原代小鼠气道上皮细胞的扩增、培养和传代

一旦小鼠气管上皮细胞形成具有鹅卵石外观的完整单层，用 3 毫升预热的 PBS 轻轻冲洗细胞。向培养皿中加入 3 毫升不含动物成分的酶解离溶液，并在 37 摄氏度下孵育 5 分钟。轻轻移液以去除细胞，并将悬浮液转移到 3 毫升不含动物成分的酶抑制溶液中。

在 4 摄氏度下以 400 G 离心细胞悬液 5 分钟，然后将沉淀重悬于 1 mL 扩增培养基中。使用台盼蓝和血细胞计数器计数活细胞。将 P1 细胞悬液接种在预涂有大鼠尾胶原的 100 毫米培养皿上。

在 37 摄氏度和 5% 二氧化碳下培养细胞。