监视使用以下^1个 H-NMR峰的合成的成功。 ¹ H-NMR（400MHZ，CDCL _3，δ[ppm的]）:4.75-4.68（M，1H，CH-ClCO），4.37-4.26（M，1H，C H ₂ O），4.18-4.05（M，1H ，C H ₂ O），和2.06-1.58（M，6H，-C H ₂ - ^）6,27。

2.合成α-三臂星型嵌段共聚物（SBC-αCL）通过开环共聚（Sharma 等人⁶和Amsden 等人 ^29）

1. 合成前，通过用2％（V / V）1H，1H，2H，2H- perfluorooctyltriethoxysilane的甲苯溶液填充它，并搅拌约24小时硅烷化的20mL安瓿。用异丙醇冲洗，并通过在140℃下将其放置在烘箱中30分钟干燥。
2. 添加30.64克蒸馏ε己内酯，0.5g的α氯代ε己内酯，和0.25毫升甘油的安瓿。混合使用涡旋1分钟。
3. 4.90克D的L-丙交酯添加到安瓿中并用氮气吹洗。放置安瓿在烘箱中在120℃下以熔融D，L-丙交酯;这个过程通常需要约2小时。使用旋涡，以确保所有的内容都充分混合，并添加锡的66微升再次混合（II），2-乙基己酸（SN（10月_）2）安瓿。
   注:D，L-丙交酯将在此过程中冷却下来，将需要在烘箱中熔化被重新加热。
4. 使用涡流最后一次剧烈混合并用氮气冲洗。
5. 用橡胶塞封闭安瓿。放置连接到真空管的针（房子真空通常是足够了）通过橡胶塞。打开真空和，使用火焰，熔融玻璃的长颈，慢慢扭转直到克姑娘崩溃本身。小心不要融化橡皮塞。一旦安瓿是火焰密封，将其置于砂浴，烘箱，或适当的加热元件在140℃下48小时。
6. 取出安瓿，让它冷却室温。
7. 打破在密封标记的安瓿，并通过加入10毫升二氯甲烷溶解高粘度液体。将溶液转移到分液漏斗中。
8. 制备含100毫升冷甲醇的烧瓶中（在一定温度下用干冰/丙酮浴中冷却周围-78℃）。固定在烧瓶的顶部的分液漏斗中（步骤2.7）。调整分液漏斗中的开口，使得大约两滴落入每隔一秒（逐滴）。
9. 通过过滤收集白色沉淀物（使用纸过滤器），并在50和60℃之间的真空烘箱中干燥。
10. 监视使用以下¹ H NMR和FT-IR峰合成的成功。 ¹ H-NMR（400MHZ，CDCL ₃，δ[ppm的]）:5.29-5.03（M，COCħ] C H _{3），4.43-4.25（M，CH-CL）4.24-4.12（M，C} H ₂ O），4.11-4.03（T，J = 4.6赫兹，C H ₂ O），3.80-3.68（M，] C H] C H _{2），3.09-2.64（}宽峰，S，O 1H），2.39（T，J = 4.5赫兹，α-1H），2.33 （T，J = 5.1赫兹，α-H）和1.77-1.25（M，C H _2，C H _3）; FT-IR（1 ^{/λ[-1]）:2932（S），2869（M），1741（S），961（S），866，}和^{735（M）6，27。}
    注意:为了制备更亲水的3D LCE，制备线性嵌段共聚物（LBC）代替SBC，按照以上描述的开环共聚（ROP）过程。
    1. 0.3克聚乙二醇（PEG），3.15克ε己内酯，1.0g的α氯代ε己内酯，和5.0g D的L-丙交酯添加到硅烷化的小瓶组合。

