中通量筛选法评估对精子中 ca^{2 +}信号和反应的影响

我们的测定可用于测试化合物对人类精子细胞功能的影响。具体来说，这些方法可用于快速轻松地筛选大量化合物，以发现它们对钙信号和人类精子细胞中的杂技反应的影响。此方法的可视化演示将使其他人更容易在他们自己的实验室中设置类似的实验。

首先，以45度角将每毫升原精液样本放入一个50毫升的管，并在每个管中加入4毫升37摄氏度的人体管状液或HTF正介质。接下来，小心地将一毫升液化精液样品移液到每个管的底部，并在37摄氏度下放置管子一小时。在孵育结束时，使用以45度角保持的改性移液器尖端，将尽可能多的含有HTF阳性介质的动量精子细胞的上部部分转移到一个新的15毫升塑料管中。

要计算收集的精子细胞，根据预期浓度在S100缓冲液中稀释20微升等分至10、20、30、50或90的因子。以每分钟700次旋转的速度旋转稀释的精子细胞10秒。接下来，将 SP1 盒式磁带浸入样品中，完全压沉式白色柱塞，将样品的等分盒吸进盒式磁带中。

然后将盒式磁带放在图像细胞仪托盘中，根据应用的稀释因子运行PI染色的人类精子细胞测定。要测量自由细胞内钙浓度的变化，轻轻移液精子样品上下一次，并使用自动中继移液器将50微升的荧光染色精子细胞分给24孔的384微井板。将微井板放在荧光板读卡器中，温度为30摄氏度，并选择氟磷的适当方案。

在精子细胞行中选择一个井，将增益调整为20%的目标值，然后开始测量。经过 10 个基线循环后，暂停实验，然后用微井板弹出抽屉。使用 12 通道移液器，快速将 25 微升的化合物和兴趣控制溶液添加到行中的 12 个重复孔中，并立即将板返回给读卡器，以尽快继续测量。

仪器将捕获荧光对添加化合物或控制装置的反应。对于杂技反应分析，在将电容化精子细胞与适当的荧光染料、化合物或对照组孵育后，通过移液混合样品，并将每个测试样品的50微升添加到100微升的固定溶液中。再次混合样品，将每个样品的一个 A2 幻灯片室与每个样品约 30 微升样品混合。

然后将第一个加载的幻灯片放在图像圆度计的托盘上。选择 FlexiCyte 协议，然后按"运行"。这里具有代表性的实验结果，测试了四种化合物的效果，一个正黄体酮控制和负缓冲液控制使用中通量钙信号测定，证明可以观察到。

在此图中，显示了由连续稀释的黄体酮浓度引起的细胞内自由钙浓度的峰值百分比变化的黄体酮的剂量响应曲线。这些数据说明了一个负效或两种阳性对诱导在中等通量杂技反应测定中使人精子细胞中杂技反应的影响。为了避免错过感应信号的峰值，必须快速将化学品添加到复制井中，并在之后立即继续测量。

通过改变荧光和染料的类型，我们的测定可以很容易地被修改，以回答不同的科学问题。这些分析已经用于几个研究，以测试一大组化合物，以影响人类精子功能。