Этот метод помогает ответить ли взрывная черепно-мозговая травма приводит к повреждению сосудов головного мозга, и если масштабы эффектов распространяется на нарушение миогенной сосудистой реакции. Изолированная артериальная подготовка под давлением позволяет отделить прямое воздействие взрыва на мозговые артерии от косвенных эффектов, вызванных воздействием взрыва на мозг. Изолированные и под давлением артериальные препараты могут быть использованы для изучения сосудистой функции при различных заболеваниях или состояниях, включая инсульт, гипертонию, а затем диабет.
Целью наших исследований является выявление методов лечения, которые поддерживают способность мозгового кровообращения для защиты мозга от пагубных последствий кровоизлияния. Демонстрация процедур сегодня будет Мэгги Петрушка, помощник директора нашей лаборатории и Yaping Цзэн, наш главный научный техник. Чтобы подготовить передовой симулятор взрыва, или ABS, используйте 2,54-сантиметровый кусок маскировочной ленты, чтобы лента вдоль верхнего края четырех сложенных предварительно вырезать Mylar листов.
Используя второй кусок ленты, закреполном верхний край мембраны Mylar к верхней части камеры расширения над центром отверстия между драйвером и расширение камер. Замените два все-нить стержней в верхней части камеры и руки затянуть все крышки орехи, окружающие камеру, чтобы обеспечить камеру водителя против мембраны Mylar. Затяните гидравлическую ручку ручного насоса и соблюдайте постоянный порог давления на гидравлическом датчике, чтобы подтвердить, что камера водителя остается под давлением без утечек.
Затем откройте файл приобретения триггера, который записывает следы давления взрывного устройства ABS на компьютере взрывного устройства ABS. Для подготовки анестезированным крысы для травмы, использовать длинный пикап пинцетом, чтобы распоставить язык в сторону и протрите вдоль внутренней части горла с лидокаин пропитанной ватным тампоном кончиком, прежде чем аккуратно вставить stylette содержащие эндотрахеа трубки в трахею. После интубата вставьте конец вентиляционажного шланга на внешний конец эндотрахеальной трубки и наблюдайте и подтверждайте, что крыса дышит стабильно и без затруднений.
Затем удалите лоток образца ABS из камеры образца и подогрейте лоток под тепловой лампой. В то время как лоток нагревается, брить верхнюю часть кожи головы сверху глаза между ушами и использовать ножницы, чтобы сократить стандартного размера пены затычки для ушей от основания до округлые кончика в идентичные вертикальные половинки. Затем вставьте пополам кусок в каждый кончик уха, сначала вдоль ушного канала, пока контакт не будет сделан с барабанной перепонкой.
Удаление вентилятора шланг из эндотрахеальной трубки, быстро, но осторожно слайд крысы в верхнем конце образца лоток, тщательно направляя голову через голову держатель открытия и резиновый воротник. Когда крыса на месте, повторно заведив вентиляционный шланг обратно в эндотрахеален трубки и убедитесь, что резиновый воротник закреплен твердо, но не плотно вокруг шеи, и что крыса лежит в боковом положении склонны. Затем запирайте и закрепните лоток образца ABS, содержащий анестезированные крысы, в камеру образца ABS и аккуратно защипните задние лапы длинными пинцетами каждые три секунды до получения рефлекторной реакции вывода.
Нажмите Начало на открытой странице приобретения на компьютере взрывного устройства ABS и нажмите и удерживайте abs взрывной спусковой крючок устройства в окне приобретения, пока взрыв не срабатывает, разрыв мембраны Mylar и администрирование ABS взрыв травмы. Сразу после взрыва взрывается, начать второй таймер, чтобы отслеживать, сколько времени проходит в минутах и секундах, пока крыса права себя, после травмы, и место крысы в положении на спине на синей площадке и потепление для оценки рейтинга рефлекторного подавления. Чтобы извлечь среднюю мозговую артерию, используйте лезвие скальпеля номер 10, чтобы сделать центральный полуторадюймовый вертикальный костно-глубокий разрез от верхней части бритой кожи головы до затылочной конды и использовать небольшие костные rongeurs, чтобы открыть и отделить кожу головы от кости черепа.
Используя большие костные rongeurs, вырезать и извлечь затылочной, межпариетальной, и нижняя половина лобных костей, заключенных в мозг и использовать хирургический шпатель тщательно раскопать мозг из черепа, как только он был освобожден от окружающей кости. Депозит собранного мозга в небольшой стакан Петри блюдо, содержащее охлажденный физиологический раствор соли, или PSS, на твердой ледяной глыме под рассекающий микроскоп, и тщательно удалить как левые и правые средние мозговые артерии, или MCAs, начиная с круга Уиллис и продолжается боково и dorsally в течение примерно четырех-пяти миллиметров. Используйте микро-типсы, чтобы аккуратно очистить собранные сегменты MCA и смонтировать артерии на артериограф.
Cannulate проксимальный конец каждого сегмента со стеклом, 70 микрометрового диаметра micropipette и обеспечить пипетки с 10-O нейлоновых швов. Мягко пронизыть люмину с PSS, чтобы удалить остатки крови и cannulate дистальный конец каждого сегмента со вторым микропипютом без растяжения артериальной ткани. Закрепите микропипеты вторым набором из 10-O нейлоновых швов и поместите артериограф на сцену перевернутого микроскопа, оснащенного камерой и монитором.
Поднимите бутылки резервуара, подключенные к микропайптам, до соответствующей высоты над сегментами, чтобы уравночные сегменты MCA под давлением 50 миллиметров ртути в течение 60 минут. В конце периода эквилибрации установите бутылки на разных высотах друг к другу, чтобы изучить сосуд расширитетельные реакции, опустите бутылки резервуара, чтобы снизить внутрисосудистое давление до 80 миллиметров ртути и позволить сегментам уравночные в течение 10 минут. Затем уменьшите внутрисосудийное давление до 60, 40 и 20 миллиметров ртутного столба, что позволит сегментам уравночные после каждого изменения давления.
На этом репрезентативном графике диаметр артерии изображен на оси Y как процентное изменение диаметра при базовом давлении 100 миллиметров ртути. На Х-оси показаны различные внутрисосудистые давления, при которых были проверены артериальные реакции. Для группы фиктивных травм диаметры MCA увеличились выше базового уровня и продолжали нормально расти по мере снижения внутрисветового давления со 100 до 20 миллиметров ртути.
В отличие от этого, MCA расширенные ответы на непрерывное введенное снижение внутрисосудистого давления в наблюдаемых 30 и 60 минут взрывных групп черепно-мозговой травмы были значительно снижены в их способности к расширяются после взрыва воздействия, что свидетельствует о значительном нарушении церебральных сосудорасширяющих ответов на снижение давления. Методы извлечения, восстановления, монтажа и изобилия сосудов чрезвычайно сложны, и при выполнении этих процедур следует принимать все усилия по точному уходу.
