イリノイ大学シカゴ校だけでなく、膵島細胞リソースセンターNIHの助成金（RFA - RR 05から003）、クリストファー財団、Efroymson財団、およびテラブス財団からの資金によって支え。

1。ファシリティのセットアップ<ol><li>人間の膵島分離には、チームワークを含む時間に敏感な手順であり、それゆえ、4人は、この手順を行うことが必要である。チームは、膵臓の解剖とcannulates外科医によるリードです。 </li><li>膵島分離は、チームはUIC膵島分離施設に入る分を開始します。チームメンバーは、必要なすべての計測機器が、遠心分離機のように、チェックされており、電源が入っていることを確認してください。彼らはまた、すべてのフードとの表面を適切にサニタイズしてください。 </li><li>二人は、カニューレ挿入のテーブル、スラッシュ自販機、消化回路、灌流装置、COBE浄化機、および外科テーブルを設定します。 </li><li>同時に、他の2つのチームのメンバーは、分離時に必要なメディアを準備します。 </li><li>次に、細菌学のチューブ（ボトル、チューブ、フォームおよび袋）、サンプリングチューブ（洗浄とプレ充填）、及び評価のチューブとプレートが用意されています。 </li><li>次のように設定された浄化チューブを準備します：第1回チューブ、空、150 mlでマーク、チューブ2-12は、ヒトアルブミン（洗浄ソリューション）を添加したM199培地200mlで埋め、230 mlでマークされ、そして最終的に1つ50 mlコニカルチューブ洗浄溶液50mlでいっぱい。これらの準備ステップが完了すると我々は、膵臓を作製し、灌流を開始する準備ができました。 </li></ol> 2。膵臓の準備と血流<ol><li>膵臓の準備と灌流を開始するには、演算子は、滅菌テクニックを使用してパッケージから臓器を削除します。外科医は、汚染除去のテーブルに膵臓を転送します。 </li><li>外科医はそれは準備された&quot;調達&quot;細菌学のボトルを埋めるために、それを使用する演算子、にオリジナルの膵臓保存液と手を使用すると、ワン60mlのシリンジを満たします。 </li><li>臓器は、膵島分離（膵臓が調達ま​​たは解剖学的に異常な中に破損している場合、それは膵島分離に使用されていない可能性があります）に適しているかどうかを判断するために目視検査の後、外科医は、コラゲナーゼを準備するためにオペレータが要求されます。この再懸濁の時間が異なる酵素のブランドと多くの間で変化することに注意してください。 </li><li>外科医の準備が整うと、汚染除去のテーブルに（Betadine、Fungizone /セファゾリンおよびHBSS）除染ソリューションを持参し、適切なコンテナにそれらを注ぐ。外科医は、分間除染液の各々に膵臓を洗浄する膵臓の汚染除去を行います。膵臓は、それは重量を測定されるに小さい殺菌した瓶に入れられます。重量は、バッチレコードに入力された後、膵臓は、いくつかの保存液とカニューレのパンに配置されます。 </li><li>外科医は、公開と部分的に主膵管を切開すると、カニューレと膵臓の各半分をカニューレを挿入するでしょう。カニューレは、縫合によって固定されます。膵臓を灌流するには、まず血流のユニットに移動し、流域に酵素液を注ぐ。総灌流時間は約10分、5分では80 mmHgの時、その後5分間で180 mmHgの時です。膵臓は灌流後に膨張した。 </li><li>脂肪組織が慎重に膵臓からトリミングされているカニューレのパンへの灌流膵臓を、移動する。その後10から12の部分に膵臓をカットし、消化のためにRicordiの商工会議所に移す。 </li></ol> 3。膵臓の消化<ol><li> 、消化のステップを開始する空のRicordiのチャンバーに膵臓を転送、Pulmozymeの1つの2.5 mlのバイアルを追加するには、（チャンバーを組織ブロックの大きな塊を避けるために）画面に置かれた、チャンバーを閉じ、システムをいっぱいに。 </li><li> 5分間のソリューションをポンピング開始。ゆっくりと均等に全体の温溶液を分散させるためにチャンバーを揺らし。 5分後、軽く全体の消化の段階のためのチャンバーを振る。 ˚Cで37℃の温度を維持する</li><li>温度が37℃に達するまでゆっくりとチャンバーを揺する、その後チャンバーを振る。サンプルを2分ごとに乗り、無料の島が、スコープの下に発見された場合に検出。バッチ記録の消化テーブル内の膵島評価情報を記録します。そのうちの50％が溶液中に遊離し、分離されたフローティングがあるまで、膵島の割合を監視し続ける。 </li></ol> 4。組織のコレクション<ol><li>かつて島の50％がサンプル中の遊離発見された、消化が回路内にコールドRPMI希釈液を加えることによって停止されます。組織を、500mlコニカルチューブヒトアルブミン30mlで事前入力で収集されます。一度チューブは、スピン清オフ吸引と冷洗浄溶液でペレットを洗浄している。 1分、4˚Cの、1100 RPM（毎分回転数）でコニカルチューブをスピン</li><li>シングル500ミリリットルコニカルに消化された膵臓の組織で中断されたすべてのコレクションチューブを組み合わせる。チューブは洗浄された組織の一杯になると、スピンし、すべての組織が複数回洗浄されるまで、洗浄工程を繰り返します。このチューブをスピンし、単一の250ミリリットルコニカルチューブに組織を移す。 250mlにボリュームをで持ち出すM199洗浄ソリューションでは、HAを補充し、サンプリングの準備。 </li><li>ピペットで1 mlのサンプルを取り、15 mlコニカルチューブ洗浄溶液9 mlをあらかじめ入力して追加します。その後、皿を数える直接グリッドに1ミリリットルからのサンプル、15 mlコニカルチューブゆるやかに転倒によって、本から混ぜる。細胞をカウントし、2500（10x250）の希釈係数を用いて細胞数を計算する。 </li><li> 250ミリリットルコニカルチューブをスピンし、UW（ウィスコンシン大学）は、通常、臓器温存のために使用する溶液の150mlを加える。 UWが追加されたときに、ピペットを用いて細胞懸濁液を混ぜる。 UWの開始時刻を記録し、精製のオペレータに通信する。氷と時折渦巻きにチューブ（s）を残す。今すぐ島をさらに精製することができる。 </li></ol>

