古树康 (GSK) 颗粒的制备,用于 Vivo 和体外实验

该协议为体内研究提供了颗粒的工作溶液，以及用于体外实验的含颗粒血清的制备。该技术的一个优点是，由于材料成本低，为实验创造的动物成本低，该方法很容易重复。首先向单个50毫升管中加入8、16和24克G古仓（或葛兰水/地王）颗粒。

在每个管中加入48毫升的水，并摇动管子以完全溶解颗粒。然后，将1.6片补充维生素D3的碳酸钙放入另一个50毫升的管中，然后用震动将片剂溶解在48毫升的盐水中。对于胃内给给的溶液，首先轻轻而牢固地手动约束一个月大，女性，C57黑6鼠标两到三分钟。

当鼠标平静下来后，用0.24毫升的葛口针装上一个0.24毫升的葛子，然后通过嘴的一侧将加夫针放入小鼠，直到感觉到针头的阻力，表明针头已经到达胃部。将整个工作溶液的体积注入动物。然后，收回格瓦奇针，将鼠标返回到其笼子，而其他小鼠正在服用葛兰素史克，然后以相同方式向每只小鼠注射0.24毫升碳酸钙和维生素D3溶液。

对于含葛兰素史克的血清采集，在将适当浓度的葛兰素史克（GSK）交付给大鼠后，如刚刚证明的，在上次葛兰素史克颗粒给药后一小时，确认对手趾捏缺乏反应。做一个腹部皮肤和腹腔切口，并暴露腹部到胸部的底部。使用纸巾去除腹部主动脉的结缔组织以清楚地暴露血管，并使用装有 22 量针的 10 毫升注射器从主动脉中抽血。

将血液转移到无菌的15毫升管中，并在室温下直立放置管30至60分钟。当血液凝固时，将管子离心分离出血清，并转移多达六只大鼠的所有血清到新的50毫升管中。在56摄氏度的水浴中，在56摄氏度的水浴中分离血清成分之前，摇动管子混合血清，30分钟。

然后，通过0.22微米大小的亲水多聚酯硫酮注射器过滤器过滤血清，在零下80摄氏度下储存长达一年。对于体外骨质疏松发生，稀释三个剂量的含葛兰素史克血清在一比四的比例与最小的鹰的介质补充L-谷氨酰胺，核糖核酸，和脱氧核糖核酸。在96井的盘子里，将每根稀释的200微升加入骨髓巨噬细胞培养的每个井中。

然后，通过用巨噬细胞聚落刺激因子和受体活化剂刺激每一个井来刺激骨细胞最后生成，以进行核因子-卡帕B配体。对于体外骨细胞生成，在24井板骨细胞细胞培养的每个井中加入两毫升含有含葛兰素史克的稀释血清。微计算断层扫描结果表明，与盐碱对照小鼠相比，奥瓦化小鼠的骨质流失显著。

90天的葛兰素史克颗粒治疗干预可大大提高骨髓密度，特别是在中剂量葛兰素史克治疗的动物中。葛兰素史克颗粒治疗还导致骨质增加，骨量超过总体积，和眼骨厚度，但骨骨分离减少。与对照动物相比，耐酸磷酸酶（TRAP）染色表明，与对照动物相比，奥瓦里切除小鼠的骨细胞数量增加，而葛兰素史克颗粒治疗则减少 TRAP阳性骨质分化。

与从对照动物收集的血清相比，含葛兰素史克含颗粒血清也减少了 TRAP 阳性骨细胞数。针头成功渗透到腹部主动脉对于保证从每只大鼠中采集足够量的血液至关重要。这种方法的成功执行应分配15至20毫米的血液积累，足够的材料用于体外实验。