首先将麻醉的小鼠放在加热的手术架上的右侧,以暴露其左腹部。用纸胶带固定鼠标的前端和后肢,确保脾脏可见。接下来,通过大量涂抹消毒剂对手术部位的皮肤进行消毒。
通过捏脚趾来确认小鼠完全麻醉。使用镊子,抬起左上腹部的皮肤,用卡斯特罗维霍剪刀在皮肤和肌肉层上做一个10毫米的圆形切口。找到附着在脾脏上的胰腺,以确定十字绣的放置方向。
使用 5/0 真丝缝合线将第一针缝入肌肉层的确定位置。用三到五节固定末端。继续直接缝合切口。
然后剪掉并留下大约五厘米的尾巴。重复缝合,这次垂直于原来的针迹。接下来,小心地将胰腺抬起并放置在十字绣上。
在距离孔约一毫米的地方缝一针,将皮肤和肌肉层交织在一起。放置窗框,使圆形切口边缘位于窗口的凹槽内。现在,通过紧紧系住 5/0 真丝来固定植入的窗户。
将 100 微升液体氰基丙烯酸酯粘合剂装入 10 毫米注射器中。将一股细腻的压缩空气流向组织约 10 秒钟以使其干燥。使用镊子,扣住窗框的外边缘并小心抬起,以确保胰腺与窗框底部分离。
沿着窗户的凹槽分配一层薄薄的液体氰基丙烯酸酯粘合剂,避开胰腺组织。然后使用真空拾音器提起 5 毫米的盖玻片。轻轻地将盖玻片放在光学窗框的中心,并保持轻压约 25 秒,让粘合剂凝固。
使用镊子,从真空拾取器上拆下盖玻片。接下来,拧紧十字绣缝合线,将胰腺固定在盖玻片上并切断缝合线末端。最后,从鼠标上取下胶带。
关闭异氟烷蒸发器并将鼠标重新放置到干净的笼子中。在沉降期后观察到胰腺组织的横向和轴向稳定性增加。与腹部和胰腺成像窗口相比,使用SWIP成像显示的漂移水平较低。
蔚蓝治疗后对小鼠胰腺进行连续成像。连续两天后观察到小叶移位。SWIP还可用于长期成像,允许液泡运动的可视化和量化。
例如,相对于PBS,蔚蓝处理后小鼠胰腺中液泡的平均速度增加了约10%。蔚蓝处理也使亚细胞结构的平均转动频率增加了10%然而,处理之间的净速度、方向性或累积距离没有显着差异。SWIP能够可视化和捕获肿瘤细胞迁移。
在短时间内观察到肿瘤细胞的集体簇状细胞迁移。还观察到肿瘤细胞和巨噬细胞的单细胞迁移。