<ol>
	<li>Shapiro, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+transplantation+in+seven+patients+with+type+1+diabetes+mellitus+using+a+glucocorticoid-free+immunosuppressive+regimen.">Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen.</a> N Engl J Med. 343, 230-238 (2000).</li><li>Nano, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+isolation+for+allotransplantation:+variables+associated+with+successful+islet+yield+and+graft+function.">Islet isolation for allotransplantation: variables associated with successful islet yield and graft function.</a> Diabetologia. 48, 906-912 (2005).</li><li>Barbaro, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+human+pancreatic+islet+purification+with+the+refined+UIC-UB+density+gradient.">Improved human pancreatic islet purification with the refined UIC-UB density gradient.</a> Transplantation. 84, 1200-1203 (2007).</li><li>Lakey, J. R., Rajotte, R. V., Warnock, G. L., Kneteman, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+pancreas+preservation+prior+to+islet+isolation.+Cold+ischemic+tolerance.">Human pancreas preservation prior to islet isolation. Cold ischemic tolerance.</a> Transplantation. 59, 689-694 (1995).</li><li>Fridell, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+histidine-tryptophan-ketoglutarate+solution+and+University+of+Wisconsin+solution+for+organ+preservation+in+clinical+pancreas+transplantation.">Comparison of histidine-tryptophan-ketoglutarate solution and University of Wisconsin solution for organ preservation in clinical pancreas transplantation.</a> Transplantation. 77, 1304-1306 (2004).</li><li>Potdar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+experience+using+histidine-tryptophan-ketoglutarate+solution+in+clinical+pancreas+transplantation.">Initial experience using histidine-tryptophan-ketoglutarate solution in clinical pancreas transplantation.</a> Clin Transplant. 18, 661-665 (2004).</li><li>Salehi, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+islet+isolation+outcomes+from+pancreata+preserved+with+Histidine-Tryptophan+Ketoglutarate+versus+University+of+Wisconsin+solution.">Human islet isolation outcomes from pancreata preserved with Histidine-Tryptophan Ketoglutarate versus University of Wisconsin solution.</a> Transplantation. 82, 983-985 (2006).</li><li>Ricordi, C., Lacy, P. E., Scharp, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+islet+isolation+from+human+pancreas.">Automated islet isolation from human pancreas.</a> Diabetes. 38, 140-142 (1989).</li><li>Hanley, S. C., Paraskevas, S., Rosenberg, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donor+and+isolation+variables+predicting+human+islet+isolation+success.">Donor and isolation variables predicting human islet isolation success.</a> Transplantation. 85, 950-955 (2008).</li><li>Toso, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+affecting+human+islet+of+Langerhans+isolation+yields.">Factors affecting human islet of Langerhans isolation yields.</a> Transplant Proc. 34, 826-827 (2002).</li></ol>