3.α-CL-三根臂SBC的合成修饰至_αN3 -三臂_{SBC（SBC-αN3）（}根据Sharma 等人^。6）

1. 在一个圆底烧瓶中并在氮气下，溶解5克SBC-αCL在30mL无水N，N"二甲基甲酰胺。
2. 添加0.22克叠氮化钠，并允许在室温下过夜反应。
   注意:叠氮化钠是有毒的;穿戴合适的个人防护服（PPE）。
3. 除去N，使用旋转蒸发器在11毫巴和40℃下减压N"二甲基甲酰胺。溶解在30毫升甲苯的混合物中。三次离心溶液在2800×g离心15分钟以除去形成的盐。使用旋转蒸发器在77毫巴和40℃在减压下蒸发甲苯。
4. 监视使用¹ H NMR和FT-IR峰的叠氮取代的成功。
   注意: ^{1个H NMR谱是类似于亲SBC-αCL，具有峰在3.90 ppm的相关的叠氮基团的外观的除外; FT-IR（1 /λ[-1]）:2928，2108（S，叠氮化物），1754（S），1450（S），960（M），865（S），733（S），和696 （M）。}

4.胆固醇合成5- Hexynoate（LC物部分）（根据Sharma 等人 ⁶和Donaldson 等 ^。30）

1. 在一个圆底烧瓶中，混合3克-5-己炔酸和130毫升的二氯甲烷中。冷却至0℃，用冰浴。
2. 在另一圆底烧瓶中，混合8.28克的N，N" -dicyclohexylcarbodiimide，10.3克胆甾醇和0.2克4-二甲基氨基吡啶。
3. 转移-5-己炔酸溶液滴加到含有胆固醇混合物的烧瓶中，并维持最终的混合物在0℃下1个小时。
4. 允许混合物升温至室温过夜。
5. 使用级415纸过滤器通过过滤除去所得到的二环己基脲沉淀并丢弃它。
6. 使用旋转蒸发器在850毫巴和40℃在减压下浓缩滤液。溶解在150毫升己烷中收集到的残余物。
7. 使用旋转蒸发器在335毫巴和40℃在减压下蒸发溶剂。添加350毫升乙醇的油状残余物，收集最终产品。洗灰白色固体用乙醇形成，并且在50℃真空下干燥该固体产物。
8. 使用以下¹ H NMR和FT-IR峰监测合成。 ¹ H-NMR（400MHZ，CDCL _3，δ[ppm的）:5.39（D，J = 4.7赫兹，1H，C H = C），4.70-4.58（M，1H，CH-OCO），2.44（T， J = 2.5赫兹，2H，C H ₂ CO），2.34（M，2H，C H ₂ -C H =），2.31（M，2H，C H ₂ C H ₂ -COO），2.28（S，1H， HC≡C），2.27（D，J = 2.3赫兹，2H，≡CCH _{2），2.07-1.06（M，2H，C} H _2，C 2H），0.94（S，3H，C H _3），0.89 （D，J = 1.8赫兹，3H，C H ₃ C H）和0.88（D，J = 1.8赫兹，6H，C H ₃ -C 2 H 4），0.67（S，3H，C H _3）。 FT-IR（1 ^{/λ[-1]）:2,830-2,990（}宽和强峰），2104（M），1695（S），1428（M），1135（M），999（S），798 （S），和667（一个或多个）。

5.合成修饰α-N ₃ -三臂SBC为α-胆固醇基三根臂SBC（SBC-αCLC）经由叠氮化物-炔烃休斯根环加加成反应（"点击"反应）获取SBC-澈（根据Sharma 等人^。6）

1. 在一个圆底烧瓶中，溶解1个摩尔当量的_{SBC-αN3（1.5}克）在100毫升新蒸馏的四氢呋喃（THF）中。添加1.2摩尔equivalen胆甾-5- hexynoate（1.94克），铜（I）的0.1摩尔当量的碘化（0.06克）吨和三乙胺的0.1摩尔当量（0.03克）。搅拌在氮气下在35℃下该混合物过夜。
2. 使用旋转蒸发器在357毫巴和40℃在减压下蒸发溶剂。
3. 溶解在80mL二氯甲烷中，并离心5分钟的残余混合物在2,800×g下在室温下，以除去未反应物及副产物。
4. 使用以下¹ H NMR和FT-IR峰监测合成。 ¹ H-NMR（400MHZ，CDCL _3，δ[ppm的）:7.54（S，CH = C-三唑），5.43-5.34（M，C = CH胆固醇），5.10-5.06（M，COCHCH _3），4.68 -4.55（M，O-CH胆固醇），4.24-4.19（M，CH ₂ O），4.18-4.13（T，J = 5.0赫兹，CH ₂ O），4.11-4.05（T，J = 4.4赫兹，CH ₂ O），2.47-2.41（T，J = 4.9赫兹，COCH _{2），2.31-2.25（M，COCH 2），2.07-1.02（M，CH 2} ，CH _{3），1.05-1.03（S，CH 2，CH 3），0.96-0.92（D，J} = 3.3赫兹，CH _{2，CH 3），0.91-0.87（DD，J} = 1.9赫兹，J = 1.8赫兹，CH _3），和0.71-0.68（S，CH _3）。 FT-IR（1 ^{/λ[-1]）:3260（S），2920（S），1710（S），1460（S），1370（S），1240（M），1190（S），733} （S），和668（一个或多个）。

