小鼠脑室下区衍生的神经干细胞 （NSC） 的分离和接种用于神经球形成

为了从解剖的神经元脑室下区或 SVZ 中分离神经干细胞或 NSC，将每个 SVZ 切成四到五个小块，以促进组织的解聚。使用无菌塑料巴斯德移液管，将切碎的 SVZ 转移到 15 毫升离心管中，同时确保板中没有碎片。在去除剩余的 DPBS 之前，让组织沉淀物在管底部。

为每个大脑添加 500 微升过滤的含酶混合物，用于两个 SVZ，并将试管在 37 摄氏度的水浴中孵育 30 分钟。孵育后，向每个样品中加入 5 毫升预先警告为 37 摄氏度的对照培养基。将样品以 300 G 离心 5 分钟。

使用微量移液器或真空泵小心去除上清液。使用火焰抛光的牧场玻璃移液管，向沉淀中加入 1 毫升对照培养基。通过上下移液 10 至 20 次，小心地机械解聚沉淀，直到获得均匀的细胞悬液。

然后，加入 4 mL 对照培养基，倒置混合以洗涤细胞。在 300 G 离心 5 分钟后，通过上下吹打 10 次，将所得沉淀均匀地重悬于 1 mL 完全培养基中。用一份台盼蓝稀释细胞悬液的等分试样的一部分后，在显微镜下使用 neubauer 室对细胞进行计数。

在将细胞均匀接种到 48 孔板的 8 个孔中，在最终体积为 500 μL 的完全培养基中之前，确保细胞在单细胞水平上分解。将细胞孵育 5 到 7 天，让原代神经球形成。