Kemoterapiye bağlı mukozitin bu modeli, farelerde küçük bağırsak hasarı ve kompansatör hiperproprolifesusun önemli uç noktalarını ve çoğalan belirteçlerini belirlemek için kullanılabilir. Bu yöntem zaman ve maliyet etkin ve yürütmek kolaydır. Bu gibi standart laştırılmış bir yöntemle, analitik uç noktaları birkaç varyasyonla karşılaştırmak daha kolaydır.
5-Florauracil veya 5FU mukozitis indüksiyonu için, uygun 5FU hacmine sahip 19 milimetrelik bir iğne ile 27 gauge ile donatılmış 1 mililitrelik bir şırınga yükleyin ve alıcı bir fareyi manuel olarak dizginle. Fareyi sağlam ama nazik bir şekilde tutarken, hayvanın ventral tarafını ortaya çıkarve iğneyi karın alt kadranlarından birinde intraparitoneal kaviteye yerleştirin. Sonra, uygun iğne yerleştirme sağlamak ve 5FU enjekte etmek için aspire.
Uygun deneysel uç noktada, 4-Bromo-Deoksiürin veya BrdU niceliksel, 5FU yaralı hayvan fare tartmak ve bir duman kaputunda intraperitoneal enjeksiyon ile BrdU kilogram başına 5 miligram teslim. BrdU injetion sonra 150 dakika, ayak tutam yanıt eksikliği onaylamak, anestezili farenin ağırlığını kaydetmek ve supine pozisyonda hayvan yerleştirin. Karın boşluğu ortaya çıkarmak ve pnömotoraks tanıtmak için göğüs boşluğu bir kesi yapmak için bir laparotomi gerçekleştirin.
Pylorus üstün kesin ve dikkatle çekum ulaşılır kadar hayvan uzak bağırsak dokusu geri ayıklayın. Forceps kullanarak, yavaşça proksimal lümen kapalı kenetlemek ve tuzlu ile ince bağırsak floş için 25 gauge iğne ile donatılmış bir 10 mililitreşşöyiş şırınga kullanın. Daha sonra temiz leke leme kağıdı üzerine dikkatlice fazla tuz çözeltisi kaldırmak için boşaltılmış bağırsak yerleştirin.
Doku toplama için, enjekte edilen hayvandan ince bağırsağı az önce gösterildiği gibi toplayıp, temizlenen dokunun ağırlığını kaydedin. Histolojik işlemden sonra doku, hasat edilen dokunun histolojik fotoğraflarını elde etmek için kameraya bağlı bir ışık mikroskobunun 10x hedefi altında görüntülenebilir. BrdU immünoreaktif hücrelerinin alanını ölçmek için, J görüntüsüne ilgi imajını açın ve sahne mikrometre görüntüsünü açın.
Bilinen bir mesafeyi tanımlamak ve çözümleme menüsünde ayar ölçeğini seçmek için mikrometre görüntüsüne düz bir çizgi çizmek için düz çizgi seçim aracını kullanın. Bilinen uzaklık kutusuna bir değer girin ve uzunluk birimi kutusundaki uzunluk birimini tanımlayın. BrdU immünoreaktif hücrelerinin alanını ölçmek için ilgi çekici bir görüntü açın ve görüntü türü menüsünün altında renkli grafikleri 8-bit olarak ayarlayın.
İşlemle geliştirilmiş kontrast altında görüntünün karşıtlığını artırın ve doymuş pikselleri %0,4'e ayarlayın İmmüno-pozitifliği segmentize etmek ve görüntü ayarlamasını seçmek için görüntüye bir eşik uygulayın. Yüzde 10 ila 20 civarında bir eşik seçmek için eşik çubuğunu hareket ettirerek eşik ve kırmızıyı seçin. Ardından, iyi yönlendirilmiş bir şifreleme seçin ve çevresindeki alanı işaretlemek için serbest seçim aracını kullanın.
Eşik alanını ölçmek için çözümsekmesini açın ve parçacıkları analiz et. Çözümleme parçacık penceresinde, boyutu 20'den sonsuza kadar ayarlayın ve kutu piksel birimlerini tıklatın. Daireselliği sıfıra sıfıra ayarlayın ve gösteriyi ana hatlara ayarlayın.
Ardından ekran sonuçlarını tıklatın, özetleyin ve delik kutularını ekleyin. Ölçüm sonuçları özet penceresinde görüntülenir. Şifreleme derinliğini ölçmek için Zen Light'ta bir görüntü açın ve kameraya bağlanın.
20x hedefiyle kamera modunda anlık görüntüleri alın ve anlık fotoğrafı açmak için işleme moduna geçin. Ölçü görünümüne geçin. İyi yönlendirilmiş bir şifrelemenin alt kısmında bir satır başlatmak için satır aracını kullanın ve sırayı crypt'in üst kısmında tamamlayın.
Daha sonra ölçümleri dışa aktarın ve şifreleme derinliğinin ortalamasını hesaplayın ve yükseklik olarak doldurun. İnce bağırsak ağırlığı 2 günden 4. Not, gün 5, ağırlık tedavi hayvanlarda gün 0 ağırlığı önemli ölçüde farklı değildir.
BrdU'nun kuruluş tarafından ölçülen çoğalması 1 ve 2. Bu hiperprolifesyon da crypt derinliği ölçerken gözlenir. Mukozitin rejeneratif evresinde, BrdU birleşme ve kripto derinliği arasında akut evrede gözlenmeyen güçlü bir korelasyon vardır, bu da mukozitin akut evresinde kripto derinliğinin uç nokta olarak kullanılmasının uygun olabileceğini düşündürmektedir.
Transgenik fareler, yetersiz L-hücre salgısı ile, vücut ağırlığı önemli bir kayıp ve iyileşme aşamasında ince bağırsak ağırlığında bir azalma göstermek, yabani tip 5-FU farelerde gözlenen göre. Ayrıca, transgenik fareler, kriptolar hem vahşi tip farelere hem de sağlıklı kontrollere göre önemli ölçüde daha kısa olduğundan telafi edici hiperprolifelasyon gösterememaktadır. Bu işlemi denerken, tamamen ince bağırsak boşaltmak için emin olun, ve sadece ince bağırsak ağırlığı elde etmek için doku tartma önce aşırı tuzlu kaldırmak için.
Bu videoyu izledikten sonra, nasıl yürütmek için iyi bir anlayışa sahip olmalıdır, toplamak, ve ince bağırsak yaralanması önemli uç noktaları belirlemek. Ve etkili bir şekilde çoğaltılabilir veri elde etmek için. 5FU ve BrdU gibi kimyasal bileşiklerle çalışmanın tehlikeli olabileceğini ve bu işlemleri gerçekleştirirken laboratuvar önlüğü, eldiven ve duman başlığı kullanmak gibi önlemlerin her zaman alınması gerektiğini unutmayın.
