早产儿和足月婴儿脐带源性间充质干细胞的分离与鉴定

该方法可以帮助回答在UCMSC的审议关键问题，如细胞治疗的MSSC的最佳来源。该技术的主要优点是，它使 UCMSC 与早产儿和早产儿保持一致隔离和剧烈增殖。这项技术的影响延伸到治疗棘手的疾病。

虽然这种方法可以深入了解UCMSC的考虑，它也可以应用于其他MSC来源，如脂肪组织，合成，皮肤，牙髓等。一般来说，一个对这种方法的新鲜人将挣扎，因为脐带解剖和中质干细胞分离的步骤存在很多变化。此方法的可视化演示至关重要，因为这些步骤很难学习，因为有几个点容易被忽视。

要开始解剖脐带，首先准备一个金属托盘、消毒剪刀和钳子、10毫升移液器、25毫升移液器和两个 60 毫米组织培养盘。预热PBS纯化酶混合物，500毫升的血清介质和培养基，到室温。从 Alpha MEM 中 50 毫升的管中取出以前隔离的脐带，并将其放在塑料托盘中。

称量脐带，然后用消毒剪刀解剖五克脐带。要对脐带进行消毒，请使用十毫升移液器将十毫升的七成乙醇倒入脐带上。然后用十毫升移液器加入十毫升PBS，洗两次电源线。

将洗净的脐带放在消毒的60毫米组织培养皿中，加入10毫升减少血清介质和0.5毫升纯化酶混合物。使用消毒剪刀和钳子将电源线切成两到三毫米。将菜放在5%的二氧化碳培养箱中，在37摄氏度下孵育30分钟。

然后将部分消化的碎片切成小块，在37摄氏度的20%二氧化碳培养箱中孵育，直到同质物变得粘稠。最后，确保均质容易流经25毫升移液器。首先在500毫升的培养培养剂中准备四个50毫升塑料管。

使用 25 毫升移液器将脐带均质分割成两个 50 毫升塑料管，每个管中约有 7.5 毫升。然后在每个管中加入20毫升培养培养剂，并混合好。使用 25 毫升移液器收集每个均质，并通过放置在新 50 毫升收集管顶部的 100 微米细胞过滤器进行过滤。

在室温下将两管带滤金的管子在1000克下离心5分钟。离心完成后，小心吸上经并丢弃。在每个管中加入五毫升培养培养，并重新悬浮细胞颗粒。

将细胞悬浮液转移到一个新的60毫米板中，并在5%的二氧化碳培养箱中培养在37摄氏度的温度下。培养 UCMSC 的，将 PBS、trypsin EDTA 和培养介质加热到室温。当细胞附着在盘子上时，取出介质，用五毫升PBS洗涤两次，以清除碎屑和红血球。

加入培养基，在37摄氏度的二氧化碳培养箱中孵育。每周更换两次培养细胞，直到细胞达到90%至100%的汇合。然后用五毫升PBS洗两次细胞，加入0.5毫升的尝试素EDTA，并在37摄氏度下孵育5至10分钟。

当细胞变得圆润和分离时，加入九毫升培养培养，并很好地混合到灭活的尝试中。将电池悬浮液添加到新的 100 毫米板中。在37摄氏度的二氧化碳培养箱中生长细胞，直到达到90%至100%的汇合。

重复三辛化，并分成两个新板，直到第十通道。UCMSC的表面标记表达式被用作其表征的标准。当用适当的抗体孵育并经流细胞测定分析时，发现MSC的特征标记呈阳性，但对单细胞巨噬细胞呈阴性，对血囊干细胞和环氧细胞呈阴性，对B细胞为阴性，对泛白细胞呈阴性，对主要组相性复合标记物呈阴性。

为了评估美国CMSC的分科分化能力，从早产儿和早产儿，诱导细胞分化成脂肪细胞，骨细胞和软细胞。UCMSC成功地分化成所有三种类型的中皮细胞，证实了它们的分化能力。在尝试此过程时，重要的是要记住有四个关键步骤。

将线切成两到三厘米，切成更小的碎片，确保同质质容易通过25毫升移液器流动，并通过100微米细胞滤片过滤均质。