该协议提供了一种评估某一因素参与阿拉比多普西斯双重受精的方法。受精状态可从精子核的形态中一目了然地判断,因此可以快速获取数据进行统计分析。该方法是特异性评估在阿拉伯表型受精表型。
仍然有未知的施肥调节器,即使在阿拉伯。该方法对于未来未知受精因子的功能分析是有用的。掌握快速、完整处理奥武尔的技能对于本分析的成功非常重要。
首先,在16小时的灯光下和生长室的8小时黑暗周期下,在22摄氏度下生长阿拉伯沙利亚拉。用剪刀切割和去除第一个开发的花茎,以促进轴芽的发展。切断第一根茎后两到三周,测量植物高度。
高度超过25厘米的植物被认为是大力生长的植物,适合分析。要消瘦,在阶段 11 中寻找花蕾,顶部有花瓣。使用数字五钳去除花蕾的花瓣、花瓣和花蕾。
消瘦后 15 至 18 小时,通过用钳子捏紧灯丝,在第 13 阶段以 HTR10-mRFP 花背景的 DMP9-敲击线进行固定。要授粉, 轻轻地拍拍一个消瘦的小便的耻辱几次与脱喜的安瑟。授粉后七到八小时,收集皮蒂尔,并放在双面胶带上。
然后,用钳子轻轻按压,以固定胶带上的皮斯蒂尔。在解剖显微镜下,使用注射针切断卵巢的上端和下端。移动注射针的尖端,沿凹槽的两侧切开卵巢壁。
小心切割,以便不分离真菌和传输道。永远的卵巢墙。捏紧与奥武尔连接到的隔膜的底座,然后用钳子小心地将其提起。
将奥弗将转移到滑动玻璃上的一滴水中,并在荧光显微镜下用盖玻璃轻轻盖住,进行观察。在配备荧光滤波立方体的荧光显微镜上,将客观透镜调整为 20 倍或 40 倍。获取含有标有mRFP的精子核的奥武尔的图像。
确认胚胎囊中标有 mRFP 标记的精子核的数量。确认胚胎囊中每个 mRFP 标记的精子核的形状和位置。本研究中,受精表型由卵巢精子核信号形态判断。
大多数卵子在卵细胞微缩侧和中央细胞字符端侧含有两个脱膜 mRFP 标记的精子核。这表示成功的双重受精。此外,还观察到在中央细胞核中含有脱膜mRFP标记的精子核,以及细胞外一个浓缩的mRFP标记的精子核,表明单一受精。
在双受精失败的情况下,在卵细胞和中心细胞的边界处观察到两个浓缩mRFP标记的精子核。在使用具有HTR10-mRFP花粉背景的DMP9-敲击线进行分析时,很少观察到含有单个浓缩mRFP标记精子核或三个或更多mRFP标记精子核的卵子。结合女性标记线的使用,可以分析更准确的受精状态。
例如,可以判断游戏融合后和卡约加米之前受精状态。是的,受精过程分为几个步骤。每个施肥调节器所涉及的问题,其中的步骤可以通过这种改进的方法回答。
它将提供对植物性繁殖的更深入的了解。