利用活体中鸡胆膜研究妇科和泌尿癌

将肿瘤包到鸡胆膜（CAM）上，可用于肿瘤原性、治疗效果或细胞相声的研究。此方法允许在体内免疫耐症环境中实现具有成本效益的快速肿瘤生长。使用CAM模型，可以使用细胞系甚至患者肿瘤标本快速测试新的治疗方法。

该协议最关键的方面是确保适当的 CAM 形成，并且在打开卵子时不会中断 CAM 或血管。在发育的第七天或第八天，当CAM已经完全发育时，关闭卵子旋转器，将大约一到三个鸡蛋放入生物安全柜的蛋架中。关灯后，将一个鸡蛋蜡烛器放在蛋壳上，以识别和标记一个鸡蛋的空气细胞的位置，然后将蛋烛台移动到蛋壳上，以找到一个大血管网络，并尽可能旋转鸡蛋。

理想的血管会分支在鸡蛋的中间。使用标记来跟踪用于植入的血管。重新打开发动机罩中的光线后，使用装有碳化硅磨石的无绳旋转工具，直接在空气单元中心上钻一个小孔。

当大部分壳体被移除，但白色内膜完好无损时，钻另一个小孔，在那里血管窗口将打开，正如刚刚演示的。当第二个孔准备就绪时，使用 18 测量针轻轻刺穿空气细胞上的白色内膜，并注意白色内膜（而不是 CAM）在整个钻孔区域都被破坏。再次关闭发动机罩后，使用鸡蛋蜡烛器验证空气细胞是否已从蛋端转移到血管上的区域。

如有必要，将真空管插入在原气孔周围的移液器控制器中，然后轻轻吸附短脉冲来移动空气单元。标记空气单元在空气 CAM 边界内约 0.5 厘米的新位置的轮廓，并固定一块足够大的包装胶带，以覆盖新空气单元上的孔。在准备另外两个鸡蛋后，将鸡蛋返回到孵化器，并打开任何额外的卵子，在一到三组的实验，如演示。

当所有鸡蛋都打开后，将一到三个装有重新定位空气细胞的卵子转移到生物安全柜中的蛋架上，并使用装有圆形切割轮的无绳旋转工具，在空气细胞边界上完全切割一条小线，而不会中断 CAM 或血管。使用弯曲的剪刀，在剩余的空气细胞周围切割，在壳体中创建一个窗口，并验证胚胎的可行性。可行的胚胎将显示广泛的血管，清晰的白细胞素，胚胎运动，和/或可见的心跳。

在不可行的胚胎中，CAM可能看起来不透明，很少（如果有任何）存在，胚胎可能很小或没有运动或心跳。使用 Semkin 钳子，从无菌棉球中拉出小块棉花，轻轻印迹可行胚胎的 CAM 表面，以清除任何外壳灰尘和碎屑，然后用四分之一的六 x 七厘米透明薄膜敷料盖住壳开口，无需接触 CAM，即可将卵子返回孵化器，打开的窗户朝上。使用一块蛋架、鸡蛋旋转器的边缘或其他合适的物品来支撑任何不断滚动的鸡蛋。

为了准备癌细胞悬浮移植，从感兴趣的癌细胞培养中收获细胞，通过离心沉淀细胞。吸上一液，机械地重新暂停残余介质中的细胞。将细胞悬浮液放在冰上，使用移液器测量培养中的细胞体积。

然后以100万至200万细胞的浓度在20至100微升的介质中重新暂停，每毫升细胞外基质和任何生长因子或其他感兴趣的添加剂补充2.7至4毫克。对于癌细胞植入，使用不粘环，将多达六个卵子植入蛋架上，然后将透明薄膜敷料的边缘滚向打开的窗口，以从壳中取出薄膜。检查鸡蛋是否可行和健康。

理想的鸡蛋将有一个大容器与较小的分支容器在开放区域的中心。使用弯曲的虹膜钳，将无菌不粘环放在容器上，理想地在分支点上。使用无菌玻璃搅拌杆轻轻擦擦 CAM，将癌细胞悬浮液移液到环的中心。

当所有细胞都已交付后，用六厘米五分之一的透明薄膜敷料密封开口，并给卵子贴上适当的植入标记。然后将鸡蛋牢固地放在孵化器中，壳开口朝直。要植入癌细胞，无需使用不粘环，请将细胞悬浮液吸进适当大小的移液器尖端，并按住尖端的顶部小心地弹出移液器尖端，将尖端水平放入无菌的 10 厘米组织培养盘中。

装入小菜后，将菜放入37摄氏度的培养箱中15至30分钟，15分钟后检查聚合。少量的液体通常会泄漏出来，因为每个尖端被放置在菜中。使用此液体估计尖端内的聚合程度。

当矩阵准备就绪时，将一个尖端放在适当大小的移液器上，然后压压柱塞，以理想地将部分聚合的细胞悬浮液压到 CAM 上，理想地在一个大型发达容器的分支点上。使用这些方法，人类和穆林卵巢癌细胞系和原发性肿瘤片段都成功地移植了与体内其他模型中观察到的形态一致的肿瘤。在测试的肿瘤类型中，卵巢癌的生长不太明显，如果没有生物发光成像的帮助，通常看不到。

在植入时添加生长因子或激素的影响也可以使用这些方法进行测试。对于肾癌，从既定细胞系或原发性人类肾肿瘤片段中植入透明细胞肾细胞癌细胞可产生快速、健壮的肿瘤形成。此外，多个人类和穆林前列腺癌细胞系和人类膀胱癌细胞系和原发性肿瘤片已被用来建立肿瘤使用这个模型。

必须避免中断 CAM 和血管，并确保 CAM 在打开车窗时不粘附在外壳上。成功移植后，CAM 模型可用于评估肿瘤内不同细胞类型之间感兴趣的治疗或相互作用的疗效。