此方法有助于回答爆炸创伤性脑损伤是否导致脑血管损伤,以及其影响范围是否延伸到受损的 myogenic 血管反应。孤立的加压动脉制剂使我们能够将爆炸暴露对脑动脉的直接影响与爆炸暴露给大脑造成的间接影响分开。分离和加压动脉制剂可用于研究各种疾病或条件下的血管功能,包括中风、高血压,然后是糖尿病。
我们研究的目标是确定保持大脑循环能力,保护大脑免受出血的有害影响的疗法。今天演示程序的将是我们实验室的助理主任玛吉·帕斯利和我们的主要研究技术员曾亚平。要准备高级爆破模拟器(ABS),请使用 2.54 厘米的遮蔽胶带,沿四块堆叠预切割 Mylar 纸张的顶缘进行胶带处理。
使用第二根胶带,将 Mylar 膜的顶部边缘固定到扩展室的顶部,在驾驶员和膨胀室之间的开口中心。更换腔室顶部的两根全螺纹杆,并手动拧紧腔室周围的所有盖螺母,以将驾驶员室固定到 Mylar 膜上。拧紧液压手泵旋钮,并在液压仪表上观察恒定压力阈值,以确认驾驶员室保持加压,无泄漏。
然后打开在 ABS 爆炸设备计算机上记录 ABS 爆炸设备压力痕迹的触发器采集文件。要准备麻醉鼠的伤害,使用长拾取钳子将舌头定位到一侧,然后用利多卡因浸泡的棉签尖擦拭喉咙内侧,然后轻轻地将含有气管的样式插入气管。插管后,将呼吸机软管的末端插入内气管的外端,观察并确认大鼠呼吸稳定且无困难。
接下来,从试样室中取出 ABS 试样托盘,并在热灯下加热托盘。当托盘加热时,将头皮顶部从眼睛上方剃到耳朵之间,然后用剪刀将标准大小的泡沫耳塞从底座切割成相同的垂直半身。然后在每个耳塞上插入一块半片,首先沿着耳道,直到与鼓膜接触。
从气管中取出呼吸机软管,快速但轻轻地将大鼠滑入试样托盘的顶端,小心地通过头架开口和橡胶圈引导头部。当大鼠就位时,将呼吸机软管重新插入气管内气管,并验证橡胶圈是否牢固固定,但不会紧贴在颈部,并且大鼠处于横向容易的位置。然后锁定并固定包含麻醉大鼠的 ABS 试样托盘,然后每三秒钟用长钳子轻轻捏住后爪脚趾,直到引起戒断反射反应。
单击 ABS 爆炸设备计算机上打开的采集页面,按住采集窗口中的 ABS 爆炸装置触发器,直到爆炸熄火,损坏 Mylar 膜并管理 ABS 爆炸伤害。爆炸引爆后,启动第二个计时器,跟踪在分钟和秒内经过多少时间,直到大鼠权利本身,受伤后,并放置大鼠在蓝色垫上的上位和加热评估额定反射抑制。要提取中脑动脉,使用数字10手术刀刀片,使中央1英寸半的垂直骨深切口从剃光的头皮的顶部到腹骨,并使用小骨冠打开和分离头皮皮肤从头骨骨。
使用大骨骨,切开并提取环绕大脑的腹骨、腹间和下半部分,并使用手术铲从头骨中小心地挖掘大脑,一旦它被释放出周围的骨骼。将收获的大脑放入含有冷冻生理盐溶液(PSS)的小玻璃培养皿中,放在解剖显微镜下的固体冰块上,小心地取出左右中脑动脉或 MCA,从威利斯的圆开始,横向和剂量持续约四到五毫米。使用微钳轻轻清洁收集的 MCA 段,然后将动脉安装到动脉仪上。
用玻璃、直径 70 微米微管的玻璃将每个段的近端固定,用 10-O 尼龙缝合线固定移液器。用 PSS 轻柔地将发光体注入,以去除任何残留的血液,并用第二个微移子将每个片段的端端拉好,而无需拉伸动脉组织。用第二套 10-O 尼龙缝合线固定微管,将动脉图放在装有摄像头和监视器的倒置显微镜的舞台上。
将连接到微管的储液罐瓶提升至各段上方的适当高度,以 50 毫米汞的压力将 MCA 段平衡 60 分钟。在平衡期结束时,将瓶子设置在不同高度,以检查容器的膨胀反应,降低储液罐瓶,将血管内压力降低至80毫米汞,并允许各段平衡10分钟。然后,将血管内压力降低至 60、40 和 20 毫米汞,使各段在每次压力变化后平衡。
在此代表性图中,在 Y 轴上将动脉直径描述为在 100 毫米汞的基线压力下直径的百分比变化。在X轴上,显示了测试动脉扩张反应的不同血管内压力。对于假伤害组,MCA 直径高于基线,并且随着宫内压力从 100 毫米降低到 20 毫米汞而继续正常扩张。
相比之下,MCA对观察到的30分钟和60分钟爆炸引起的创伤性脑损伤组血管内压力持续降低的拖延反应在爆炸暴露后明显降低扩张能力,表明脑血管扩张反应对降低压力有显著损害。容器的提取、回收、安装和大量技术极其复杂,执行这些程序时应尽一切努力进行精确护理。