分離の結果9,10に影響を与える要因はさまざまです。その中で、膵組織の消化は、重要な役割を果たしている。私たち自身の人間の膵島分離の経験に基づいて、我々は潜在的に膵島の収量と品質に影響を与えうる重要なポイントは、以下の要約。 <ol><li>酵素の様々なタイプが使用されると消化時間が異なっている。 </li><li>早く完全に腺房組織から分離膵島の40〜50％として、消化が希釈溶液...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Ice Slush Machine</td>
<td>equipment</td>
<td>Taylor Company</td>
<td>K4036546</td>
<td>make sterile ice</td>
</tr>
<tr>
<td>Centrifuge</td>
<td>equipment</td>
<td>Beckman Coulter</td>
<td>424803</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MZ6 Inverted Microscopy TLBD4.1</td>
<td>equipment</td>
<td>Leica Diagnostic Instrument Co</td>
<td>4103</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cell Culture Dish with 2 mm Grid</td>
<td>equipment</td>
<td>Nunc Brand Products</td>
<td>174926</td>
<td>islet counting</td>
</tr>
<tr>
<td>Digital Water Bath EX7</td>
<td>equipment</td>
<td>NesLab</td>
<td>105361058</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Thermometer</td>
<td>equipment</td>
<td>IBI:IR</td>
<td>60444</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MonoBloc Balance AB 104-S</td>
<td>equipment</td>
<td>Metler Toledo</td>
<td>1119430864</td>
<td>measure pancreas weight</td>
</tr>
<tr>
<td>MasterFlex II Speed Controller</td>
<td>equipment</td>
<td>Cole Parmer Instrument Co</td>
<td>J00006445</td>
<td>adjust flow speed during degestion</td>
</tr>
<tr>
<td>Digital Sight DS L1</td>
<td>equipment</td>
<td>Nikon</td>
<td>217267</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Perfusion Unit</td>
<td>equipment</td>
<td>Custom Made/Swiss</td>
<td>n/a</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cooler for perfusion unit</td>
<td>equipment</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>3013P</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ricordi Chamber</td>
<td>equipment</td>
<td>University of Miami</td>
<td>n/a</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RPMI dilution solution</td>
<td>reagent</td>
<td>Mediatech Inc</td>
<td>99783024</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>University of Wisconcin (UW) solution</td>
<td>reagent</td>
<td>DURAMED</td>
<td>1000-46-06</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hank's Buffered Salt Solution (HBSS)</td>
<td>reagent</td>
<td>Mediatech Inc</td>
<td>99-597-CM</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>25% Human Albumin</td>
<td>reagent</td>
<td>GRIFOLS</td>
<td>NDC 61953-0002-2</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>M199 media (wash solution)</td>
<td>reagent</td>
<td>Mediatech Inc</td>
<td>99-784-CM</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Collagenase NB1 GMP grade</td>
<td>reagent</td>
<td>SERVA Electrophoresis</td>
<td>N0002937</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Neutral Protease NB1 GMP grade</td>
<td>reagent</td>
<td>SERVA Electrophoresis</td>
<td>N0002936</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Betadine</td>
<td>reagent</td>
<td>Cardinal Health</td>
<td>29906-004</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cefazolin</td>
<td>reagent</td>
<td>West-Ward Pharmaceutical</td>
<td>NDC 0143-9924-90</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dithizone</td>
<td>reagent</td>
<td>Sigma </td>
<td>D5130</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

