C57BL6/j Yüksek Yağlı Diyetle Beslenen Farelerde Syzygium aromatikum (Karanfil) ve Kimyon cyminum (Kimyon) Kombinasyonunun Anti-Obezite Potansiyelini Değerlendirmek için Hızlı Model

Özet

Bu çalışma, birlikte kullanılan iki bitkinin 5 haftalık bir süre boyunca obezite karşıtı etkisini araştırmak için bir protokol sunun. Obez farelerde özüt ve yüksek yağlı diyet (HFD) kombine bir uygulama vardı. Yöntem, obezite tedavisinde bitkilerin faydalarını teşvik edebilir.

Özet

Çeşitli çalışmalar, bitkilerin fitokimyasal içeriğinin potansiyel obezite karşıtı ajanlar olduğunu göstermiştir. Bu çalışmada, Syzygium aromaticum'dan kuru düğmelerin ve Kimyon cyminum 'dan (CC) tohumların yüksek yağlı diyet (HFD) yoluyla obezite ile indüklenen C57BL6 /J fareler üzerindeki etkisini inceliyoruz. Bu çalışmanın amacı, çalışmada önerilen yöntemin birkaç haftalık deneyden sonra obeziteyi önemli ölçüde azalttığını göstermektir. Her iki bitkiden elde edilen ekstrakt, fitokimyasalların ekstraksiyonunu arttırmak için ultrason kullanılarak çıkarıldı. Etanol ile optimum ekstraksiyon koşulları aşağıdaki gibi elde edildi: 300 W ultrason gücüne sahip 50:50 v / v su ve 30 dakikalık ultrasonikasyon süresi. CC ekstresinin 5 hafta boyunca HFD'de eşzamanlı olarak verilmesi, lipit profillerinin (kolesterol ve trigliseritler) düzenlenmesine, gıda alımının azaltılmasına, kilo alımına, yağ dokusuna ve karaciğer ağırlığına yol açmıştır. Bu obez model tarafından elde edilen bulgular, CC ekstresinin obeziteyi önleyebileceğini göstermektedir. Geleneksel 16 haftalık yöntemle karşılaştırıldığında (yağ almak için 8 hafta ve kilo vermek için 8 hafta), mevcut çalışmada obez modelde daha az deneme süresinde benzer sonuçlar elde edildi.

Giriş

Aşırı vücut yağ birikimi obezitenin bir özelliğidir. Enerji alımı ve tüketimi arasındaki denge, aşırı enerjinin adipozitlerde depolanmasının, tip 2 diyabet, hipertansiyon, hiperkolesterolemi ve kardiyovasküler hastalıkta hiperglisemi ve insülin direnci için metabolik risk faktörleri ile ilgili^olmasınayol açar¹,².

Önceki çalışmalarda metabolik sendromu ve ilişkili patolojileri tersine çeviren veya geciktiren mekanizmalara sahip biyoaktif fitokimyasallar ve potansiyel obezite karşıtı ajanlar bildirildiği için minimum yan etkileri ve düşük maliyeti olan doğal ürünler daha fazla ilgi gördü⁸.

Obezite ve buna bağlı hastalıkları önlemek için çeşitli şifalı bitkiler çalışılmıştır. Bunlar arasında, Syzygium aromatikum 3T3-L1 hücrelerinde in vitro tedavide ve yüksek yağlı diyetle beslenen farelerde in vivo tedavide obezite karşıtı potansiyeli araştırılmıştır¹¹. Ek olarak, son derece obez denekler üzerinde kimyon cyminum'un çok merkezli açık denemesinde önemli anti-aşırı kilo etkileri gözlenmiştir¹². Bu çalışmada, C57BL6/J fareler, her iki yenilebilir bitkinin bir kombinasyonunu kullanarak potansiyel bir anti-obezite ajanını değerlendirmek için deneysel hızlı modeli araştırmak için kullanılmıştır.

Protokol

Tüm hayvan deneyleri Escuela Nacional de Ciencias Biologicas Hayvan Deney Komitesi (IPN; Protokol No. 2732).

1. Karanfil ve kimyon kombinasyonunun ekstraktının hazırlanması

NOT: Yenilebilir bitkiler, Syzygium aromaticum (karanfil) ve Kimyon cyminum (kimyon) Central de Abastos CDMX, Meksika'dan satın alındı.

1. Bitkilerden 500 g tohum öğütün ve ultrasonik destekli ekstraksiyon gerçekleştirin. Onları (320 Watt; 24 kHz frekans, 30 dk) etanol ile sonicate edin:su (60:40 v/v) 30 ± 4 °C sıcaklık aralığında¹³
2. Vakum altında 2 numaralı Whatman filtre kağıdını kullanarak katıları filtreleyin ve özü bir döner evaporatörle konsantre edin.
3. Her iki bitkinin (CC) ekstraktının UV-vis spektrumunun ölçüldü.

2. Hayvanlar

1. Çalışma için altı haftalık erkek C57BL6/J fareleri kullanın (toplamda 48, vücut ağırlığı 24-29 g).
2. Hayvanları standart laboratuvar koşullarında sekiz kişilik gruplar halinde barındırın: sıcaklık (20-22 ± 1 °C), bağıl nem (%45-54 ± 2), aydınlatma (08:00-20:00 saat) yiyecek ve su reklam libitum ile. Deneyden önce bir hafta boyunca fareleri bu koşullarda alıştırın.

