新生儿初乳喂养前后离散催产素分泌脑核细胞应激与炎症的评估

这种方法可以帮助回答产后发展领域关于牛奶吸乳如何影响大脑中压力信号的关键问题。这种技术可用于在第一个自然饥饿期捕获特定的大脑区域，并将它们与第一次自然初乳喂养后不久的各区域进行比较。了解吸吮如何影响行为和情绪的生理，在外活脑组织分析期间，能够对各种受体使用拮抗剂。

为了获得核拳，用戴手套的手用尾巴把老鼠幼崽除掉。收获大脑后，在室温下迅速将整个器官放在聚甲基丙烯酸酯脑模中，并立即使用新的剃须刀刀片制作500微米厚的组织切片。将切片在培养皿中铺入烤盘，以保持各部分的正确方向。

当整个大脑被切开后，迅速将不含葡萄糖的人工脑脊髓液加入到盘中，并在28至30摄氏度下孵育切片60分钟，并在轨道摇床上不断搅拌。使用大脑图集和每个组织上的解剖地标来识别要打孔的脑核，并在解剖显微镜下将感兴趣的核与感兴趣的核放在新的培养皿中。可视化后，使用皮质工具快速冲出四到六个不同的核，并快速将每个冲孔核浸入 0.06 mL 的冰冷蛋白提取缓冲液中，在适当标记的微离心管中，含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂，60 分钟。

在孵化结束时，将提取的核在冷却的微型离心机中离心，并使用微移液器小心地将0.055 mL的上清液从每个管中转移到冰上适当的预冷却1.5 mL微型离心机管中。在负20摄氏度储存之前，将0.012 mL的上清液从每个蛋白质储存管转移到适当的0.5 mL冰上预冷却管中，进行第一次样品制备。要准备毛细管内蛋白质测量的样品，在 0.5 mL 标记管的每个样品中加入 0.003 mL 的蛋白质解菌试剂。

接下来，在0.016 mL的去电化水中将0.004 mL的主混合试剂加入生物素化分子量梯溶液中，并在95摄氏度的热块中使梯子和蛋白质提取物样品变性，5分钟后将所有管在4摄氏度内储存。在信号蛋白分析方面，将0.01 mL新鲜准备好的过氧化物溶液加入新型自动西板E-1至E-25，向D-2至D-25井添加0.01 mL二级抗小鼠抗体，并将0.01 mL的streptavidin马萝卜易腐酶从试剂盒添加到井D-1。将0.01 mL新鲜准备好的原抗体加入到C-2至C-25的井中，将0.01 mL抗体稀释剂两种溶液加入到B-25井中。

将 F 行井留空，用 0.45 mL 的洗涤缓冲液填充 F 行下方三行的五个隔间。接下来，将冷冻样品短暂旋转 30 秒，并将每个样品的 0.03 mL 添加到 A 行的每个井中，从 A-2 开始。然后，将0.005 mL的生物基化分子量梯添加到井 A-1中，并覆盖板进行离心。

当板离心时，在自动化的西方相关软件中打开一个新的运行文件，并启动分子尺寸测定。在测定页面中，将样本名称输入到每个毛细管中，以及初级抗体和二级抗体的名称。在离心结束时，将板放在自动西方仪器中，然后从毛细管盒中取出盖子。

离心后，不要忘记检查气泡，因为毛细管中的气泡会阻塞电泳电流，使整个圆都失效。将墨盒插入仪器内的指定位置并关闭车门。单击"开始"。

当提示检测类型时，在相应的文本框中输入实验的名称，然后单击"确定"。当由激活的运行日期和运行文件中的 ID 号提示时，记下运行结束时的时间。在运行结束时，将毛细管盒丢弃到利器处置中，将板放入生物危害材料处置中。

电泳分离后，检查40至43千吨抗原的免疫反应峰的运行文件，这些抗原代表磷酸化真核转化起始因子2A。如果缺少此大小的分子量峰值，请右键单击曲线下方，然后选择向峰值添加分子量，以确保记录曲线下方的大小和任意数量。在未基本组织样本中，与所有其他区域相比，单独轨道核中结合的氨基球蛋白水平要高得多。

用初乳培养的肠道组织进行吸气会降低单独轨道核中结合的氨球蛋白蛋白水平，对准星体核和超视核没有影响。相反，注发增加皮层内结合的氨基球蛋白蛋白水平，条纹核，和中位预视核相对于未原始组织，这意味着在各种测试的大脑核结合氨球蛋白蛋白水平对肠道刺激的反应不同，并且尚未发现任何测试的各种核之间的串扰。真核翻译起始因子2A和磷酸化真核翻译起始因子2A水平在非原始条件下相对于其他核升高。

启动后，与未基组织相比，真核翻译起始因子2A和磷酸化真核转化起始因子2A的水平相对于单独轨道的核降低。在所有其他测试的核中，注发增加真核翻译起始因子2A和磷酸化真核转化起始因子2A相对于未基质组织的水平。然而，与单独轨道核中未基质样品相比，非基质样品中磷酸化蛋白激酶受体水平较低，这强烈地表明，在真核转化起始因子2A的磷酸化中，另一个激酶也参与其中。

该技术开发后，为产后开发领域的研究人员探索组织生长和分化所涉及的信号通路，以及它们是否受吮吸的影响或独立于吸吮铺平了道路。不要忘记，使用挥发性还原剂（例如二次减性剂）可能很危险，在准备本程序时应始终采取预防措施，如化学罩中的制备。