6. 2,2-双（1-己内酯-4-基）丙烷（交联剂，BCP）的合成（根据Gao 等 ²⁷和Albertsson 等人 ^31）

1. 在一个圆底烧瓶中，制备含有10.8克的1,2-双（4-羟基 - 环己基）丙烷和52毫升乙酸的溶液中。
2. 在50ml乙酸和8ml的蒸馏水制备含11克三氧化铬的溶液中。此溶液逐滴添加到在步骤6.1制得，同时保持17至20℃（ 例如间的混合物的温度，在该溶液水浴）;此滴加过程花费2个小时。一旦该过程完成后，使该溶液搅拌约30分钟。
3. 加入50毫升的2-丙醇。在室温下搅拌该溶液过夜。
4. 集中使用在137毫巴和40℃的旋转蒸发器在减压下暗紫色溶液。加入300毫升的蒸馏水中以沉淀;沉淀物应该是浅紫色。
5. 滤液用415级纸过滤粗产物。用〜250mL的蒸馏水或直到固体变为白色洗涤固体材料。
6. 溶解在15毫升苯中的固体材料在40℃，并让它再结晶在25℃下。
7. 添加8.34克溶于干燥的二氯甲烷，并包括6.0克3-氯过苯甲酸在75毫升二氯甲烷中的至烧瓶中的溶液干燥二酮。
8. 回流，在40℃的溶液中24个小时。
9. 将反应混合物冷却至-20℃10分钟以沉淀米 氯苯甲酸副产物。
10. 通过过滤（使用纸过滤器）除去米氯苯甲酸和在减压下浓缩该溶液。
11. 用200ml 2-庚酮洗粘胶粗产物，并在50℃下在真空下干燥沉淀物过夜。
12. 使用以下¹ H NMR和FT-IR峰监测合成。 ¹ H-NMR（400MHZ，CDCL _3，δ[ppm的]）:4.42-4.37（DD，J = 14.2，7.4赫兹，2H，C H ₂ OC = O），4.21-4.15（T，2H，J = 11.3赫兹，C H ₂ OC = O），2.80-2.75（DDT，J = 14.3，6.5，1.6赫兹，2H，C H ₂ COO），2.63-2.57（TT，J = 13.3，2.1赫兹，2H，CH- ₂ COO），2.04-1.93（M，4H，-C H ₂ CH ₂ OC = O），1.70-1.56（M，4H，-C H ₂ C H ₂ COO），1.48-1.38（M，2H， - ] C H C（CH _3）2），和0.84（S，6H，C H ₃ C-）。

