We are grateful to the other members of the lab for their technical assistance in developing the CSE damage assay, and their support and advice during the development of this assay. In addition, we are grateful to the Holy Cross Fenwick Scholar Committee for their support of Nicholas Cormier, and the Holy Cross College Honors program for their support of Alexander Yeo.

注意：对于该研究中，肺间质基质细胞（LR-的MSC）从远端肺组织中分离或者基于它们的细胞表面标记物的表达（CD45 阴性 ，CD31 阴性 ，的Sca-1的高，EPCAM 负）14,15，用植出生长16，或使用酶消化17。粘附LR-的MSCs培养在DMEM高糖和无谷氨酰胺，15％FBS，1×抗生素/抗 ​​真菌剂，和2mM谷氨酰胺（此后完全培养基）并在37℃，5％的CO 2。 LR-MSCs的传代3-4次，以确保细胞群与用于迁移测定相对同质生长特性。 1.准备一个融合的单层<ol><li>分离从标准的100毫米培养皿中的MSC，洗涤细胞，用10毫升37℃的预热的PBS中，吸出PBS并加入胰蛋白酶4毫升（0.25％）。孵育在37℃培养箱中3-5分钟。吸的CELLS到锥形管中，以300g添加完全培养基，离心等体积为5分钟以沉淀下来的细胞。 注意：在胰蛋白酶长孵育可以改变细胞表面受体，并可能影响迁移。 </li><li>吸媒体和悬浮细胞，新鲜完整的媒体。计数细胞，用台盼蓝染色排除死细胞和板50万间充质干细胞在4毫升完整的媒体对60毫米的细胞培养皿。 注意：根据细胞的来源上，测试可能是必要的，以确定所需要的细胞的最佳数量。 </li><li>孵育细胞，直到板为90％融合了最佳的细胞附着和增殖，一般48-72小时的干细胞。 注：100％融合，不推荐，因为许多锚定依赖性细胞的体验接触抑制，这可能会改变他们的迁移能力。板的小于80％汇合，将导致不能使用的照片，因为图像分析软件将解释间隙细胞作为划痕的周边的部分之间秒（ 见图1D）。 </li><li>后的细胞达到90％汇合时，损伤细胞以适合应用。为了评估暴露于可溶性香烟烟雾提取物（CSE）后的细胞损伤，经到25 ml完全培养基在Buchner瓶超过2分钟，18吸引来自肯塔基大学的1个研究香烟（3R4F）烟雾产生100％的自定义搜索引擎。 </li><li>孵育细胞24小时4毫升1-4％CSE稀释在完全培养基中。培养后，用4毫升温无菌PBS洗细胞两次，用4ml新鲜完全培养基更换之前。 注：毁伤能力的细胞具有高浓度的香烟烟雾提取物（&gt; 5％），可大大降低汇合。 </li></ol> 2.创建暂存<ol><li>在一个无菌的环境，请从受损的干细胞的60毫米的钢板盖，并奠定了直边（例如无菌塑料尺）交流罗斯板的顶部边缘。如果不取出介质，使用消毒200μl枪头进行无菌直边引导，使整个板块差一分四点平行划痕大约间隔5毫米，50毫米长。 注：直边最小化所需要的板材，当它是在显微镜舞台上旋转的调整量。当务之急是划痕出现在屏幕上完全垂直（或水平）。在60毫米的钢板产生多个划痕不会改变，影响细胞迁移（数据未显示）的方式的微环境，但也可以是对其它细胞类型的考虑。使用更小的孔的不推荐，因为细胞生长接近井的边缘的变异性变得更加明显，并且可能影响均匀代划痕。 </li><li>吸媒体，轻轻用2ml预热完整的媒体，以防止细胞粘到划痕的中心洗平板，并以除去细胞s表示已松动的的刮伤。更换用4毫升新鲜完整的媒体。 </li><li>用无菌永久性标记，标号1-4在板的下侧的每个刮在不会与成像划痕干扰位置。 