使用小鼠化疗引起的粘炎模型评估小肠损伤和适应的重要端点和增殖标记

这种化疗引起的粘膜炎模型可用于确定小鼠小肠损伤和补偿性增殖的重要终点和增殖标记。该方法具有时、成本、易执行性。使用这样的标准化方法，可以更轻松地比较分析终结点，但变化很少。

对于 5-Florauracil 或 5FU 粘膜炎诱导，将装有 27 量表的 17 米针装上 17 个 19 毫米针，适当体积为 5FU，并手动抑制接收小鼠。同时保持鼠标在一个坚定但温和的抓地力，暴露动物的腹侧，并插入针到腹部的下一个象限内的内皮腔。然后，吸气，以确保正确的针头放置和注射5FU。

在适当的实验终点，4-Bromo-脱氧核糖核酸或BrdU定量，称一只5FU受伤的动物小鼠，并在烟罩中通过内程酮注射每公斤5毫克BrdU。BrdU injetion 后 150 分钟，确认对手趾捏没有反应，记录麻醉小鼠的重量，并将动物放在上角位置。进行腹腔切除术，露出腹腔，切开胸腔，引入肺气管。

切出优于皮洛鲁斯，并小心地从动物身上提取肠组织，直到达到切库姆。使用钳子，轻轻夹住近端流明关闭，并使用配备 25 量针的 10 毫升注射器用盐水冲洗小肠。然后将排空的肠子放在干净的印迹纸上，小心地去除多余的盐溶液。

对于组织收集，从注射的动物收获小肠，正如刚刚演示的，并记录冲洗组织的重量。经过组织学处理后，可以在连接到相机的光显微镜的10倍目标下对组织进行成像，以获得收获组织的组织学照片。要测量BrdU免疫反应细胞的面积，打开图像J中感兴趣的图像，并打开舞台微米图像。

使用直线选择工具在千分尺图像上绘制直线，以定义已知距离，并在分析菜单中选择设置比例。在已知距离框中输入一个值，并在长度框中定义长度单位。打开感兴趣的图像以测量每个墓穴的 BrdU 免疫反应细胞面积，并在图像类型菜单下将彩色图形设置为 8 位。

在过程增强的对比度下增加图像的对比度，将饱和像素设置为 0.4% 对图像应用阈值以分割免疫正向并选择图像调整。选择阈值和红色，移动阈值栏以选择大约 10% 到 20% 的阈值。然后选择一个面向良好的墓穴，并使用徒手选择工具标记它周围的区域。

要测量阈值区域，请打开分析选项卡并选择分析粒子。在分析粒子窗口中，将大小设置为 20 到无穷大，然后单击框像素单位。将循环设置为零，将"显示"设置为轮廓。

然后单击显示结果，总结并包括孔框。测量结果将显示在摘要窗口中。要测量墓穴深度，请打开 Zen Light 中的图像并连接到相机。

以 20 倍目标在相机模式下拍摄快照，然后切换到处理模式以打开快照。切换到度量值视图。使用线条工具在面向良好的墓穴底部开始一条线，完成墓穴顶部的线条。

然后导出测量值并计算墓穴深度的平均值，并填充为高度。小肠重量从第2天到第4天减少，表明肠细胞质量下降。请注意，第5天，受治疗动物的体重与第0天的体重没有显著差异。

BrdU公司所测得的增殖在第1天和第2天几乎被废除，但在第4天和第5天，其扩散量分别增加了大约4倍和5倍。在测量墓穴深度时，也会观察到这种高扩散。在粘膜炎的再生阶段，BrdU合并和在急性期未观察到的墓穴深度之间有很强的相关性，这表明使用墓穴深度作为终点可能适合粘膜炎的急性期。

与野生5-FU型小鼠相比，L细胞分泌不足的转基因小鼠在恢复阶段体重显著下降，小肠体重下降。此外，转基因小鼠没有表现出补偿性高扩散，因为墓穴明显短于野生型小鼠和健康对子。在尝试此程序时，请确保完全排空小肠，并在称量组织之前去除多余的盐水，以获得小肠重量。

看完此视频后，您应该对如何进行、收集和确定小肠损伤的重要终点有一个良好的理解。并有效地获取可重复的数据。不要忘记，使用 5FU 和 BrdU 等化合物可能很危险，执行这些程序时应始终采取预防措施，例如使用实验室外套、手套和烟罩。