יש מיסוף ומתודולוגיה לא עקביים בעת מדידת הבדלים אינדיבידואליים בתזמון, העדפה והתנהגות של סביבה. פרוטוקול זה משלב טכניקות סטנדרטיות של זהב לסיווג פנוטיפים שחוריים ולעריכת בדיקות ביצועים יהודיות. ובכן, היתרון העיקרי של פרוטוקול זה הוא שאנחנו יכולים להעריך במדויק פנוטיפים סירקדיים על ידי התבוננות הן בשלב הביולוגי והן בהתנהגות השינה, וזה יכול להיעשות עם אנשים בסביבת הבית שלהם.
הפגנת תהליך המשתתפים תהיה שריל אישרווד מאוניברסיטת סארי. הזמן משתתפים שנוהים בקריטריוני ההכללה להשתתף בפגישה ראשונית. ולקבל הסכמה מדעת בכתב מכל המשתתפים המעוניינים לקחת חלק בניסוי.
בקשו מהמשתתפים להשלים את שאלון הכרונוטיפ של מינכן, אשר מעריך הבדלים אינדיבידואליים בשינה, משתני התעוררות וחשיפה לאור בעבודה ובימים חופשיים. עבור איסוף מדגם פיזיולוגי, טרום תווית שבעה צינורות איסוף פוליפרופילן מיליליטר עם מספר הזיהוי משתתף, בוקר או ערב, ולאחר מכן מספר דגימה בודד. תוויות צבעוניות שונות יכולות לשמש גם עבור צינורות דגימה בבוקר ובערב כדי לעזור להבחין בין דגימות.
הכן גליון רשומות איסוף לדוגמה עבור פרוטוקולי הבוקר והערב כדי לאפשר למשתתפים לחותמת זמן של הדגימות לאחר הצילום, כולל מספר מזהה משתתף, תאריך למידע עונתי ומיקום לחישוב תקופת התמונה. זה קריטי כי הזמן האוניברסלי משמש כדי להבטיח שאין בעיות עם .m. ו p.m.
קודי זמן. להדגים כיצד לאסוף את דגימות הרוק, להודיע למשתתפים כי חיוני לרכוש את דגימות הבוקר מיד עם התעוררות לפני לקום מהמיטה, כי דגימות הערב יש לרכוש באור עמום, רצוי, אור אדום. חוקרים צריכים למדוד את זה, אם אפשר.
הורה למשתתף לאסוף את הדגימות ביום חופשי כאשר הוא מסוגל ללכת לישון ולהתעורר בזמנים מועדפים, ללא צורך באזעקה. תן לכל משתתף צג פעילות פרק כף היד, או actigraph, להיות משוחק לפחות שבועיים כדי לאסוף דפוסי מנוחה ופעילות, ונתונים קלים לאורך כל תקופת המחקר. הגדר כל actigraph כדי לאסוף נתוני actigraphy עבור ניתוחי מנוחה ופעילות, הגדרת הפרמטרים על פי מה שנדרש.
הנחה את המשתתפים כיצד להשתמש ב- actigraphs, להבטיח שהם לובשים אותו על פרק כף היד הלא דומיננטי שלהם, ולמנוע שרוולים לכסות את המכשיר כדי לאפשר איסוף נתונים קלים. בשילוב עם actigraphy, ועל מנת להקל על השינה, ניתוח התעוררות הנגזר מהנתונים האקטגרפיים, לתת לכל משתתף יומן שינה להסתיים על בסיס יומי. לקבלת אוסף מדגם הבוקר של תגובת התעוררות קורטיזול, יש למשתתפים לאסוף את הדגימות עם התעוררותם בעודם במיטה לתוך צינורות מדגם המסומן כראוי, כל 15 דקות לשעה הראשונה, והערכה כל 30 דקות במשך שעה עד שעתיים הקרובות.
כאשר כל הדגימות נאספו, המשתתפים צריכים לאחסן את הדגימות שלהם במקפיא במינוס 20 מעלות צלזיוס עד לאיסוף שלהם על ידי צוות המחקר. עבור הופעת מלטונין אור עמום, המשתתף צריך לשבת בבית תחת אור עמום, ולאסוף דגימות רוק בבקבוקון המתאים כל 30 דקות משלוש עד ארבע שעות לפני השינה הרגילה עד שעה עד שעתיים לאחר השינה הרגילה. על המשתתף גם לתעד את השעה שבה נלקחת כל דגימה.
במידת האפשר, החוקרים צריכים למדוד את תנאי האור על מנת לפקח על אינטנסיביות הרכב ספקטרלי. לדגימה בערב, חיוני שהמשתתפים יבינו את החשיבות של הישארות יושבים בבית בתנאי תאורה עמומים. המשתתפים רשאים להשתמש בשירותים, או לצרוך משקה ללא קפאין בין דגימות, כל עוד הם יושבים שוב במשך 15 דקות לפני הדגימה הבאה אמורה להיאסף.
