在伊利诺伊大学芝加哥分校以及胰岛细​​胞资源中心美国国立卫生研究院授予（05-003 RFA - RR），克里斯托弗基金会，该Efroymson基金会，和泰乐基金会的资金支持。

1。设备安装<ol><li>人胰岛分离是一个时间敏感的程序，涉及团队精神，因此，四个人都需要进行此步骤。该小组是导致受术者，剖析和cannulates胰腺。 </li><li>胰岛隔离分钟开始，球队进入UIC的胰岛隔离设施。小组成员，确保一切必要的检测仪器，如离心机，检查并打开。他们还确保消毒所有的油烟机和表面。 </li><li>两个人将成立插管表，雪泥机，消化电路，灌注单元，COBE净化机，手术表。 </li><li>同时，两个团队的其他成员将作好准备，在隔离期间所需的媒体。 </li><li>接下来，细菌学管（瓶，管，形式和袋），采样管（洗预填充），并评估管和板的准备。 </li><li>准备净化管设置如下：第一空管和150毫升的标记，管2-12充满M199媒体补充人血白蛋白（洗涤液）200毫升和230毫升标记，终于有50 ml锥形管充满了洗涤液50毫升。一旦这些准备步骤完成后，我们就可以开始准备和灌流胰腺。 </li></ol> 2。胰腺的准备和灌注<ol><li>要开始准备和胰腺灌注，操作员将删除从使用无菌包装的器官。胰腺外科医生将转移到去污表。 </li><li>医生会填写一个与原来的胰腺保存液和操作员，他们将使用它来填充编写的“采购”细菌学瓶60毫升注射器。 </li><li>一次视力检查，以确定器官是否适合胰岛隔离（如果胰腺的损坏在采购或解剖结构异常，它可能不能使用胰岛隔离）后，医生会要求运营商准备胶原酶。请记住，再悬浮的时间，不同的酶的品牌和地段之间的不同。 </li><li>当医生准备好了，带来的净化解决方案（优碘，Fungizone /头孢唑啉和HBSS）的去污表，倒入适当的容器内。外科医生进行一分钟的洗涤去污解决方案中的每个胰腺的胰腺去污。胰腺，然后放置在一个小无菌罐，它会权衡。胰腺后的重量是输入到批处理记录，是摆在插管泛一些保存液。 </li><li>医生会揭露和部分切割主要的胆管和cannulate胰腺与套管各占一半。将套管固定缝合。灌注胰腺，首先将其移动到灌注单元和酶液倒入盆地。共有灌注时间约10分钟，5分钟在80毫米汞柱，然后在5分钟的180毫米汞柱。胰腺扩张后灌注。 </li><li>移动插管泛灌注胰腺，脂肪组织是从胰腺精心修剪。然后切成10-12块胰腺的消化和转移Ricordi商会。 </li></ol> 3。胰腺消化<ol><li>要开始消化步骤，胰腺转移到空Ricordi厅，添加2.5毫升Pulmozyme的小瓶，把屏幕上（避免大块组织块室），接近香港总商会，并填写系统。 </li><li>开始抽5分钟的解决方案。轻轻摇动室，均匀地分散温暖的解决方案，整个。五分钟后，轻轻摇动整个消化阶段会议厅。温度保持在37˚C。 </li><li>轻轻晃动室，直至温度达到37℃，然后摇动室。每两分钟取一次样和检测，如果发现免费胰岛范围。记录在批记录的消化表中的胰岛评价信息。继续监测胰岛的百分比，直到有解决方案中的其中50％的浮动自由和孤立。 </li></ol> 4。收集组织<ol><li>一旦发现50％的胰岛的样品中，消化停止在电路中加入冷的RPMI稀释液。组织收集了500毫升与30毫升的人血白蛋白预充的锥形管。一旦纺管，吸关闭上清，用冷水洗涤液洗沉淀。在1100 RPM（每分钟旋转）旋转锥管为1分钟，4˚C。 </li><li>消化胰腺组织成一个单一的500毫升锥形暂停的，把所有收集管。当管洗净组织，自旋和重复洗涤过程中，直到所有的组织已经多次洗涤。旋转管和组织转移到一个单一的250毫升的锥形管。把音量高达250毫升M199洗涤液补充与医管局及准备采样。 </li><li>用移液器取1毫升样品，并添加到15毫升锥形管与洗涤液9毫升预充。然后轻轻颠倒15毫升的锥形管，从这个混合出1毫升的样品直接计数盘成一个网格。计数细胞，并计算细胞数，使用稀释倍数2500（10x250）。 </li><li>旋转250毫升的锥形管，加入150毫升威斯康星大学（美国威斯康辛大学）解决方案，通常用于器官保存。当威斯康星添加，彻底混合细胞悬液，用吸管。记录和沟通，以净化运营商在威斯康星大学的开始时间。留在冰和漩涡偶尔管（S）。现在的胰岛细胞能进一步得到净化。 </li></ol>

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有多种因素影响隔离的结果9,10。其中，消化胰腺组织中起着突出的作用。基于我们自己的人胰岛隔离的经验，我们总结了以下关键点，这有可能影响胰岛的产量和质量。 <ol><li>时利用不同类型的酶，消化时间是不同的。 </li><li>只要完全从胰腺组织中分离胰岛的40-50％，消化应立即停止加入稀释液，冷却下来的组织。 </li><li>柔和的组织处理，收集，洗涤，和混合。 </li><li>收集组织和UW液的混合?...

