考达尔静脉葡萄糖注射剂在益生菌小鼠中检测共享血液供应的建立

本协议为循环奇体主义提供了一种改进的验证方法，也为生物医学研究成功建立寄生虫模型提供了一种方法。与现有的寄生虫病中血液志智检测方法相比，我们的协议既安全又简单，能够快速可靠地进行验证。虽然这种方法是特定在寄生虫病模型中检测血液千叶病的，但它可以应用于任何涉及寄生虫学程序的生物医学研究。

最具挑战性的一步是葡萄糖注射。因此，在进行实验程序之前，请务必练习尾静脉注射，或使用静脉视觉小鼠尾部固定器。在确认对踏板反射缺乏反应后，将两只20至25克麻醉的C57黑色6雄性小鼠放在超膝位置，并用电剃须刀彻底剃光一只小鼠的左侧和第二只小鼠的右侧，从肘部上方约1厘米到膝盖以下一厘米。

在将毛发膏去除任何剩余头发之前，先在每只动物的清除皮肤上切开纵向皮肤切口，从肘部上方 0.5 厘米到膝盖关节以下 0.5 厘米不等，然后轻轻地将皮肤从皮下筋膜上分离。用 3- 0 缝合连接副生物的奥勒克拉农和膝盖，用连续 5-0 缝合剃光的皮肤。然后皮下注射0.5毫升0.9%氯化钠以防止脱水，并在肌肉内每25克小鼠注射10毫克曲马多，以减轻疼痛，每天注射到每只小鼠三天。

为了验证葡萄糖波动中副生物之间节流的成功构建，在副生物手术后的第10天，将供体小鼠固定在静脉视觉小鼠尾部固定器中，并使用70-75%乙醇浸泡的棉球摩擦一个副生物尾侧的果氏静脉。将一毫升注射器针头插入距离尾尖两到四厘米的胆碱静脉，并尽可能与静脉平行，在100微升盐水溶液中将每公斤1至2克葡萄糖注射到供体中，为期10秒。接下来用剪刀从供体和接受动物身上取下手趾，以便注射后在不同时间点收集一滴血。

然后将每个血液样本的一滴添加到血糖仪测试条的中心，以检测葡萄糖水平。为了验证埃文斯蓝色染料吸收剂的循环成功构建，将200微升0.5%的埃文斯蓝色反面体注入供体小鼠，并在两小时后通过心脏穿刺从两个寄生虫中采集血液。通过离心分离血清，将血清转移到锥形管中，以0.9%氯化钠的1比50的比例稀释。

然后在分光光度计上测量稀释血清样品在620纳米的吸光度。在这项对6只供体小鼠血糖水平的代表性分析中，在通过尾静脉注射100微升葡萄糖后，血糖急剧上升至每升26.5微摩尔。。血糖水平然后逐渐下降到13.3微升每升在60分钟。

在接受小鼠中，注射后血糖缓慢升高，在15分钟内达到第一个峰值水平。Evans蓝色染料在准生物血清中的浓度也表明循环志结的成功构建，可以清楚地观察到副生物之间的皮下血管结。在寄生虫在寄生虫手术后15天没有建立血液反应的寄生虫中，接受小鼠在葡萄糖注射到供体动物后60分钟内没有表现出血糖水平升高。

两个接受者中埃文斯蓝的血液浓度也未升高，表明葡萄糖波动法与埃文斯蓝法一样敏感。此外，由于葡萄糖水平迅速升高，在葡萄糖注射一小时后，血液胰岛素水平明显下降，并恢复到正常水平三小时，表明注射葡萄糖对胰岛素代谢的影响是可恢复的。小心确保针头直接插入尾静脉。

在用这种方法确认准生物的血液囊反应后，可以研究活的准生物动物的生理病理变化。