聚乙胺包覆氧化铁纳米粒子作为载体, 在体外和体内向巨噬细胞输送小干扰 rna

这项措施可以帮助回答关键问题。在人文领域。这个答案在巨噬细胞在生理端的功能下到病理条件。

该技术的主要优点是聚乙烯胺涂层可以有效地在体外，而不影响细胞。在最佳剂量下。该技术的含义扩展到许多慢性炎症性疾病和癌症的治疗和诊断。

巨噬细胞在发病机制中起着至关重要的作用。演示程序将是娜佳。我实验室的研究生

和王开轩是肖华博士实验室的研究生。准备联盟酸改性超级顺磁氧化铁纳米粒子或SPION首次添加28克法拉斯氯化六水合物。和20克法司自酸补液到烧杯含有80毫升的去维水。

并使用玻璃导管将氮气引入溶液中。搅拌，直到固体物质溶解。将反应混合物加热至72摄氏度，每分钟搅拌800度。

并在烧杯中加入40毫升28%氨水。五分钟后加入九毫升的联盟酸滴明智。并保持混合物在72摄氏度连续搅拌三个小时。

在孵育结束时，将产生的溶液冷却至室温。根据标准协议，通过磁分离沉淀混合物。然后用绝对乙醇洗涤含有沉淀物的SPION三次。

并在100毫升的n-十六烷中刺激沉淀物。准备一毛钱卡普托丙烯酸改性SPION的添加800毫克的联盟酸修改SPION的。分散在200毫升的n-hexane和400毫克的甲壳酸分散在200毫升丙酮分散到三颈烧瓶在60摄氏度的水浴。

接下来，在烧瓶中加入200微升的三乙胺滴法，每分钟搅拌1000次，回流。黑色沉淀物可以在五小时后通过磁分离获得。然后使用四甲酰氢氧化氢基调整溶液的pHH，使脱毒水中的亲水SPION的均匀分散。

除型聚乙烯胺涂层SPION的添加一毛甲酸改性SPION的胶体溶液下降到10千吨聚乙烯胺溶液明智。在500毫升三颈烧瓶的机械搅拌下，每分钟旋转1000次，旋转两个小时。在孵化结束时，将产生的溶液加入到超过滤管中，其分子量可减少100千吨，含量为15毫升。

将样品中分，直到剩余溶液达到一毫升体积。将去维水加入溶液中，使体积回到15毫升。和中注入和补水解决方案十倍，刚才证明。

然后通过 22 微米过滤器过滤溶液，在 4 摄氏度下储存。为了准备siRNA纳米粒子，首先将3微升新鲜准备好的20微摩尔siRNA溶液添加到5个标有RNA的免费微中心熔融管中。并将聚乙烯素SPION的0、8、1.6、3.2和6.4微克分别添加到标有零、1、2、4和8的管中。

与温和移液混合后，在室温下孵育样品30分钟，使聚乙烯胺SPION siRNA复合物形成。并准备一个百分之三的阿加罗斯凝胶与我纯度的阿加罗斯。在孵育结束时，每5微升样品添加一个微升6XDNA加载缓冲液，并仔细混合。

然后将所有样品加载到凝胶上。以每厘米五伏运行电泳。直到布罗莫酚蓝色染料迁移三分之二的长度在凝胶上。

转染前一天用PBS清洗像RAF264.7细胞培养的小鼠微噬细胞。在37摄氏度的37摄氏度下，用1毫升25%的三丁辛治疗细胞，在5%的二氧化碳培养箱中。当大多数单元格分离时。

用五毫升的完整 DMEN 灭活。然后多次对溶液进行点状，以分散任何细胞簇。将细胞悬浮液转移到无菌的15毫升锥形管中进行离心。

然后重新悬浮在五毫升新鲜完整的DMEN细胞计数。稀释细胞到4.5倍10至第四细胞每毫升完整的DMEN浓度。并在六井板的每个井中加入两毫升的培养，在细胞培养箱中24小时孵化。

第二天，在1.5毫升RNA流微离心管中，用温和的混合，准备适当的聚乙烯胺SPION siRNA纳米粒子的比例。并将适当的聚乙烯胺SPION siRNA纳米颗粒复合物添加到每口已用一毫升新鲜介质取代的井中。准备聚乙烯胺SPION si复合物。

在这种情况下，可以使用多个月的聚乙烯胺SPION，从而最大限度地降低其潜在的毒性。然后小心地旋转板，实现纳米粒子在井底的均匀分布。将板返回细胞培养箱，直到随后的细胞更新或基因敲解缺乏分析。

聚乙烯胺SPION的Zeta电位为30.5和37毫伏，每毫升铁浓度高达30微克，不表现出明显的细胞毒性。这是大约两个折叠雇用比浓度通常用于细胞转染。然而，聚乙烯矿SPION的48毫伏的泽塔电位是有毒的。

即使在检查的最低剂量。根据流式细胞学分析，超过90%的细胞可以以每毫升15微克的铁转染荧光标记聚乙烯胺SPION siRNA复合物。通过粉碎蓝色染色，评估聚乙烯聚乙烯SPION siRNA浓度对细胞内化的影响，可发现每毫升7.5微克铁的可检测染色量最低。

但是，由于聚乙烯胺SPION siRNA吸收饱和，每毫升15微克铁的斑点在较高的铁浓度下不会增加。与非特异性siRNA相比，与聚乙烯胺SPION的窝藏特异性siRNA相染的食管巨噬细胞，其焦油mRNA水平显著降低。建议siRNA可以从内分泌囊泡逃入细胞质，到达RNA干扰机制。

进一步，在静脉注射单剂量聚乙烯胺SPION siRNA纳米粒子复合物的CD11b阳性和CD3阳性细胞的絮体分析后，显示CD11b表达巨噬细胞比CD3阳性细胞在任何时间点所检查的CD3阳性细胞更有效地吸收纳米粒子。在尝试此过程时，必须记住以不高于 37 毫伏的平均数据电位准备聚乙烯胺 SPION，并在低铁与 siRNA 比率上准备聚乙烯胺 SPION siRNA 复合物。这项技术比较了研究人员在人类疾病（如癌症和癌症）的动物马达中寻找靶心巨噬细胞的治疗潜力的需要。