高光谱成像允许在样品中的精确位置获取光谱信息。例如，在单个晶体水平上推出光学各向异性。样本的光谱和空间数据的生成允许对样品进行比仅光谱学或荧光显微镜更详细的调查。
影响分辨率的大量可调参数起初可能看起来势不可挡。但是，制作检查表可能有助于熟悉系统。此技术需要手动调整映像硬件以及软件操作。
必须直观地说明这两个方面，以展示这两种方法如何相辅相成。与纳尔逊·鲁塔霍加一起演示手术的将是艾米莉·罗德里格斯，我实验室的博士后研究员。要设置用于高光谱成像映射的成像器配置，从显微镜阶段开始，沿着发射光束路径向探测器移动，请将光学立方体的位置保留在光学显微镜旁边空位，然后将共聚焦显微镜光学立方体置于该位置，以引导样品通过可见光路径的发射。
沿着光学路径向探测器移动，放置包含二色镜和滤波器的可见光学立方体，用于将可见发射定向到检测路径的位置。继续朝探测器的路径，将共通针孔光学立方体放在正确的位置，以引导光线穿过可见光检测路径并沿着此路径，将共分光谱仪光学立方体放在适当的位置，使发射的光到达探测器。当所有立方体都就位时，手动调整探测器的狭缝开口，以匹配所选针孔的大小。
然后，在 PHySpec 软件中，选择针孔的孔径。对于欧洲双氟乙酰甲酸单晶的超光谱成像映射，手动将光学显微镜的20倍目标置于样品下，然后按下显微镜左侧的白色按钮以打开白光。转动按钮下方的旋钮以调整亮度。
将显微镜右侧的前进旋钮设置为 R，将 20% 的信号发送到摄像机，将 80% 的信号发送到探测器。在 PHySpec 软件的彩色相机窗口中按播放以启动实时扫描。如果彩色相机窗口显示太暗或太黑的图像，请增加彩色相机选项卡下的曝光时间和/或增益值。
如果图像太亮，请减少曝光时间和/或增益值。要聚焦样品，请转动显微镜的旋钮以调整舞台上目标之间的距离，并打开宽带灯快门以允许对样品进行紫外线激发。然后将强度旋钮转动到所需位置，以控制宽带灯激发的强度。
单击"显示/隐藏比例图"可向晶体的亮场光学显微镜图像添加比例杆，并在紫外线全光或密闭照明下观察晶体图像。要在密闭照明或宽场照明之间进行选择，请使用斗杆和旋钮调整紫外灯场孔径的大小。在 SpectraPro SP 2300 选项卡下，选择一个波长来观察样品发射并调整探测器的曝光时间。
要获取序列器中的高光谱立方体，请单击加号以添加新节点，然后单击"共和成像器"。单击多频谱采集并输入所需的 X 和 Y 位置计数以及所需的步进大小。选择相机同步和可见发射映射的硬件选项，然后单击"是否"。
在音序器中，单击新添加的多频谱采集线以突出显示节点，然后单击"播放"以运行所选节点。要分析捕获的超光谱成像数据，例如，对于图像的光谱分布，请在"处理"菜单中选择"数据"和"裁剪"和"折弯"，以提高图像的信号与噪声比。对于发射强度配置文件，右键单击立方体图像并选择"创建 X 轮廓"以分析一条线。
拖动以选择区域，然后右键单击感兴趣的区域。选择"添加到图形"。将发射强度显示为目标物理位置的函数。
强度配置文件将显示在新图形中。要获取样本特定区域的发射频谱，请将光标悬停在立方体图像上，右键单击，然后单击矩形选择。拖动并单击以在所需区域上绘制选择形状。
然后右键单击感兴趣的区域，然后选择"向图形添加选择"。在"添加到图形"窗口中，选择"创建新图形"以显示目标的排放光谱，然后单击"确定"。然后在选择新区域之前保存获取的频谱。
此处显示了在正确焦点中调整样品后记录的晶体的亮场图像。可以清楚地观察到晶体的针状形态。在这里，可以观察到在紫外线激发下具有全照明或局部封闭照明的相同晶体的图像。
受限照明可用于研究晶体中能量或光传递的影响，这些影响可能会触发波导一样的行为。例如，在此图像中，在非直接在激发下检测到强发射，这表明通过晶体进行有效的能量迁移。从获得的多光谱立方体中，也可以以图像的形式获得光谱分布，表示特定波长。
特定发射波长的强度剖面和获得高光谱立方体任何像素或区域的发射光谱。例如，此分析的发射光谱显示了欧洲离子的最典型发射带。此外，沿不同晶体面的空间剖面表示尖端和侧面的发射更亮，可与三个空间方向的烷化物/烷化物离子距离相关。
要在高光谱立方体的合理记录时间获得良好的信号，调整显微镜配置、对焦和探测器曝光时间非常重要。发射紫外线激发和可见发射，该技术可采用近红外激发和近红外发射检测。这允许它适用于大量的发光材料。
光信号与一系列相关特征的相关性使得该技术对研究结构/属性关系非常有趣，包括纳米-生物相互作用的体外评估。
