Labeling and Staining Rat Brain Pericytes for Fluorescent Imaging

要标记周细胞，将荧光染料 TO-PRO-3 添加到人工脑脊髓液或 ACSF 中。现在在室温下在黑暗环境中将新鲜切片的大鼠脑在充满染料的ACSF中孵育20分钟。接下来，将带有脑切片的尼龙网过滤器转移到六孔板冲洗室中。

让脑切片在腔室中静置 10 分钟。为了标记非重要周细胞，将 TO-PRO-3 标记的脑切片在 37 摄氏度的共轭异凝集素 B4 中在黑暗中孵育 30 分钟。孵育后，用人工脑脊髓液冲洗脑切片 15 分钟。

接下来，将脑切片放入用 5% 二氧化碳和 95% 氧气加气的 ACSF 中。为此，在 37 摄氏度下加入浓度为 37 微摩尔的碘化丙啶。为了停止染料吸收并尽量减少背景标记，请在 ACSF 中冲洗制剂 15 分钟。

在正常生理条件下，脑周细胞不会经历细胞死亡。检测到未用碘化丙啶染色的活周细胞。SAH 模型应为微血管系统内的重要周细胞。

还检测到非活体周细胞。碘化丙啶标记的非重要周细胞仍然附着在整个微血管系统上。