注意：从同一个临时图像迁移前后进行比较是很重要的，因为可以有变化的划痕宽度。 </li></ol> 3.以暂存的初始图像注意：如果划痕试验是在多个板中进行，所以建议在单个板的所有划痕初始图像被拍摄之前划痕上的下一个板制成。 <ol><li>使用倒置相差显微镜用照相机以生成分析所需的图像。 </li><li>定位在显微镜的培养板，并使用低功率物镜（10X）来定位刮＃1。如果缩合在培养板的盖子妨碍清晰IMAGE中的细胞，用加热的阶段设定为37℃。 </li><li>保持刮完全水平和在视场的中心，得到尽可能多的图像作为必要在包括90％的划痕长度的。获得的耐擦伤不同的部分图像的图像之间没有重叠。 注意：光在培养皿的边缘上的折射曝光过度的图像，使它们不可能分析。因此，不从第一个拍摄图像和最后划痕的长度的5％。 </li><li>保存每个从无到有的图像在一个单独的文件夹中。 </li><li>重复步骤3.2-3.4是否有划痕2，3和4。 </li><li>最初的影像后立即返回板的孵化器。让细胞迁移4-7小时。 注：评估干细胞受损与CSE时7小时是最佳的。孵化细胞大于7小时不建议，因为细胞的增殖可以作为细胞迁移混杂变量（参见下面的可选注8.2）。 </li></ol><p类=“jove_title”&gt; 4。初步分析划痕图片<ol><li> ImageJ的下载和安装伤口愈合工具插件（请参阅的材料/设备表）。 </li><li>在打开ImageJ的图像文件，然后单击“进程”和“查找边缘”突出周边划伤的伤口愈合工具来计算临时区域（ 图2B）的细胞。接下来，单击“图片”，“调整”，“颜色阈值”，并在标有“门槛颜色”下拉菜单值更改为“B＆W”。 </li><li>在“颜色阈值”菜单，同时调整亮度阈值滑块，直到从无到有，小区前的最佳的对比度达到。要允许尝试创建图像的对比度，完全移动底部滑块向右（全黑图像），然后调整顶部滑块产生最大对比度时，最大的范围内。 </li><li>慢慢调整前BRIghtness滑块从左至右直到图像干净地显示划痕（图2C）的轮廓。一旦划伤的边缘已经确定，单击“更多选项”，在ImageJ的工具栏，在下拉菜单中选择“MRI_Wound_Healing_Tool”，然后按“M”键（将出现在ImageJ的工具栏）突出刮开区并输出所计算的区域中一个结果弹出出窗口（图2D）。 </li><li>复制并从结果窗口 （图2E）的所有号码粘贴到Excel电子表格。请务必将数据从单独划痕分开。 </li></ol> 5.与划痕的最终图像<ol><li>在细胞迁移（4-7小时），重复步骤3.2-3.4。图像以相同的顺序它们被划伤，使细胞在每个板上有相等的时间迁移的板。 注：细胞可以在多个时间点进行成像，这取决于它们的森西拉了一到温度和pH值的变化。或者，活细胞成像可以用于跟踪单元的实时，因为它们迁移。 </li></ol> 6.分析最终划痕图片<ol><li>最终划痕图像重复步骤4.2-4.5。 </li></ol> 7.计算刮开区量化迁移<ol><li>通过平均各刮痕的初始面积值计算的平均预迁移区域。 </li><li>减去最后的迁移区域的每个图像，在步骤6中计算出的，从平均迁移前区域（步骤7.1）计算迁移的总量。生成值的每一个从无到有代表迁移变化的列表。 </li><li>池相同的测试组（ 如对细胞的所有板和所有的划痕暴露在0％CSE）内多处抓痕的数据。使用方差测试的分析方法来分析实验组之间的差异。 </li><li>如果细胞迁移慢并且需要较长的培育时间划伤（大于10〜12小时）后，执行的BrdU或EDU掺入法19，以确定是否细胞中，其中移民法正在发生期间发生的任何扩散。选择迁移实验时间，以避免显著细胞增殖。 </li></ol> 8.可选<ol><li>为了评估显著细胞衰老是否发生如划痕过程的结果，搔抓19之后执行在测试板上的衰老相关的β-半乳糖苷酶测定在预定的时间。 </li></ol>

