快速模型，以评估C57BL6/j小鼠美联储高脂肪饮食中芳烃（Clove）和孜然细胞（Cumin）组合的抗肥胖潜力

摘要

这项工作提出了一个协议，探索两种植物一起使用的抗肥胖效果，为期5周。肥胖小鼠的提取物和高脂肪饮食（HFD）有一个组合管理。这种方法可以促进植物在治疗肥胖症方面的好处。

摘要

一些研究表明，植物的植物化学成分是潜在的抗肥胖剂。在这项研究中，我们考察了使用来自芳 香酸锡锡的 干按钮和来自 孜然细胞 （CC）的种子对C57BL6/J小鼠通过高脂肪饮食（HFD）诱导肥胖的影响。这项研究的目的是证明，在经过几个星期的实验后，研究中提出的方法显著降低了肥胖症。两种植物的提取物都是用超声波提取的，以增强植物化学物质的提取。乙醇获得最佳提取条件如下:50:50 v/v水，超声波功率为300 W，超声波时间为30分钟。在 HFD 中同时施用 CC 提取物 5 周，可调节脂质轮廓（胆固醇和甘油三酯）、减少食物摄入量、体重增加、脂肪组织和肝脏重量。这个肥胖模型获得的结果表明CC提取物可以预防肥胖。与传统的16周方法（8周发胖，8周减肥）相比，本研究肥胖模型在实验时间较短时也得出了类似的结果。

引言

身体脂肪积累过多是肥胖的一个特征。能量摄入和消耗之间的不平衡导致脂肪细胞中储存多余的能量，这与2型糖尿病、高血压、高胆碱血症和心血管疾病^1、2中高血糖和胰岛素抵抗的代谢危险因素有关。

天然产品与最小的副作用和低成本已得到越来越多的关注，因为以前的研究已经报告生物活性植物化学物质和潜在的抗肥胖剂的机制，逆转或延迟代谢综合征和相关病理^8。

已研究了几种药用植物，以防止肥胖和相关疾病。其中，芳香素在3T3-L1细胞体外治疗和高脂肪饮食¹¹喂养的小鼠体外治疗中具有抗肥胖潜力， 已被调查。此外，在¹²日对极度肥胖受试者的Cminum cyminum多中心公开试验中观察到显著的抗超重效果。在这项研究中，C57BL6/J小鼠被用来研究实验快速模型，使用两种可食用植物的组合来评估潜在的抗肥胖剂。

研究方案

所有动物实验均得到国家动物实验委员会（IPN） 的批准:第2732号议定书）。

1. 准备丁香和孜然结合的提取物

注:可食用的植物，芳 香素 （丁香）和 孜然（ 孜然）从墨西哥阿巴斯托CDMX中心购买。

1. 从植物中研磨500克种子，进行超声波辅助提取。用乙醇（60:40 v/v）用乙醇（320瓦;24 kHz频率，30分钟）将它们（320瓦;24千赫频率^，30分钟）与温度范围30±4°C.13
2. 使用 Whatman 2 号滤纸在真空下过滤固体，并用旋转蒸发器浓缩提取物。
3. 测量两种植物 （CC） 提取物的紫外线-

2. 动物

1. 使用男性C57BL6/J小鼠六周大（共48，体重24-29克）的研究。
2. 在标准实验室条件下，将动物分成八组:温度（20-22±1 °C）、相对湿度（45-54±2%）、照明（08:00-20:00 h）与食物和水。在实验前一周，在这些条件下对小鼠进行适应。

3. 实验程序

1. 准备高脂肪饮食¹⁴如表1。
2. 在测试开始时，将每个形成的组（n = 8）受试到不同的治疗方法:在正常饮食中喂养第 1 组:第2组，高脂肪饮食:组 3，高脂肪饮食 + 100 毫克/千克CC提取物;组 4，高脂肪饮食 + 250 毫克/千克CC提取物;第5组，高脂肪饮食 +450毫克/千克CC提取物;组6，高脂肪饮食+苯丙酸酯（一种抗肥胖药物用作阳性控制^）15。
3. 给所有组小鼠喂食5周，并记录每天消耗的食物量。
   1. 在带塞子的试管中，将提取物或药物与与治疗所受治疗的组对应的水剂量同质化。这是用涡旋摇床完成的。
   2. 一旦同质化，将所有相应的治疗方法添加到每组饮酒者中。

