首先，获得带有甲基单胞菌属 LW13 菌落的培养板。将菌落接种在玻璃管中的 6 毫升硝酸盐矿物盐培养基中。用血清塞和铝压接密封密封管。
使用注射器添加甲烷，在空气中产生 50% 体积甲烷的最终大气。在室温下以每分钟 200 转的速度摇动这种浮游液体培养物直至浑浊，这大约需要一天时间。以 1 比 10 的比例将液体培养物传代到新鲜培养基中。
继续生长嗜甲烷菌的液体培养物以对数期生长，在 600 纳米处达到约 0.5 的光密度。要准备注射器，请取下随附的柱塞并将其放入无菌容器中。将无菌聚四氟乙烯或 PTFE 过滤头连接到每个注射器上，并将注射器放在标准试管架上，尖端朝下。
然后，在无菌锥形管中将 1 毫升细胞与 5 毫升硝酸盐矿物盐培养基和 4 毫升熔融琼脂糖混合。将琼脂糖混合物缓慢倒入注射器中，直至达到 8 毫升标记，并使其凝固。大约 15 分钟后，用无菌的 20 毫米橡胶丁基胶塞盖住注射器。
用实验室胶带固定塞子并在注射器上贴上标签。接下来，将 60% 甲烷装满一个 100 毫升大注射器，并将 PTFE 过滤头连接到无菌 23 号针头。用大注射器用琼脂糖混合物刺穿注射器的橡胶塞，然后插入第二个无菌针头作为气体出口。
压下大注射器的柱塞，让 20 毫升 100% 甲烷冲过顶部空间。当注射器中剩余 1 到 2 毫升甲烷时，请取下出口针头，以防止氧气回流。将注射器与琼脂糖混合物和甲烷在 18 摄氏度下孵育。
要挤出琼脂糖，请用无菌 23 号针头更换 PTFE 过滤器尖端，用随附的注射器柱塞更换橡胶塞。慢慢按下柱塞，以 1 毫升的增量分配到单独的无菌 1.5 毫升微量离心管中。野生型 LW13 菌株在甲烷和氧气浓度较低的梯度注射器中特定深度形成明显的水平带。
在梯度注射器中接种的 LW13 显示出甲烷-氧反梯度，甲烷消耗和耗氧量对应于水平带的深度。LW13 的 OAT 缺失突变体缺乏在野生型菌株中观察到的明显水平带形成，表明该基因在该表型中的作用。
