脂多糖注射液致大鼠亚急性脑 Microhemorrhages

该方法有助于回答脑微出血领域的关键问题，如脑微出血的病因、分布、检测等。该技术的主要优点是LPS注射稳定诱导炎症。此外，LPS 喷射非常简单、经济且经济高效。

虽然这种方法可以提供脑出血诱导的见解，它也可以应用于其他脑部疾病，如抑郁症，精神分裂症，帕金森病，阿尔茨海默病，和普里昂病。以每公斤体重1毫克的剂量对10周大的雄性Sprague Dawley大鼠进行LPS注射，然后将每只大鼠返回到家庭笼子。6 小时 16 小时后重复 LPS 注射。

请注意，以每公斤1毫克的剂量注射SD大鼠可能导致5%的死亡率。年轻或年长的大鼠或怀孕雌性大鼠的死亡率可能进一步上升。LPS 注射后将大鼠返回到笼子，并提供食食物和饮料。

在末期麻醉下，对每只大鼠进行五到八毫米的深度心脏穿刺。在第三和第四个间空间处，刺破点应为胸骨左边缘五毫米。将针头握到位，用含有埃文斯蓝色管的管子更换空管。

等到血液恢复被观察，然后注射埃文斯蓝的剂量0.2毫升每100克的体重到左心室。如果通过免疫荧光成像评估埃文斯蓝漏通过血液/大脑屏障，请将大鼠保持10分钟的超供状态。使用冰冷 200 至 300 毫升 0.9% 盐水溶液进行心脏灌注，以清除脑血管和大脑。

切换到冰冷4%甲醛固定。然后，在隔离大脑后，在PBS中浸入20%蔗糖至少6个小时，或直到大脑沉入管底。将溶液更改为 30%蔗糖，再修复 6 小时。

最后，使用低温恒温器准备10毫米厚的脑组织部分。用 PBS 清洗幻灯片三次，每次五分钟，然后用 4，6'diamidino-2-苯酚或 DAPI 溶液在室温下孵育幻灯片 15 分钟。在 PBS 中像之前一样清洗幻灯片后，使用 PBS-甘油溶液安装幻灯片。

在荧光显微镜上捕捉图像。EB沉积用红色荧光表示，核用蓝色荧光表示。在蒸馏水中清洗滑梯，开始 H&E 染色。

然后浸入赤氧树脂溶液8分钟。或者，对于P应普鲁士蓝色染色，在反应溶液中染色，用铁氰化物和盐酸等件混合物10分钟。染色后，用自来水清洗五分钟。

在 1%酸醇中区分 30 秒。在自来水中洗涤1分钟后，在0.2%氨水或饱和碳酸锂溶液中染色30秒至1分钟。接下来，用自来水洗五分钟。

用 eosin 溶液防污 30 秒至 1 分钟。通过90%酒精脱水，然后95%酒精，绝对酒精每0.5至2分钟。脱水后，用二甲苯清除30秒。

安装后，使用亮场荧光显微镜分析 H&E 染色。从血管中释放的红血球是CCM的成分，在H&E染色下以红橙色出现。表面CCMH可以通过红色箭头指示的毛观测来检测。

埃文斯蓝色染色揭示了明显的红色荧光，其中埃文斯蓝色分子从受伤的血脑屏障泄漏。H&E染色显示毛细管外发现的红血球，普鲁士染色显示从红血球的解解中得出的铁离子点。在尝试此程序时，重要的是要记住，LPS 诱导脑微出血的剂量大于帕金森病或精神分裂症模型中使用的剂量。

因此，动物的环境应保持清洁，以降低死亡率。按照这个程序，可以执行电子显微镜、磁共振成像和免疫荧光成像等方法，以确定脑微出血中血脑屏障外层结构的损伤、体内脑微出血的分布以及胶质细胞活化。