7.创建三维多孔弹性体脚手架使用任一种二异氰酸酯（HDI）或2,2-双（1-己内酯-4-基）丙烷^（BCP）27作为交联剂（根据Gao 等人^27）

1. 准备使用0.75克SBC-αCLC的通过加入0.25毫升HDI的（或0.45毫升BCP的）0.24毫升蒸馏水ε己内酯单体的三臂弹性体混合物中。添加锡（10月_）2的60微升。如果使用BCP代替HDI，使用涡旋混合SBC-αCLC和BCP并将它们放置在烘箱中在140℃，直到完全BCP熔化并溶解（此步骤可能需要长达2小时）。一旦BCP已经溶解，把它从烤箱中，并且在锡（10月_）2，并涡旋。
2. 通过切割1×4cm的金属片制备一个"牺牲"镍泡沫模板。从短端部中的一个辊它使得最终辊近似为1×1cm的金属片（参见图4）。
3. 把镍泡沫在玻璃小瓶或铝箔包和倒在步骤7.1制得完全覆盖泡沫2分钟该混合物。用巴斯德吸移管除去过量的混合物。在80℃下留在烘箱中过夜。
4. 剥离铝箔或打碎玻璃。使用刀片，剃弹性体周围的金属泡沫，以暴露金属镍。
5. 制备1M的铁（III）氯化物（的FeCl _3）在100毫升水中的溶液。放置泡沫在烧瓶中，并添加70毫升的FeCl ₃溶液。搅拌三天在室温下，每天更换的FeCl ₃溶液。每次更改之前，轰动离子水，泡沫0.5小时。
   注:蚀刻工艺三天后内完成。为了确保蚀刻工艺完成后，进行触觉压缩试验，直到泡沫手感柔软。到触觉压缩试验泡沫电阻表示残留金属模板的存在。
6. 冲洗ELAST奥马尔泡沫在真空乙醇和地点烘箱中过夜，在40℃。
7. 表征使用扫描电子显微镜（SEM），示差扫描量热法（DSC），机械压缩试验，和热重分析^（TGA）27的材料。
   注意:为了制备更亲水的3D LCE，与LBC（确保该LBC还包含一个LC结构部分）之后，在步骤7.5中描述的步骤进行更换SBC。

8.播种弹性体支架的与SH-SY5Y成神经细胞瘤细胞和培养利用无菌操作技术

1. 通过用1mL 70％乙醇洗涤的两次消毒弹性体。 10分钟进行紫外线照射，并用1毫升70％乙醇洗涤。用1mL无菌水和1mL的磷酸缓冲盐水（PBS）冲洗两次。置于24孔培养板中的弹性体。
2. 制备细胞生长培养基为含有90％的Dulbecco改良Eagle培养基（DMEM）supplem SH-SY5Yented有10％胎牛血清（FBS）和1％青霉素 - 链霉素（青霉素 - 链霉素）。
3. 计数使用血细胞计数细胞后，制备悬浮在100微升生长培养基的（种子溶液）1.5×10 ⁵ SH-SY5Y细胞。添加在弹性体顶部的解决方案，确保形成液滴。
4. 孵育在37℃和5％CO ₂接种的弹性体2小时以促进细胞粘附。添加0.5毫升生长培养基。在37℃用5％CO ₂孵育再次。
5. 改变介质隔日用1毫升的PBS洗涤后。

9.构建体，弹性体的显微成像

1. 固定上生长，用4％多聚甲醛（PFA）的PBS 15分钟的弹性体的细胞。用3mL的PBS清洗三次漂洗，每次5分钟，并放置弹性体与具有附接的盖玻片培养皿固定的细胞。
   注意:PFA是有毒的。穿戴合适的个人防护服（PPE）。
2. 站用4' ，在500微升PBS中的10分钟，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）的0.1％的固定样品中和冲洗用1毫升的PBS两次5分钟。
3. 立即图像使用共焦显微镜用DAPI荧光，获取跨越样本图像栈的弹性体。
   注:在这里，用20倍的目标和60X的目标是获得的图像栈。
4. 分析使用ImageJ ³²光学共焦图像栈。

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结果

此报告显示多孔3D LCE作为使用镍金属模板细胞培养的支架的制备方法。将所得到的三维LCE演示了一个复杂的相互关联的信道的网络，其允许容易细胞浸润，以及更合适的质量传输^27。研究发现，细胞能够充分渗透相互连接的渠道网络，并且也能够在LCE内对齐。在此，金属镍泡沫（99％的Ni，860密度g / cm ^2）被选择以下的类似方法以前由Kung 等?...