<ol>
	<li>Gough, W., Hulkower, K. I., Lynch, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+quantitative,+facile,+and+high-throughput+image-based+cell+migration+method+is+a+robust+alternative+to+the+scratch+assay.">A quantitative, facile, and high-throughput image-based cell migration method is a robust alternative to the scratch assay.</a> J. Biomol. Screen. 16 (2), 155-163 (2011).</li><li>Ridley, A. J., Schwartz, M. A., Burridge, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+migration:+integrating+signals+from+front+to+back.">Cell migration: integrating signals from front to back.</a> Science. 302 (5651), 1704-1709 (2013).</li><li>Sharma, R. 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Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+cell+sedimentation+on+measuring+chondrocyte+population+migration+using+a+Boyden+chamber.">The effect of cell sedimentation on measuring chondrocyte population migration using a Boyden chamber.</a> J. Theor. Biol. 261 (4), 610-625 (2009).</li><li>Fabbri, M., Bianchi, E., Fumagalli, L., Pardi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+lymphocyte+traffic+by+adhesion+molecules.">Regulation of lymphocyte traffic by adhesion molecules.</a> Inflamm. Res. 48 (5), 239-246 (1999).</li><li>Saez, A., Ghibaudo, M., Buguin, A., Silberzan, P., Ladoux, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rigidity-driven+growth+and+migration+of+epithelial+cells+on+microstructured+anisotropic+substrates.">Rigidity-driven growth and migration of epithelial cells on microstructured anisotropic substrates.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 104 (20), 8281-8286 (2007).</li><li>Paxson, J. A., Gruntman, A. M., Davis, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age+Dependence+of+Lung+Mesenchymal+Stromal+Cell+Dynamics+Following+Pneumonectomy.">Age Dependence of Lung Mesenchymal Stromal Cell Dynamics Following Pneumonectomy.</a> Stem Cells Dev. 22 (24), 3214-3225 (2013).</li><li>McQualter, J. L., Brouard, N., Williams, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endogenous+fibroblastic+progenitor+cells+in+the+adult+mouse+lung+are+highly+enriched+in+the+sca-1+positive+cell+fraction.">Endogenous fibroblastic progenitor cells in the adult mouse lung are highly enriched in the sca-1 positive cell fraction.</a> Stem Cells. 27 (3), 623-633 (2009).</li><li>Hoffman, A. M., Paxson, J. A., Mazan, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung-Derived+Mesenchymal+Stromal+Cell+Post-Transplantation+Survival,+Persistence,+Paracrine+Expression,+and+Repair+of+Elastase-Injured+Lung.">Lung-Derived Mesenchymal Stromal Cell Post-Transplantation Survival, Persistence, Paracrine Expression, and Repair of Elastase-Injured Lung.</a> Stem Cells Dev. 20 (10), 1779-1792 (2011).</li><li>Beane, O. S., Fonseca, V. C., Cooper, L. L., Koren, G., Darling, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+aging+on+the+regenerative+properties+of+bone+marrow-,+muscle-,+and+adipose-derived+mesenchymal+stem/stromal+cells.">Impact of aging on the regenerative properties of bone marrow-, muscle-, and adipose-derived mesenchymal stem/stromal cells.</a> PLoS One. 9 (12), e115963 (2014).</li><li>Chen, L., Ge, Q., Tjin, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+cigarette+smoke+extract+on+human+airway+smooth+muscle+cells+in+COPD.">Effects of cigarette smoke extract on human airway smooth muscle cells in COPD.</a> Eur. Respir. J. 44 (3), 634-646 (2014).</li><li>Itahana, K., Campisi, J., Dimri, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+to+detect+biomarkers+of+cellular+senescence:+the+senescence-associated+beta-galactosidase+assay.">Methods to detect biomarkers of cellular senescence: the senescence-associated beta-galactosidase assay.</a> Methods Mol. Biol. 371, 21-31 (2007).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

