首先，将冷冻的 Naegleria gruberi 滋养体在 37 摄氏度下放置 3 分钟。在 25 摄氏度的 PYNFH 培养基中培养滋养体，直到大约 80% 汇合。将汇合瓶放在冰上 5 到 10 分钟，以从塑料中释放粘附的滋养体。
然后轻轻旋转培养瓶以去除任何剩余的贴壁细胞。用无菌包埋培养基替换培养基，以形成 Naegleria gruberi 细胞的包囊。48 小时后，从培养瓶中取出囊肿。
将囊肿在 4 摄氏度下以 600 x g 离心 10 分钟。离心后，将囊肿重悬于含 10% 胎牛血清的 2 毫升 PYNFH 培养基中，以使细胞脱囊。将包囊在 25 摄氏度下孵育 72 小时，直到滋养体出现并达到 80% 汇合。
要转染滋养体，首先将 1 mL 滋养体接种到 6 孔平底组织培养板中。接下来，将质粒转染试剂混合物在室温下孵育 10 分钟。在转染之前，从滋养体单层中移出大约 800 μL 的培养基。
然后将 200 μL 质粒转染试剂混合物添加到滋养体中。每 15 分钟轻轻旋转一次板，以防止培养基在板边缘聚集并变干。一小时后，在 1 mL 10X DNase 缓冲液中加入 10 单位的 DNase，并将其添加到孔中。
将板在 37 摄氏度下孵育 15 分钟，以去除残留的质粒 DNA。现在用 1 毫升生长培养基洗涤板一次，然后加入 2 毫升新鲜培养基。将板在 25 摄氏度下孵育 24 至 36 小时。
孵育完成后，将孔中的内容物以 1：2 的比例分液到新板中。然后从剩余的孔中收集滋养体以进行进一步分析。Naegleria gruberi 滋养体是变形虫，在标准培养条件下粘附在培养瓶上。
它们在冰上的孵育产生了圆形和非粘附的滋养体。滋养体在包囊培养基中孵育导致它们包膜。