human pancreatic islet isolation: part i: digestion and collection of pancreatic tissue

1型糖尿病の管理は、年間1,000億ドルで、個人と社会の両方に、厄介です。グルコースモニタリングと新しいインスリン製剤の普及にもかかわらず、多くの個人はまだ壊滅的な二次的合併症を開発する。膵島移植は、糖尿病患者における正常血糖コントロールの近くに復元することができます<sup&gt; 1</sup&gt;、集中的なインスリン療法に関連付けられている重篤な低血糖エピソードのリスクなし。十分な膵島質量を提供することに成功した膵島移植のために重要です。しかし、ドナーの特性、臓器の調達と保存には、分離結果に影響を及ぼす<sup&gt; 2</sup&gt;。イリノイ大学シカゴ校（UIC）で我々は改善された精製勾配で成功した分離プロトコルを開発している<sup&gt; 3</sup&gt;。プログラムは、2004年1月に開始し、300人以上のアイソレーションは、2008年11月までに実施された。膵臓は冷たい保存液（UW、ウィスコンシン州またはHTKの大学、ヒスチジン - トリプトファンケトグルタル酸）に送られ、<sup&gt; 4月7日</sup&gt;膵島分離のためのUICにおける細胞分離の研究室へ。膵島は、もともとRicordiの記載された方法を改変したものですUIC方法を、用いて単離された<em&gt;ら</em&gt;<sup&gt; 8</sup&gt;。簡単に言えば、周囲の組織から膵臓をクリーニングした後、それは酵素溶液（Servaコラゲナーゼ+中性プロテアーゼまたはシグマV酵素）で灌流した。膨張した膵臓は、その後、Ricordiの消化槽に移し、変更、閉鎖循環配管システムに接続し、37℃まで加温した。消化中に、チャンバーを穏やかに振とうした。サンプルは、消化の進行状況を監視するために連続して撮影した。無料の島が顕微鏡下で検出された一度、消化酵素を希釈する循環システムへのコールド（4℃）RPMI希釈液（Mediatech、ハーンドン、バ​​ージニア州）をフラッシュして停止した。収集し、ヒトアルブミンを添加したM199培地で洗浄した後、組織は、事前に精製数をサンプリングし、精製前のUW液でインキュベートした。ヒト膵島の精製と​​文化：精製工程は、第II部で説明される。

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Human Pancreatic Islet Isolation: Part I: Digestion and Collection of Pancreatic Tissue

ヒト膵島の高品質と適切な量を達成することが成功した膵島移植のための著名な前提条件の一つです。このビデオでは、我々は段階的に説明し、人間の膵島を分離するための手順：変更された自動化法を用いて（パートI消化および膵組織のコレクション）。

人間の膵島単離：パートI：膵組織の消化とコレクション

Management of Type 1 diabetes is burdensome, both to the individual and society, costing over 100 billion dollars annually. Despite the widespread use of ...

human-pancreatic-islet-isolation-part-i-digestion-collection

Research

JoVE Journal

Biology

19.2K ビュー.  University of Illinois, Chicago. ヒト膵島の高品質と適切な量を達成することが成功した膵島移植のための著名な前提条件の一つです。このビデオでは、我々は段階的に説明し、人間の膵島を分離するための手順：変更された自動化法を用いて（パートI消化および膵組織のコレクション）。