原代小鼠 CD4⁺ T 细胞的上样和蛋白 G 磁珠的抗体包被，用于局部 Ca²⁺ 成像

首先，取从小鼠淋巴结和脾脏中分离的 CD4 阳性 T 细胞。以 300 g 离心 2 至 500 万个细胞 5 分钟。弃去上清液，将沉淀重悬于 480 微升含有 10 微摩尔 Fluo-4 AM 和 20 微摩尔 Fura Red AM 的 T 细胞培养基中。用铝箔盖住 Falcon 管，并在室温下避光孵育细胞 20 分钟。

然后向细胞中加入 2 mL T 细胞培养基，并继续再孵育 30 分钟。轻轻混合 Protein G 磁珠悬浮液，并将 12.5 μL 转移到新试管中。将试管放在磁力架上，让磁珠迁移到磁力架上。

从磁力架的另一侧轻轻吸出储存缓冲液以将其去除。要去除任何剩余的储存缓冲液，请加入 500 μL PBST 并涡旋 10 秒。将试管再次放在磁力架上并取出缓冲液。

要用抗体包被珠子，请将它们重悬于 7.5 μL 的 PBST 中，并分别添加 5 μL 的抗 CD3 和抗 CD28。孵育 30 至 60 分钟，同时在室温下连续混合。用 500 μL PBST 洗涤包被的珠子 3 次，然后使用磁力架用 500 μL 钙缓冲液洗涤，然后将珠子重悬于 200 至 400 μL 钙缓冲液中。