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讨论

液晶弹性体，最近被研究作为生物相容性细胞支架由于其刺激的反应。他们已经被证明是作为细胞支架的理想平台。然而，准备和设计新的LCE支架时要记住的一个重要因素是孔隙度。可浸出的固体²³或气体的引入并不总是导致均匀的孔隙率或完全互连的孔隙。使用可刻蚀出的金属模板，不仅提供了机会，有一个更加有组织和定期的内部结构，但也允许孔径大小和密度的选择。这?...

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材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
1H, 1H, 2H, 2H-perfluorooctyltriethoxysilane	Alfa Aesar	L16606	Silanizing agent
2-bis(4-hydroxy-cyclohexyl)propane	TCI	B0928	Reagent
2-chlorohexanone	Alfa Aesar	A18613	Reagent
2-heptanone	Sigma Aldrich	W254401	Solvent
2-propanol	Sigma Aldrich	278475	Solvent
3-chloroperbenzoic acid, m-CPBA	Sigma Aldrich	273031	Reagent
4-dimethylaminopyridine	Alfa Aesar	A13016	Reagent
4',6-diamidino-2-phenylindole, DAPI	Invitrogen	D1306	Nuclear Stain
5-hexynoic acid	Alfa Aesar	B25132-06	Reagent
Acetic acid	VWR	36289	Solvent
Acetone	Sigma Aldrich	34850	Solvent
Alcohol 200 proof ACS Grade	VWR	71001-866	Reagent
Benzene	Alfa Aesar	AA33290	Solvent
ε-caprolactone	Alfa Aesar	A10299-0E	Reagent
Chloroform	VWR	BDH1109	Solvent
Cholesterol	Sigma Aldrich	C8503	Reagent
Chromium(VI) oxide	Sigma Aldrich	232653	Reagent
Copper(I) iodide	Strem Chemicals	100211-060	Reagent
D,L-Lactide	Alfa Aesar	L09026	Reagent
Dichloromethane	Sigma Aldrich	320269	Solvent
Diethyl ether	Emd Millipore	EX0190	Solvent
N,N-Dimethylformamide	Sigma Aldrich	270547	Solvent
Dulbecco’s modified Eagle medium, DEME	CORNING Cellgo	10-013	Cell Media
Ethanol	Alfa Aesar	33361	Solvent
Formaldehyde	SIGMA Life Science	F8775	Fixative
Fetal bovine serum, FBS	HyClone	SH30071.01	Media Component
Filter paper, Grade 415, qualitative, crepe	VWR	28320	Filtration
Glycerol	Sigma Aldrich	G5516	Central node (3-arm)
Hexamethylene diisocyanate, HDI	Sigma Aldrich	52649	Crosslinker
Iron(III) chloride	Alfa Aesar	12357	Etching agent
Isopropyl alcohol	VWR	BDH1133	Solvent
Methanol	Alfa Aesar	L13255	Solvent
N,N'-dicyclohexylcarbodiimide	Aldrich	D80002	Solvent
N,N-Dimethylformamide	Sigma Aldrich	270547	Solvent
Nickel metal template	American Elements	Ni-860	Foam template
Neuroblastomas cells (SH-SY5Y)	ATCC	CRL-2266	Cell line
Penicillin streptomycin	Thermo SCIENTIFIC	15140122	Antibiotics
Polyethylene glycol 2000, PEG	Alfa Aesar	B22181	Reagent
Sodium azide	VWR	97064-646	Reagent
Sodium bicarbonate	AMRESCO	865	Drying salt
Sodium chloride	BDH	BDH9286	Drying salt
Sodium phosphate dibasic heptahydrate	Fisher Scientific	S-374	Drying salt
Sodium phosphate monobasic monohydrate	Sigma Aldrich	S9638	Drying salt
Sodium sulfate	Sigma Aldrich	239313	Drying salt
Tetrahydrofuran	Alfa Aesar	41819	Solvent
Thiosulfate de sodium	AMRESCO	393	Drying salt
Tin(II) 2-ethylhexanoate	Aldrich	S3252	Reagent
Toluene	Alfa Aesar	22903	Solvent
Triethylamine	Sigma Aldrich	471283	Reagent
Trypsin	HyClone	SH30042.01	Cell Detachment
Olympus FV1000