4. 样本收集

1. 每周测量一次食物摄入量和体重。将老鼠禁食5周。
2. 通过颈椎脱位和坏死来牺牲他们。
3. 老鼠被牺牲后，将它们固定在一个苏平的位置。
4. 使用干净的手术钳和剪刀，定位和提升生殖器附近的中心皮肤，并做一个小的0.2毫米切口。
5. 将扁平剪刀水平插入切口，小心地将腹部皮肤与腹壁分开。
6. 用钳子，抬起中心皮肤，用手术剪刀切开肋骨笼的水平。然后切开后肢上方的皮肤，以方便脂肪组织的收集。
7. 通过用剪刀和钳子钝解剖，确保从体内收集所有脂肪组织。收集后，将脂肪组织放在铝箔中。记得收集生殖器官周围的脂肪。避免头发和皮肤的积累，以不改变结果。
8. 要进入内脏脂肪组织，用手术剪刀从生殖器切入肋骨笼，从生殖器切开腹部肌肉，朝老鼠背部切开。
9. 做肝切除术，切除100%的肝脏。要将肝脏外化，去除不必要的器官，并切断肝静脉和动脉，将肝脏与身体的其他部位分离。作为最后一步，精确提取胆囊从肝脏^16。
10. 使用商业检测试剂盒测量高胆固醇血症（胆固醇）和高血糖（甘油三酯）。

5. 统计分析

注:所有实验结果都应代表三个独立检测结果，表示为平均±标准偏差。

1. 使用单向 ANOVA 分析方差计算标准误差，然后进行 Tukey 的范围测试。将 P < 0.05 视为具有统计学意义。

结果

超声波辅助提取
提取的最佳提取条件是乙醇:水（50:50，v/v），超声波功率为300 W，超声波时间为30分钟。这样，提取速度比传统提取方法（表2）快。提取物显示紫外可见光谱（图1）在320纳米处有强烈的吸收峰值。

食物摄入量和体重
在 图2A中显示小鼠体重的变化，这些小鼠的提取物浓度不同（100、200?...

讨论

在这项研究中，我们首次评估了用高脂肪饮食喂养5周的小鼠中丁香和孜然（CC）提取物组合的口服对脂质轮廓和肥胖症的影响。结果显示，HFD组的体重比ND组显著增加，这表明肥胖模式的肥胖感应是成功的。施用的CC剂量（100、200和450毫克/公斤/天）可减少食物摄入量和体重。因此，食物摄入量的减少必须是由于动物食欲下降。

减少血脂异常对预防肥胖相关疾病非常重要。在?...

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Distilled Water	Any vendor	n/a	Available for other vendors as well
Ethanol	Fermont	6063	99.8% purity
Diet Ingredients
Casein	Any vendor	n/a
Cellulose	Any vendor	n/a
Centrum balance multivitamin	Pfizer	n/a
Choline Bitartrate	Any vendor	n/a
L- cystein	Sigma Aldrich	168149	Available for other vendors as well
Lard	Any vendor	n/a
Maltodextrin 10	Any vendor	n/a
Pellets Nutricubos	Purina	n/a	Available for other vendors as well
Soybean Oil	Any vendor	n/a
Sucrose	Any vendor	n/a
Extraction Equipment
Rotavapor	Buchi	R-300
Shimadzu UV-1800 UV/Visible Scanning Spectrophotometer	Cole Parmer	T-83400-20	Available for other vendors as well
Ultrasonic Unit	Elma	TI-H-20	Available for other vendors as well
Vacuum pump	Buchi	V-100