以下过程提供了从小动物体内和体外收集 NIRF 图像所需的详细步骤：

1.实验设置

1. 使用光纤导光导轨将光纤光源连接到荧光成像系统。
2. 为实验选择适当的激励过滤器。激励滤波器确定要传送到样品的光的波长，并应选择与样品中引入的荧光激发光谱相匹配。
3. 选择适当的排放过滤器。发射滤波器阻挡不需要的光谱成分，这些成分可归因于自荧光，应选择与荧光的发射光谱相匹配。

2. 样品制备

1. 在维沃
   1. 在感应室中使用异二苯在流量计表盘上浓度为3-4%的异二苯酶对动物进行麻醉。
   2. 将动物转移到固定在成像阶段的鼻锥体上，并将异二苯的浓度保持在1-2%。热源是没有必要的，因为动物通常只被成像很短的时间（> 5分钟），并且他们的体温不会显著下降。
   3. 固定动物的爪子，以尽量减少运动伪影。应用脱毛霜，从感兴趣的区域去除头发。
   4. 将脱脂霜涂抹到所需的最小区域。30 s 后，用纱布垫擦拭。第二次用乙醇润湿纱布垫擦拭区域，以完全去除脱毛霜。
   5. 在眼睛上涂上眼膏，防止角膜干燥。
   6. 将可激活的荧光分子探针注射到动物中。对于这一特定应用，MMP2可激活探针静脉注射到尾静脉。此时，可以对鼠标进行成像。继续执行此协议的"图像获取"。在整个简短过程中，监测动物有规律的呼吸。
2. 埃克维沃
   1. 注射荧光探针后，根据2013年AVMA动物安乐死指南，以人道的方式对动物实施安乐死。二氧化碳 （_CO2） 过量是小动物安乐死的标准做法.
   2. 手术提取感兴趣的组织或器官，并小心地用钳子去除多余的脂肪组织。
   3. 用磷酸盐缓冲盐水冲洗组织，去除残留血液，并将样品直接放在成像阶段。

3. 图像采集

1. 打开分子成像软件，同时打开光纤光源和荧光成像系统。
2. 打开采集窗口并指定适合研究的曝光类型。可用曝光包括：用于捕获单个图像的标准曝光、在固定时间间隔内捕获一系列图像的时移曝光，以及用于在不同曝光时间捕获连续曝光序列的"渐进式曝光"。
3. 选择UV-透射作为照明源。
4. 使用预览图像作为参考，调整镜头、视野和捕捉系统室中的光圈/光圈的焦点，以优化采样图像质量。调整样品的曝光时间和位置。
5. 关闭预览窗口，并确保采集窗口上的所有参数与相机和滤镜设置匹配。
6. 单击"公开"以获取并保存图像。
7. 标准分子成像软件通常提供各种分析、测量和图像校正工具，用于量化荧光信号，用于图像分析。
8. 在成像会话结束时，取出样品/动物，关闭系统，并清洁成像阶段，以尽量减少对系统的损坏。