Preparing a Vascularized Micro-Tumor System Using Human Cells for Studying Tumors and Drug Responses

首先，将HBSS细胞解离试剂EGM-2和DMEM置于37摄氏度水浴中10至15分钟。凝血酶和层粘连蛋白在 4 摄氏度下解冻过夜，纤维蛋白原在室温下解冻。将 1.5 μL 凝血酶加入 500 μL 微量离心管中。

将紫外线灭菌的高通量板放入干燥器中 30 分钟，以去除滞留在微流体中的空气。将T75烧瓶置于显微镜下，放大4倍，以确认细胞汇合和转导效率。用五毫升HBSS洗涤细胞两次。

然后，向烧瓶中加入一毫升解离试剂，并在 37 摄氏度下与 5% 二氧化碳一起孵育一到两分钟。用手掌轻轻敲击烧瓶，并在显微镜下观察所有细胞是否已被抬起。用9毫升适当的培养基洗涤细胞，并将悬浮液收集到15毫升锥形管中。

立即取出一小等分试样并计数细胞。将细胞悬液在 300G 和 4 摄氏度下离心三到五分钟。然后，除去上清液并将沉淀重悬于冰上的适当培养基中。

使用给定的公式，计算所需的单元格数。以每毫升 1 乘以 10 至 6 个细胞的浓度重悬细胞，并使用以下公式计算所需的细胞体积。如图所示离心所需体积的细胞悬液。

然后，在计算体积的纤维蛋白原中，将沉淀重悬在冰上。