ודא כי כל החדרים האחרים יש את אותם תנאי תאורה, כך המשתתף נשאר באור עמום, רצוי אור אדום, למשך תקופת הדגימה. אם מזון נצרך בין הדגימות, המשתתפים חייבים לשטוף את פיהם עם מים 15 דקות לפני איסוף המדגם הבא. לאחר שכל הדגימות נאספו, המשתתפים צריכים לאחסן את הדגימות שלהם במקפיא במינוס 20 מעלות צלזיוס עד לאיסוף שלהם על ידי צוות המחקר.
ניתן לארגן את בדיקות הביצועים היורנליות בבית או במעבדה, ויש לארגן אותן על סמך השערת המחקר בהתבסס על מספר נקודות הזמן הנחקרות בזמני שעון ספציפיים. עם אחזור דגימות הרוק ויומן השינה, יש לחלץ את זמני השינה היומיים ולהתעורר מיומנים ישנים, ולהזין נתונים אלה לתוכנת היצרן כדי לקבל משתנים אקטיגרפיים הרלוונטיים למחקר. כדי לקבוע את ריכוז מלטונין וקורטיזול בדגימות הרוק של המשתתפים בכל נקודת זמן, לבצע immunoassay רדיו עם דגימות של כל משתתף על פי פרוטוקולים סטנדרטיים.
חשב את ה- DLMOs הבודדים כנקודות הזמן שבהן ריכוזי מלטונין חורגים משתי סטיות תקן של שלושת אוספי הרוק הראשוניים הבסיסיים. חישבו את שיא הקורטיזול כזמן ריכוז הקורטיזול הגבוה ביותר שתועד במהלך תגובת התעוררות הקורטיזול בבוקר. יש להקצות משתנה כאפס אם הוא נמצא בקטגוריית הפנוטיפ הביולוגית המוקדמת, אחד אם הוא בקטגוריית פנוטיפ צירקדי ביניים, ושניים אם הוא בקטגוריית פנוטיפ צירקדי מאוחר.
חשב ציון פנוטיפ סירקדי כולל מחמשת המשתנים שנאספו. בהתבסס על ציון זה, ניתן לקבוע קטגוריות משנה גם כמצוין בטבלה. כל המשתתפים סווגו כפנוטיפים הביולוגיים המוקדמים היה ציון בין אפס לאחד.
וכל המשתתפים בפנוטיפ הביולוגי המנוח קיבלו ציונים שבין 8 ל-10. כדי לאשר את התוצאות של ניסוי מייצג זה, ממוצעי הקבוצה הושוו עבור כל משתנה פנוטיפ סירקדי. משתני שינה אחרים, כולל משך השינה, היעילות וההשהיה, לא היו שונים באופן משמעותי בין הקבוצות.
אמצע השינה מתוקן בימים חופשיים היה בקורלציה משמעותית עם הופעת מלטונין אור עמום, זמן שיא של תגובת התעוררות קורטיזול, תחילת שינה, ולהתעורר זמן. נתונים אלה הצביעו על כך שקבוצות הפנוטיפים הביולוגיות השונות הפגינו הבדלים ברורים בהתפרצות השינה שלהן, בזמני הקיזוז, כמו גם במשתנים הפיזיולוגיים שלהן. וריאציות יהוה משמעותיות נצפו בכל רמת הקבוצה עבור סולם ישנוניות קרולינסקה ומשימת דריכות פסיכומוטורית.
כאשר כל קבוצה נותחה בנפרד, ישנוניות סובייקטיבית הראתה וריאציות יהוה משמעותיות, כאשר ECPs דיווחו על ישנוניות גבוהה בערב, ועל ישנוניות הגבוהה ביותר של LCPs בבוקר. עבור ביצועים ערנות Psychomotor, וריאציות יהוה משמעותיות נמצאו LCPs, אבל לא ECPs. חשוב להסביר כל שלב בפרוטוקול בבירור ולוודא שהמשתתף מבין במהלך ראיון ההתקנה כדי למקסם את התאימות ללימודים.
לאחר שהמשתתפים מסווגים לפנוטיפים סירקדיאן, ניתן לתקן את אלמנט בדיקת הביצועים, לשנות תזמונים, להגדיל את קנה המידה על ידי הגדלת נקודות זמן, או לשנות, באמצעות משימות שונות, בהתאם למטרות המחקר. פרוטוקול זה יכול לשמש בכל מחקר הדורש הערכה מדויקת ויסודית של פנוטיפ סירקדי ככלי סינון לקריטריוני הכללה והדרה, וגם כדי לשלוט על פנוטיפ סירקדיאן במחקר רגיש בזמן. גישה זו מספקת שיטה מפורטת לשילוב סמני פאזה ביולוגיים בתקן זהב עם דפוסי שינה אובייקטיביים וסובייקטיביים כדי לקבוע פנוטיפים ביולוגיים בודדים.
