建立和维护用于 梅毒螺旋体 培养的 Sf1Ep 细胞储备

首先，将新鲜制备的预热 Sf1Ep 细胞培养基和解冻的 Sf1Ep 细胞放入工作平台上的冷冻瓶中。向冻存管中加入 1 mL Sf1Ep 细胞培养基，并轻轻混匀。将混合物转移至含有 5 mL Sf1Ep 细胞培养基的无菌 15 mL 锥形离心管中，并轻轻混合。

将细胞悬液以 100 G 离心 7 分钟，弃去上清液，然后将沉淀重悬于 15 mL 新鲜 Sf1Ep 细胞培养基中。将细胞悬液转移到 T75 组织培养瓶中，并将其置于标准加湿组织培养箱中一周。孵育后，从培养瓶中吸出培养基，并用 5 mL 无菌 PBS 冲洗细胞层。

吸出 PBS 后，向培养瓶中加入 2.5 毫升胰蛋白酶-EDTA 并密封瓶盖。将培养瓶在 37 摄氏度下孵育 5 分钟。轻轻敲击培养瓶以去除细胞，并在倒置显微镜下观察以确认细胞的扩散。

加入 5 毫升 Sf1Ep 生长培养基，摇动培养瓶与胰蛋白酶-EDTA 混合。将细胞悬液转移到锥形管中，并使用血细胞计数器或自动细胞计数仪对细胞进行定量。要冷冻 Sf1Ep 细胞，将细胞以 100 G 离心 7 分钟，然后将沉淀重悬于补充有 10% DMSO 的 Sf1Ep 培养基中。

将 1 mL 细胞悬液分配到每个冻存管中，并在零下 70 至零下 80 摄氏度下冷冻过夜。