因此，我们新技术的主要优点，我们把它称为E+E，它代表富集加膨胀，是我们可以同时丰富和扩展这些细胞，罕见的抗原特异性细胞。这使我们能够开发足够数量的细胞，我们将能够用它来调查它们在不同的设置和不同的临床环境中的作用，甚至允许我们现在开发大量的细胞，我们可以利用免疫治疗的方式，我们不能之前。我们开发的方法，这个E加E，可以帮助回答基本免疫学中关于新皮素存在的关键问题。
什么是新皮托佩斯？这些个性化表位，我们知道现在是非常重要的癌症免疫治疗和抗原特异性动力学，以及这些因素如何影响疾病状态和有效的细胞治疗。这种技术的影响延伸到免疫治疗，因为纳米粒子人工抗原呈现细胞可能是一种现成的产品，很容易为单个患者的免疫反应量身定做。
为了产生纳米粒子人工抗原呈现细胞，将冻干颗粒重新悬浮在一毫升的再悬浮缓冲液中，并大力涡旋悬浮液至少15分钟，直到没有聚集物可见。在与蛋白质发生反应之前，未充分涡旋和再悬浮的粒子将导致更大的聚合颗粒无法分离。将磁性颗粒放在磁性支架上，取出上经剂，然后用 0.5 毫升的新鲜再悬浮缓冲液重新悬浮。
将颗粒悬浮液转移到玻璃闪烁小瓶中进行涡流，直到没有聚集物可见，每一毫克重新悬浮的颗粒添加0.1毫克的总刺激信号。涡旋后，让悬浮液在室温下反应2.5小时，在旋转器中混合，然后加入0.1毫升淬火缓冲液，在室温下与混合混合，再孵育30分钟。在第二次反应结束时，将闪烁小瓶放在磁性支架上，将颗粒用一毫升的再悬浮缓冲液洗涤四次，每次洗涤后变清时取出缓冲液，并用新鲜的再悬浮缓冲液代替，以便随后对磁铁进行洗涤。
上次洗涤后，吸出溶液并去除磁性支架上的颗粒，然后在四摄氏度的新鲜再悬浮缓冲液中储存颗粒长达六个月。为了分离抗原特异性CD8+T细胞，通过一个无菌的70微米细胞过滤器，通过频繁的PBS冲洗，从野生C57黑色6J小鼠中分离出的血红细胞和淋巴结，并按照制造商的指示使用无接触CD8+T细胞隔离套件，以消除非CD8+T细胞。计数后，通过离心收集分离的CD8+T细胞，并在PBS的100微升中重新暂停颗粒，并辅以0.5%牛血清白蛋白和2毫摩尔EDTA， 然后用纳米粒子人工抗原呈现细胞孵育细胞，使11肽加载的MHC-ig有1倍10倍，10倍到第六分离的CD8+T细胞在无菌的，五毫升聚苯乙烯圆底管在四摄氏度下持续混合一小时。
在孵化结束时，如演示，在磁支架上三次清洗纳米粒子细胞悬浮液，在上次洗涤后用1%T细胞生长因子在500微升的新鲜、辅以的培养基中重新悬浮人工抗原呈现细胞和富集的CD8+T细胞。为了获得最大的细胞回收，将粒子和细胞留在磁柱上至少两分钟，并在不破坏受磁场影响的粒子和细胞的情况下小心吸气缓冲器至关重要。经过计数，种子2.5倍10至第五富集CD8+T细胞和磁性粒子混合物每160微升的补充介质加上1%TCGF在96井U底板。
第三天，用80微升补充培养的细胞每井2%T细胞生长因子喂养细胞，将板回细胞培养箱四天以上。在第七天，将受刺激的细胞收获成一个五毫升的圆底管，用于计数和通过离心收集细胞。将颗粒在0.5毫升PBS中补充0.05%的阿齐德钠和2%的胎儿牛血清进行计数，5倍至4至5倍，第五细胞放入新的5毫升圆底管中，用于抗原特异性染色。
用生物基化 MHC-ig 和抗小鼠 CD8a 标记适当的管，在 4 摄氏度下放置一小时， 然后在新鲜PBS中进行离心清洗，以去除任何多余的生物素化免疫球蛋白，然后用适当的链黄素结合二次抗体和适当的活死可修复死细胞菌株在4摄氏度下染色15分钟，并在流动细胞仪上读取细胞，根据标准协议确定抗原特异性CD8+T细胞的特异性和数量。在这里，使用三种不同的蛋白质附着在粒子上的方法实现了成功的蛋白质结合。如果APC配体密度过低，对抗原特异性CD8+T细胞不会进行有效刺激。
生物素化二丁车的质量控制可以在转基因CD8+T细胞上完成，以验证染色。例如，这些代表性的结果表明，gp100特异性CD8+T细胞的阳性染色与非抗原特异性b6 CD8+T细胞作为背景对照。此外，了解生物素化二丁胺的背景染色至关重要，因为任何百分比低于同源染色管中的这种染色率都应被视为负面结果。
经过七天的浓缩和扩张，从2倍10到第四和第二倍10到第五抗原特异性和5至50%CD8+T细胞可以预期从原来的5倍10到第六个内源CD8+T细胞起始群体。同样的方法可用于分离和刺激人类抗原特异性CD8+T细胞，在浓缩后仅一周后，观察到的抗原特异性CD8+T细胞的百分比和数量也类似增加。在尝试此过程时，必须记住执行相应的试剂质量检查，如前所述。
按照这个程序，其他方法，如流细胞学细胞内细胞因子染色或表面蛋白质表达可以执行，以回答有关细胞的功能或表型的其他问题。这项技术为基础免疫学领域的研究人员探索其他生物医学领域（如癌症、传染病或自身免疫研究）抗原特异性反应的广度、深度和动力学铺平了道路。
