小鼠下肢诱导继发性淋巴水肿的修订方法

这种方法的总体目标是在小鼠的后肢中诱导一致的继发性淋巴水肿，而不会引起严重的发病率。这种方法可用于诱导小鼠后肢的继发性淋巴水肿。这种方法的主要优点是，它解决微不足道的淋巴水肿持续至少八个星期，而不会造成严重的发病率。

新到这个程序的人可能与显微外科技术斗争。因此，我们建议进行显微外科训练和几个实践程序，以确保成功的结果，但也准备研究人员，以便他或她可以更有效地执行程序。设置辐射源，并麻醉鼠标，如协议中所述。

放置一个 1.5 毫米厚的铅垫，以确保只有进行手术的区域得到辐照。所示示例是手术后鼠标以澄清该区域。管理10次灰色辐照的剂量。

研究人员在使用辐射时必须采取预防措施。在这项实验中，所有的辐照是在辐射绝缘室进行的。辐射源只有在所有人员离开房间时才打开。

称重小鼠手术前。通过爪子或尾部挤压测试检查麻醉深度。剃掉为手术选择的腿。

将氧气流量设置为每分钟 0.8 升。用鼻锥连接它。涂抹眼科软膏。

注射0.5毫升的盐水皮下，最好是在小鼠的擦伤，以防止在手术期间低伏血症。将鼠标放在手术布上。将鼻锥放在鼻子上。

用胶带轻轻固定后肢的端部，防止小鼠在手术过程中移动。用光滑的钳子抬起皮肤，并夹住一个小开口，约五毫米的近在波普莱特福萨。将锋利的剪刀滑入开口，夹向膝盖，使切口在膝盖上方结束。

在剪裁时用钳子抬起皮肤，确保不要刺穿基础血管。将鼠标移到易用位置并完成圆周切口。将皮肤解剖到角度上方几毫米。

记住，在整个过程中，用无菌盐水保持组织湿润。用弹性缩回器缩回近位伤口的皮肤。并确保坐骨神经脉是可见的，如图所示。

在第二个和第三个地趾之间注射0.01毫升专利蓝色V皮。轻轻按下爪子几次，通过显微镜观察专利蓝色 V 的分布。需要可视化的结构是， 近近淋巴细胞， PLV， 波普莱特淋巴结， PLN， 第一个大元淋巴体， DLV1， 和第二个近头淋巴细胞， DLV2.

放大以可视化PLV并使用10-0尼龙缝合线进行平分。按爪子，确保没有专利蓝色通过近向连字。如图所示，将两个大肠淋巴血管拉大。

再次按数次爪子，以确保没有专利蓝色 V 通过近向连字。在此示例中，可以看到其中一个淋巴血管因连结阻碍淋巴流动而破裂。去除波光淋巴结，淋巴结有一个光滑的珍珠样表面，并着色的专利蓝色V与周围的脂肪组织对比。

在取出内焦脂肪垫之前，如图所示，将这种容器烧灼。然后一块取出脂肪垫。确保没有活动出血。

这是位于金内淋巴结的示例。位于内皮脂肪垫中的淋巴结很少被专利蓝色 V 着色，并且很难与脂肪区分开来。将脂肪垫切在一块是确保淋巴结已被移除的最佳方法。

缝合皮肤边缘到肌肉筋膜，用6-0尼龙缝合使用钳子和针架，留下两到三毫米的差距，以限制表面的淋巴流动。这是完成缝合的一个例子，在波莱特叶，后肢的侧侧，膝盖以上，和后肢的中侧。管理镇痛和重量小鼠手术后，然后把它放在一个加热的柜子恢复。

重复手术前辐照程序。此图显示了手术后八周内三项独立研究的总均后肢体积。总共包括31只老鼠。

x 轴表示手术后几周。y 轴表示后光体积（以立方毫米为单位）。箭头条表示标准偏差。

预计手术引起的肿胀和诱发的淋巴水肿将在前四周内减少。前四周后，我们看到淋巴水肿的相对稳定状态。在八周内，控制后肢的体积增加，因此严格地说淋巴水肿后肢和控制后肢之间的体积差异，这是出乎意料的。

据推测，原因是小鼠在手术后的几周内使用非手术后肢比手术后肢使用更多。这可能导致控制后肢的肥大，并解释体积的增加。有关三项研究的个别数字，请阅读协议。

下表显示了 Sidak 对三个包含的研究的组合体积测量的多重比较测试。计算的P值表明，在全部八周的随发中，有诱发淋巴水肿的后肢与对后肢之间有统计学上显著的差异。有关三个项目的单独统计分析，请阅读协议。

此方法诱导具有统计显著性的淋巴水肿，持续至少八周。该手术可用于研究淋巴水肿的佩特性，研究新的治疗方案。看完这段视频后，你应该已经了解了如何诱导继发性淋巴水肿在小鼠的后肢，使用微外科和手术前和手术后照射的组合。

一旦掌握，外科手术可以在45分钟内完成。