在测量昼夜时间、偏好和行为的个体差异时，术语和方法不一致。该协议结合了黄金标准技术，用于对昼夜表型进行分类，并进行日间性能测试。嗯，这个协议的主要优点是，我们可以通过查看昼夜阶段和睡眠行为来准确评估昼夜表型，这可以在他们家庭环境中的个人中完成。
来自萨里大学的谢丽尔·伊舍伍德将展示参与者的过程。邀请符合包含条件的参与者参加初始会议。并获得所有有兴趣参加实验的参与者的书面知情同意。
请学员填写慕尼黑计时型问卷，该问卷评估睡眠、唤醒变量和工作及自由日光线照射的个体差异。对于生理样品采集，预标记七毫升聚丙烯收集管，并标有参与者 ID 号，早晚，然后单独采样编号。不同的颜色标签也可用于早晚取样管，以帮助区分样品。
为早晚协议准备样本收集记录表，允许参与者在采集样本后对样本进行时间戳，包括参与者 ID 号、季节性信息日期和计算照片周期的位置。至关重要的是，通用时间是用来确保与.m和.m。
时间代码。演示如何收集唾液样本，告知参与者起床前醒来后立即采集早晨样本至关重要，并且必须在昏暗的灯光下采集晚间样本，最好是红灯。如果可能，研究人员应该对此进行测量。
指示学员在自由日收集样品，当他们能够上床睡觉，并在首选时间醒来，而无需报警。给每个参与者一个手腕活动监测器，或行动图，穿至少两个星期，以收集休息和活动模式，并在整个研究期间轻数据。设置每个行为图以收集活动数据以进行休息和活动分析，根据所需参数设置参数。
指导学员如何使用行为图，确保他们佩戴在非显性手腕上，并防止套管覆盖设备以收集光数据。结合行为学，并方便睡眠，从行为图数据派生的唤醒分析，给每个参与者一个睡眠日记，每天完成。对于皮质醇觉醒反应早晨样本收集，让参与者在醒来时收集样本，同时仍然在床上收集到适当标记的样品管中，每15分钟一次，第一小时每30分钟评估一次， 然后一到两个小时。
收集所有样品后，参与者应将样品存放在零下20摄氏度的冰柜中，直到研究团队采集。对于昏暗的褪黑激素发作，参与者应坐在室内昏暗的灯光下，并在习惯性睡前3至4小时，直到习惯性睡前一至两小时，在适当的小瓶中收集唾液样本。学员还应记录每个样本的取用时间。
在可能的情况下，研究人员应测量光条件，以监测强度和光谱组成。对于晚间抽样，参与者必须了解在昏暗的光线条件下保持在室内坐姿的重要性。参与者可以使用厕所，或在样品之间饮用不含咖啡因的饮料，只要他们在收集下一个样品之前再次坐了 15 分钟。
确保所有其他房间具有相同的光线条件，以便参与者在采样期间保持昏暗的灯光，最好是红灯。如果在样品之间消耗食物，参与者必须在收集下一个样本前 15 分钟用水洗掉嘴。收集所有样本后，参与者应将其样本存放在零下20摄氏度的冰柜中，直到研究团队收集。
日间性能测试可以在家庭或实验室进行，并且应该根据研究假说根据特定时钟时间所调查的时间点数进行排列。在检索唾液样本和睡眠日记后，从睡眠日记中提取每日睡前和唤醒时间，并输入这些数据到制造商软件中，以获取与研究相关的行为变量。要确定每个时间点参与者唾液样本中的褪黑激素和皮质醇浓度，请根据标准协议对每个参与者的样本进行放射性免疫测定。
计算单个 DLMOs 作为褪黑激素浓度超过三个基线初始唾液集合的两个标准差的时间点。计算皮质醇峰值作为早晨皮质醇觉醒反应中记录的最高皮质醇浓度的时间。如果变量属于早期昼夜表型类别，则变量应分配为零;如果变量属于中间昼夜表型类别，则应分配为零;如果变量属于晚期昼夜表型类别，则应分配为 2 个。
从收集的五个变量中计算总昼夜表型得分。根据此分数，还可以按表中所示确定子类别。所有被分类为早期昼夜表型的参与者得分都在零到一之间。
所有晚昼夜表型参与者的得分都在8到10之间。为了确认这个代表性实验的结果，对每个昼夜表型变量的组平均值进行了比较。其他睡眠变量（包括睡眠持续时间、效率和延迟）在各组之间没有显著差异。
自由日间纠正的中睡眠明显与昏暗的褪黑激素发作、皮质醇觉醒反应的高峰时间、睡眠发作和唤醒时间显著相关。这些数据表明，不同的昼夜表型组在睡眠开始、偏移时间以及生理变量上表现出明显的差异。在卡罗林斯卡嗜睡量表和心理运动警戒任务的整个群体级别观察到了显著的日间变化。
当对每组分别进行分析时，主观嗜睡表现出显著的日间变化，ECP报告晚上高嗜睡，LCP在早晨的嗜睡率最高。对于精神运动警惕性能，在 LCP 中发现显著的日间变化，但在 ECP 中则不发现。必须清楚地解释协议的每一步，并确保学员在设置访谈期间了解，以最大限度地提高学习合规性。
一旦参与者被分类为昼夜表型，性能测试元素就可以被修正，改变时间，增加时间点，或者根据研究目标使用不同的任务来改变。该协议可用于任何需要准确和彻底评估昼夜表型的研究，作为纳入和排除标准的筛选工具，以及在时间敏感研究中控制昼夜表型。这种方法提供了一个详细的方法，结合黄金标准生物相标记与客观和主观的睡眠模式，以确定个别昼夜表型。