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Ice Slush Machine</td>
<td>equipment</td>
<td>Taylor Company</td>
<td>K4036546</td>
<td>make sterile ice</td>
</tr>
<tr>
<td>Centrifuge</td>
<td>equipment</td>
<td>Beckman Coulter</td>
<td>424803</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MZ6 Inverted Microscopy TLBD4.1</td>
<td>equipment</td>
<td>Leica Diagnostic Instrument Co</td>
<td>4103</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cell Culture Dish with 2 mm Grid</td>
<td>equipment</td>
<td>Nunc Brand Products</td>
<td>174926</td>
<td>islet counting</td>
</tr>
<tr>
<td>Digital Water Bath EX7</td>
<td>equipment</td>
<td>NesLab</td>
<td>105361058</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Thermometer</td>
<td>equipment</td>
<td>IBI:IR</td>
<td>60444</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MonoBloc Balance AB 104-S</td>
<td>equipment</td>
<td>Metler Toledo</td>
<td>1119430864</td>
<td>measure pancreas weight</td>
</tr>
<tr>
<td>MasterFlex II Speed Controller</td>
<td>equipment</td>
<td>Cole Parmer Instrument Co</td>
<td>J00006445</td>
<td>adjust flow speed during degestion</td>
</tr>
<tr>
<td>Digital Sight DS L1</td>
<td>equipment</td>
<td>Nikon</td>
<td>217267</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Perfusion Unit</td>
<td>equipment</td>
<td>Custom Made/Swiss</td>
<td>n/a</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cooler for perfusion unit</td>
<td>equipment</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>3013P</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ricordi Chamber</td>
<td>equipment</td>
<td>University of Miami</td>
<td>n/a</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RPMI dilution solution</td>
<td>reagent</td>
<td>Mediatech Inc</td>
<td>99783024</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>University of Wisconcin (UW) solution</td>
<td>reagent</td>
<td>DURAMED</td>
<td>1000-46-06</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hank's Buffered Salt Solution (HBSS)</td>
<td>reagent</td>
<td>Mediatech Inc</td>
<td>99-597-CM</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>25% Human Albumin</td>
<td>reagent</td>
<td>GRIFOLS</td>
<td>NDC 61953-0002-2</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>M199 media (wash solution)</td>
<td>reagent</td>
<td>Mediatech Inc</td>
<td>99-784-CM</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Collagenase NB1 GMP grade</td>
<td>reagent</td>
<td>SERVA Electrophoresis</td>
<td>N0002937</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Neutral Protease NB1 GMP grade</td>
<td>reagent</td>
<td>SERVA Electrophoresis</td>
<td>N0002936</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Betadine</td>
<td>reagent</td>
<td>Cardinal Health</td>
<td>29906-004</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cefazolin</td>
<td>reagent</td>
<td>West-Ward Pharmaceutical</td>
<td>NDC 0143-9924-90</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dithizone</td>
<td>reagent</td>
<td>Sigma </td>
<td>D5130</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

human pancreatic islet isolation: part i: digestion and collection of pancreatic tissue

1型糖尿病的管理负担，既要对个人和社会，每年耗资超过100亿美元。尽管血糖监测和新的胰岛素制剂的广泛使用，许多人仍然发展毁灭性的继发性并发症。胰岛移植可以恢复接近正常的糖尿病患者血糖控制<sup&gt; 1</sup&gt;胰岛素强化治疗相关的严重的低血糖发作的危险，没有。胰岛移植成功的，重要的是提供足够的胰岛质量。但是，捐助者的特点，器官获取和保存的影响隔离的结果<sup&gt; 2</sup&gt;。我们在美国伊利诺伊大学芝加哥分校（UIC）的开发与改进的净化梯度，成功的隔离协议<sup&gt; 3</sup&gt;。该计划开始于2004年1月，2008年11月超过300隔离。 “胰腺被送往在冷保存液（UW液，威斯康星州或HTK的大学，组氨酸，色氨酸酮戊二酸）<sup&gt; 4-7</sup&gt;在UIC的细胞分离胰岛隔离的实验室。使用UIC的方法，这是最初所Ricordi描述的方法修改后的版本中分离出胰岛<em&gt;等</em&gt;<sup&gt; 8</sup&gt;。简言之，清洗后的胰腺周围组织灌注与酶液（赛瓦胶原酶+中性蛋白酶或Sigma V酶）。扩张的胰腺，然后转移到Ricordi消化腔，连接到一个修改过的，封闭的的循环管路系统，并升温至37 ° C。在消化，香港总商会是轻轻的动摇。样品连续监测的消化进度。一旦获得了自由的胰岛细胞，在显微镜下发现，消化停止刷新冷（4℃）的RPMI稀释液稀释的酶进入流通系统（Mediatech，赫恩登，VA）。正在收集和M199媒体补充人血白蛋白洗净后，组织样本进行预净化计数和培养威斯康星解决方案之前，净化。第二部分：人类胰岛的分离纯化及文化，净化过程中，将描述。

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Human Pancreatic Islet Isolation: Part I: Digestion and Collection of Pancreatic Tissue

实现高​​品质和适当数量的人类胰岛是胰岛移植成功的突出的先决条件之一。在这个视频中，我们描述一步一步人体胰岛隔离的程序：使用修改的自动化方法（第一部分消化和胰腺组织的集合）。

人类胰岛的分离：第一部分：收集和胰腺组织消化

Management of Type 1 diabetes is burdensome, both to the individual and society, costing over 100 billion dollars annually. Despite the widespread use of ...

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19.2K 次观看.  University of Illinois, Chicago. 实现高​​品质和适当数量的人类胰岛是胰岛移植成功的突出的先决条件之一。在这个视频中，我们描述一步一步人体胰岛隔离的程序：使用修改的自动化方法（第一部分消化和胰腺组织的集合）。