这里描述的协议提供了一个强大的定量，标准化的方法来执行和分析划痕试验。简单划痕测定法常规使用的在研究的许多不同领域，研究细胞迁移。然而，传统上的划痕试验一直缺乏标准化设置和定量协议，这已导致问题重复性7,10。许多的修改和优化用于提高划痕试验的减少这些问题，包括个人的活细胞成像，标准化塞为基础的测定，和三维微柱测定-4,8,10。但是，这些测定法可?...

细胞迁移是高度协调和至关重要的许多生理过程，如组织发育，修复和再生，以及病理过程，如癌症转移和动脉硬化1。细胞迁移的理解是特别相关的用于修复受损的组织和治疗的病理状态，包括细胞移植技术和人工组织嫁接2新兴疗法。鉴于间充质干细胞（MSCs）在介导组织修复3，用分析是严格计量的，适应性强，具有成本效益的感兴趣量化这些细胞的迁移能力的作用，目前的利息。重要的是，这样的测定必须是足够敏感的损害后，以检测在细胞迁移能力相对微妙的变化。目前的方法用于定量细胞的迁移，包括刮测定法，反式井迁移测定（Boyden小通道琥珀），微柱阵列，和细胞排除区检测具有一系列在再现性，可定制，量化，和成本效益-1,4,5-限制。此处所描述的优化划痕试验表明健壮的结果，量化的和基于图像的分析能力，成本效益，并适应其它应用。 划痕试验已被用于多种能力来评估不同的实验条件下5细胞迁移和增殖。该检测限嗣继承播种指定的细胞，他们成长，完成或接近汇合，和刮擦产生的单层用消毒针头或吸管尖6。是最常见的，在随机选择的位置7-9比较所述划痕在多个时间点的宽度进行分析。尽管其突出使用，划痕试验通过与重现性和定量的问题混淆。变异代划痕不仅改变细胞的微环境，而且还可以通过破坏该板面和底层的细胞外基质5阻碍细胞的迁移。测定是经常进行了超过7〜12小时，但对于细胞株显示较慢的迁移和更长的实验时间，增殖成为一个混杂变量7,10。最后，通过划痕过程中产生的衰老细胞中可以释放与缩小差距，在单层1所需的细胞外信令干扰因素。优化划痕测定需要创建一个一致的间隙不与表面性质干扰，减少分析时间长度，并防止操作过程中不希望的细胞死亡。止动基础的分析是小区排除区域测定的优化。该测定法利用塞子放置在排除细胞生长的孔的中间，但是允许细胞可围绕中心隔离区电镀。为了评估迁移，挡块被删除，并将所得排除区提供了用于迁移发生的表面。然而，该测定是困难的定制或调整10和对于一些应用，这种技术也可以成本过高。 在对比划痕测定和它们的衍生物，反-井迁移测定（或Boyden小室测定法）通过定量细胞移动从一个腔室的数目，通过微孔滤膜过滤，到含有趋化剂8,11的室评估迁移 ， 12。这种技术具有有限的效用为贴壁细胞如间充质干因为以下通过多孔膜的迁移，细胞粘附在膜侧暴露于趋化剂，并且可能很难准确量化。虽然检测是能够研究一些三维的迁移模式，受限制的细 ​​胞类型，这就是它能够准确量化细胞迁移限制其效用10。另一替代划伤试验采用了微柱阵列，它通过一个三维空间使用细胞变形并迁移到数组作为替代的能力测量细胞运动。聚二甲基硅氧烷（PDMS）弹性体固化过精密模具和用臭氧处理和纤连蛋白产生均匀和不可降解的微环境。根据需要，以评估细胞的进入阵列 4的能力的微柱间距也可以变化。模具是通过硅晶片的深反应离子蚀刻创建以创建高宽比阵列 13的负版本。虽然试验是由它的可定制性加强，能够通过细胞迁移的直接可视化模型的三维迁移和分析，难以产生微柱阵列在经济上阻碍了它的广泛使用。 在本协议中所描述的优化划痕试验提供了一个高效，COS叔有效的制造方法，可以使用免费提供的软件进行分析一致划痕。而不是之前和细胞迁移后，整个从头做起简单的宽度测量，该软件能够使用户在迁移前后测定总划伤的地方。这个前进限制了试图确定何处划痕宽度测量应采取的问题，以及是否划痕的宽度是沿着它的长度是均匀的。此外，细胞数，细胞融合和类型和损伤造成对细胞的程度的谨慎的优化，以便进一步优化测定法进行了讨论。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1143">
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:527px;">DMEM (high glucose, no added glutamine)</td>
			<td style="width:221px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:88px;">31053-036</td>
			<td style="width:307px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:527px;">Fetal Bovine Serum, Thermo Scientific HyClone</td>
			<td style="width:221px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:88px;">SH3091002</td>
			<td style="width:307px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:527px;">Antibiotic/antimycotic, Thermo Scientific HyClone&#160;</td>
			<td style="width:221px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:88px;">SV3007901</td>
			<td style="width:307px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:527px;">Glutamine, 200mM, Thermo Scientific HyClone</td>
			<td style="width:221px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:88px;">SH3003401</td>
			<td style="width:307px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:527px;">TypeLE cell dissociation reagent</td>
			<td style="width:221px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:88px;">12563-01</td>
			<td style="width:307px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:527px;">Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline, Thermo Scientific HyClone&#160;</td>
			<td style="width:221px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:88px;">SH3002802</td>
			<td style="width:307px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:527px;">Falcon standard 60mm tissue culture dishes</td>
			<td style="width:221px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:88px;">08-772B</td>
			<td style="width:307px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:527px;">Fisherbrand Sterile 200ul pipet tips</td>
			<td style="width:221px;">Fisher Scientific</td>
			<td>02-707-502</td>
			<td style="width:307px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:527px;">Inverted light microscope with camera attachment</td>
			<td style="width:221px;">Variable</td>
			<td style="width:88px;"></td>
			<td style="width:307px;"></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:527px;">ImageJ software&#160;</td>
			<td style="width:221px;">http://imagej.nih.gov/ij/</td>
			<td style="width:88px;"></td>
			<td style="width:307px;"></td>
		</tr>
		<tr height="85">
			<td height="85" style="height:85px;width:527px;">MRI_Wound_Healting plugin</td>
			<td style="width:221px;"><a href="http://dev.mri.cnrs.fr/projects/imagej-macros/wiki/Wound_Healing_Tool">http://dev.mri.cnrs.fr/projects/imagej-macros/wiki/Wound_Healing_Tool</a></td>
			<td style="width:88px;"></td>
			<td style="width:307px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:527px;">Statistical analysis software</td>
			<td style="width:221px;">Microsoft Excel</td>
			<td style="width:88px;"></td>
			<td style="width:307px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