3. Deneysel Prosedür

1. Tablo^1'de olduğu gibi yüksek yağlı diyet 14 hazırlayın.
2. Testin başında, oluşturulan grupların her birini (n = 8) farklı tedavilere tabi tutun: Grup 1'i normal bir diyetle besleyin; Grup 2, yüksek yağlı diyette; Grup 3, yüksek yağlı diyet + 100 mg / kg CC özü; Grup 4, yüksek yağlı diyet + 250 mg / kg CC özü; Grup 5, yüksek yağlı diyet + 450 mg / kg CC özü; Grup 6, yüksek yağlı diyet + phentermine (pozitif kontrol olarak kullanılan bir antiobesity ilaç)¹⁵.
3. Tüm fare gruplarını 5 hafta boyunca besleyin ve günlük tüketilen yiyecek miktarını kaydedin.
   1. Durduruculu bir test tüpünde, özü veya ilacı tedavinin uygulandığı gruba karşılık gelen su dozu ile homojenize edin. Bu girdap çalkalayıcı ile yapılır.
   2. Homojenize olduktan sonra, ilgili tüm tedaviyi her grubun içicisine ekleyin.

4. Örnek toplama

1. Haftada bir kez hem gıda alımını hem de vücut ağırlığını ölçün. Fareleri 5 haftalık bir süre boyunca gece boyunca oruç tut.
2. Servikal çıkık ve nekropsi ile kurban edin.
3. Fareler kurban edildikten sonra, onları hareketsiz bir pozisyonda hareketsiz hale getirin.
4. Temiz cerrahi tokmakla ve makas kullanarak, merkezi cildi cinsel organların yakınında bulun ve kaldırın ve 0,2 mm'lik küçük bir kesi yapın.
5. Düz makası yatay olarak kesiye yerleştirin ve karın derisini karın duvarından dikkatlice ayırın.
6. Dikinçlerle, merkezi cildi kaldırın ve cerrahi makasla göğüs kafesi seviyesinde kesin. Daha sonra yağ dokusunun toplanmasını kolaylaştırmak için cildi arka bacakların her ikisinin üzerinde kesin.
7. Makas ve toparlaplarla künt diseksiyon ile vücuttaki tüm yağ dokusunun toplanmasını sağlayın. Toplandıktan sonra, yağ dokusunu alüminyum folyoya yerleştirin. Üreme organlarının etrafındaki yağı toplamayı unutmayın. Sonuçları değiştirmemek için saç ve cilt birikiminden kaçının.
8. Viseral yağ dokusuna erişmek için, cinsel organlardan göğüs kafesine kadar cerrahi makasla karın kasını kesin, karın kaslarında cinsel organlardan farenin sırtına doğru bir kesi yaptı.
9. Karaciğerin% 100'ünü çıkarmak için hepatektomi gerçekleştirin. Karaciğeri dışsallaştırmak için gereksiz organları çıkarın ve karaciğeri vücudun geri kalanından ayırmak için hepatik damarları ve arterleri kesin. Son adım olarak, safra kesesini karaciğerden kesin olarak çıkarın¹⁶.
10. Hiperkolesterolemi (kolesterol) ve hipertrigliseridemia (trigliseritler) ölçün, üreticinin endikasyonlarına göre ticari test kitleri kullanarak.

5. İstatistiksel analiz

NOT: Tüm deneysel sonuçlar, standart sapmanın ortalama ± olarak ifade edilen üç bağımsız testten temsil edilmelidir.

1. Standart hatayı, tukey'in aralık testinin ardından tek yönlü anova varyans analizi ile hesaplayın. P< 0.05 istatistiksel olarak anlamlı olarak düşünün.

Sonuçlar

Ultrasonik destekli ekstraksiyon
Ekstraksiyon için optimum ekstraksiyon koşulu etanol oldu:su (50:50, v / v) 300 W ultrason gücü ve 30 dakikalık ultrasonikasyon süresi ile. Bu şekilde, ekstraksiyon geleneksel ekstraksiyon yöntemlerinden daha hızlıydı (Tablo 2). Ekstrakt, UV görünür spektrumda 320 nm'de yoğun bir emilim zirvesi gösterdi (Şekil 1).

Gıda alımı ve vücut ağırlığı
Özün farklı konsantr...

Tartışmalar

Bu çalışmada, ilk kez, karanfil ve kimyon (CC) ekstraktının oral olarak değerlendirilmesinin lipit profilleri üzerindeki etkisini ve 5 hafta boyunca yüksek yağlı bir diyetle beslenen farelerde obeziteyi değerlendirdik. Bulgular, HFD gruplarının ND grubuna kıyasla önemli ölçüde daha yüksek vücut ağırlığı alımı gösterdiğini ve bu durumun obez modelde obezite indüksiyonunun başarılı olduğunu gösterdiğini göstermiştir. Uygulanan CC dozu (100, 200 ve 450 mg/kg/gün) gıda alımında ve v?...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Distilled Water	Any vendor	n/a	Available for other vendors as well
Ethanol	Fermont	6063	99.8% purity
Diet Ingredients
Casein	Any vendor	n/a
Cellulose	Any vendor	n/a
Centrum balance multivitamin	Pfizer	n/a
Choline Bitartrate	Any vendor	n/a
L- cystein	Sigma Aldrich	168149	Available for other vendors as well
Lard	Any vendor	n/a
Maltodextrin 10	Any vendor	n/a
Pellets Nutricubos	Purina	n/a	Available for other vendors as well
Soybean Oil	Any vendor	n/a
Sucrose	Any vendor	n/a
Extraction Equipment
Rotavapor	Buchi	R-300
Shimadzu UV-1800 UV/Visible Scanning Spectrophotometer	Cole Parmer	T-83400-20	Available for other vendors as well
Ultrasonic Unit	Elma	TI-H-20	Available for other vendors as well
Vacuum pump	Buchi	V-100