出生后右心室容积超负荷小鼠模型的建立与确认

摘要

该方案介绍了腹动静脉瘘（AVF）小鼠出生后右心室容积超负荷（VO）模型的建立和确认，该模型可用于研究VO如何促进出生后心脏发育。

摘要

右心室 （RV） 容量超负荷 （VO） 在先天性心脏病患儿中很常见。鉴于不同的发育阶段，与成人相比，儿童心室心肌对VO的反应可能不同。本研究旨在使用改良的腹动静脉瘘在小鼠中建立出生后 RV VO 模型。为了确认 VO 的产生以及 RV 的以下形态学和血流动力学变化，进行了为期 3 个月的腹部超声、超声心动图和组织化学染色。结果，在出生后小鼠中进行的手术显示出可接受的存活率和瘘管成功率。在VO小鼠中，RV腔增大，游离壁增厚，术后2个月内每搏输出量增加约30%-40%。此后右心室收缩压升高，观察到相应的肺动脉瓣反流，并出现小肺动脉重塑。综上所述，改良动静脉瘘（AVF）手术在出生后小鼠中建立RV VO模型是可行的。考虑到瘘管闭合和肺动脉阻力升高的概率，在应用前必须进行腹部超声和超声心动图以确认模型状态。

引言

右心室 （RV） 容量超负荷 （VO） 在先天性心脏病 （CHD） 患儿中很常见，可导致病理性心肌重塑和长期预后不良 ^1,2,3。深入了解左心室重塑和相关的早期靶向干预对于冠心病患儿的良好预后至关重要。成人和儿童心脏的分子结构、生理功能和对刺激的反应存在一些差异1,4,5,6。例如，在压力超负荷的影响下，心肌细胞增殖是新生儿心脏的主要反应，而纤维化发生在成人心脏中^5,6。此外，许多治疗成人心力衰竭的有效药物对儿童心力衰竭没有治疗作用，甚至可能造成进一步的损害^7,8。因此，从成年动物中得出的结论不能直接应用于幼年动物。

几十年来，动静脉瘘 （AVF） 模型已被用于在不同物种的成年动物中诱导慢性心脏 VO 和相....

研究方案

本文介绍的所有程序均符合《赫尔辛基宣言》中概述的原则，并得到了上海儿童医学中心动物福利与人类研究委员会（SCMC-LAWEC-2023-003）的批准。本研究使用C57BL / 6小鼠幼崽（P7，雄性，3-4g）。这些动物是从商业来源获得的（见 材料表）。将小鼠幼崽及其哺乳母亲（幼崽：单个笼子中的母亲= 6：1）保持在无特定病原体的实验室条件下，在22±2°C下进行12小时光暗循环，自由获得水和营养饮食。幼崽被随机分为两组：VO组和假手术组。

1.设备和手术工具准备

注意： 所有材料/设备的商业细节都列在 材料表中。

1. 确保以下类型的设备准备就绪并正常运行：手术台（泡沫塑料面板）、吸入麻醉机、带垂直照明和内置摄像头的显微镜、带有 24 MHz 换能器的超声设备和恒温加热平台。
2. 对手术器械（即微针架、细尖镊子和圆柄 Vannas 弹簧剪刀）进行消毒。
3. 组装以下耗材：带线的 11-0 和 9-0 手术缝合针（锥点）、胶带条、5 mL 注射器针头、2-0 丝（手术固定）、无菌棉签和超声凝胶。
4. 确保存在以下试剂：甜菜碱、70% 乙醇、生理盐水、异氟醚、对乙酰氨基酚、眼膏和脱毛膏。

讨论

以前，经典的 RV VO 模型是使用瓣膜反流²¹ 创建的;然而，与AVF相比，心内直视瓣膜手术可能需要更复杂的技术，并且可能与显着更高的死亡率有关，特别是在出生后小鼠中。由于动物研究表明，AVF²² 已达到与 VO 相同的效果，因此本研究使用了创伤较小的改良腹瘘手术。

在成功建立瘘管的过程中考虑了某些因素。首先，该程序是在未进行气?.......

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
70% Ethanol	Tiandz,Chia
ACETAMINOPHEN Oral Solution	VistaPharm, Inc. Largo, FL 33771, USA	NDC 66689-054-01
Anesthesia machine	RWD Life Science,China	R550IP
Anesthesia mask	RWD Life Science,China	68680
C57BL/6 mice	Xipu’er-bikai Experimental Animal Co., Ltd (Shanghai, China)
Hair removal cream	Veet, France	VT-200
Hematoxylin and eosin Kit	Beyotime biotech	C0105M
Isoflurane	RWD Life Science,China	R510-22-10
Microscope	Yuyan Instruments, China	SM-301
Surgical suture needles	NINGBO MEDICAL NEEDLE CO.,LTD, China
Thermostatic heating platform	Qingdao Juchuang Environmental Protection Group Co., Ltd, China
Ultrasound device	FUJIFILM VisualSonics, Inc.	Vevo 2100	Image modes includes B-Mode, Color Doppler Mode and Pulsed Wave Doppler Mode
Ultrasound gel	Parker Laboratories,United States	REF 01-08
Ultrasound transducer	FUJIFILM VisualSonics, Inc.	MS 400