optimization of the wound scratch assay to detect changes in murine mesenchymal stromal cell migration after damage by soluble cigarette smoke extract

Cell migration is vital to many physiological and pathological processes including tissue development, repair, and regeneration, cancer metastasis, and inflammatory responses. Given the current interest in the role of mesenchymal stromal cells in mediating tissue repair, we are interested in quantifying the migratory capacity of these cells, and understanding how migratory capacity may be altered after damage. Optimization of a rigorously quantitative migration assay that is both easy to customize and cost-effective to perform is key to answering questions concerning alterations in cell migration in response to various stimuli. Current methods for quantifying cell migration, including scratch assays, trans-well migration assays (Boyden chambers), micropillar arrays, and cell exclusion zone assays, possess a range of limitations in reproducibility, customizability, quantification, and cost-effectiveness. Despite its prominent use, the scratch assay is confounded by issues with reproducibility related to damage of the cell microenvironment, impediments to cell migration, influence of neighboring senescent cells, and cell proliferation, as well as lack of rigorous quantification. The optimized scratch assay described here demonstrates robust outcomes, quantifiable and image-based analysis capabilities, cost-effectiveness, and adaptability to other applications.

这里介绍的划痕试验用鼠肺间质居民基质细胞（LR-MSCS）进行，分离引用在协议中说明。在LR-MSCs的接种500,000个细胞在60毫米组织培养皿的密度，并在48小时生长至90％汇合。为了产生损害，4％CSE（如上所述）中的与细胞一起培养24小时后的初始播种期间，但在划痕试验前。对于每个测定，用200μl移液管尖端部中产生的划痕。最初的图像拍摄已产生的划痕后，任何松散的细胞和碎片已经被冲走完整的?...

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Optimization of the Wound Scratch Assay to Detect Changes in Murine Mesenchymal Stromal Cell Migration After Damage by Soluble Cigarette Smoke Extract

The capacity to migrate is a key function of many different cell types, including mesenchymal stromal cells (MSCs). However, quantifying alterations in migratory capacity after damage is challenging. This protocol describes an easily adaptable migration assay that uses rigorous statistics to quantify changes in MSC migratory capacity after damage.

伤口划痕试验的优化来探测在小鼠间充质干细胞迁移的可溶性香烟烟雾提取物受损后

Cell migration is vital to many physiological and pathological processes including tissue development, repair, and regeneration, cancer metastasis, and ...

optimization-wound-scratch-assay-to-detect-changes-murine-mesenchymal

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

16.8K 次观看.  College of the Holy Cross. The capacity to migrate is a key function of many different cell types, including mesenchymal stromal cells (MSCs). However, quantifying alterations in migratory capacity after damage is challenging. This protocol describes an easily adaptable migration assay that uses rigorous statistics to quantify changes in MSC migratory capacity after damage.

视频: Optimization of the Wound Scratch Assay to Detect Changes in Murine Mesenchymal Stromal Cell Migration After Damage by Soluble Cigarette Smoke Extract